7凋亡中的作用以及相关的分子机制。研究内容包括三个部分：一、观察TGF-β1在巨噬细胞RAW264.7凋亡中的作用和对TLR4受体表达的影响；二、观察TAK1在TGF-β1诱导巨噬细胞RAW264.7凋亡中的作用；三、探讨TAK1介导TGF-β1诱导巨噬细胞RAW264.7凋亡的相关分子机制。

研究方法与结果： 本课题实验分三部分进行： 第一部分应用流式细胞术检测TGF-β1刺激对巨噬细胞RAW264.7凋亡的影响,包括以下两个实验： 1、分别用5ng/ml、10ng/ml TGF-β1刺激巨噬细胞12小时,流式细胞仪检测巨噬细胞RAW264.7凋亡情况,结果显示TGF-β1具有诱导巨噬细胞RAW264.7凋亡的作用,且这种作用具有剂量依赖性； 2、流式细胞术检测TGF-β1刺激对巨噬细胞RAW264.7TLR4表达的影响,这部分实验分组如下：对照组,LPS组、TGF-β1组、LPS与TGF-β1联合刺激组、anti-TGF-β1中和抗体组,以及LPS与anti-TGF-β1中和抗体联合刺激组,检测结果显示,单独LPS、TGF-β1均能诱导巨噬细胞TLR4表达下降,并且者联合刺激时效应增强,LPS与anti-TGF-β1联合刺激和LPS单独刺激时相比,TLR4表达无明显变化,说明LPS与外源性TGF-β1具有协同抑制TLR4表达的作用。 第二部分利用电转染的方法在巨噬细胞RAW264.7中过表达TAKl,流式细胞术检测TAK1对TGF-β1诱导巨噬细胞凋亡的影响,包括以下两个实验： 确认细节 1、分别电转染10μg、15μg空质粒CMV、野生型质粒TAK1以及TAK1突变体TAK1K63W,60h后用lOng/ml TGF-β1刺激巨噬细胞30min,流式细胞术检测巨噬细胞RAW264.7凋亡情况,结果显示：与空质粒CMV、TAK1突变体TAK1K63W相比,TAK1具有明显抑制TGF-β1诱导巨噬细胞凋亡的作用,以10μg

TAK1抑制凋亡效应最明显。 2、检测TAK1在TAB1作用下对TGF-β1诱导巨噬细胞细胞凋亡的影响,实验分组如下：Empty plasmid组、TAB1组、TAKl组、TAK1与TAB1共转染组、TAK1K63W组、TAK1K63W与TAB1共转染组,结果显示TAK1具有抑制TGF-β1诱导巨噬细胞细胞凋亡的作用,并且在与TAB1共转染时,TAKl抗凋亡效应进一步增强。 第三部分探讨TAK1抑制TGF-β1诱导巨噬细胞凋亡的分子机制,包括以下两个实验： 1.TAKl对TGF-β1介导的巨噬细胞分泌TNF-α、IL-10等细胞因子的影响,实验分组如前,转染相应质粒入巨噬细胞,60h后,10ng/ml 此网站 TGF-β1刺激巨噬细胞24小时,ELISA检测炎性细胞因子TNF-α、IL-10,结果显示：与对照组相比,TAK1、TAK1与TAB1共转染组在TGF-β1刺激后TNF-α分泌减少,各转染组IL-10分泌与对照组相比无明显差异。 2.检测TAK1对TGF-β1介导的巨噬细胞凋亡相关分子的影响：实验分组如前,转染相应质粒入巨噬细胞,60h后,10ng/ml TGF-β1刺激巨噬细胞,提取蛋白,Western blot检测巨噬细胞中caspase-3活化情况,结果显示,对照组在TGF-β1刺激时,caspase-3明显活化,过表达TAK1后caspase-3活化受抑制。 结论： 1、TGF-β1具有诱导巨噬细胞RAW264.7凋亡的作用,且这种作用呈剂量依赖性；TGF-β1具有抑制巨噬细胞TLR4表达的作用。 2、在巨噬细胞RAW264.7中过表达TAK1能抑制TGF-β1诱导的巨噬细胞凋亡效应,TAB1具有促进TAK1抗凋亡效应的作用。 3、TAKl抑制TGF-β1介导的巨噬细胞的凋亡与TGF-β1刺激巨噬细胞分泌TNF-α相关,与IL-10无明显相关性；其凋亡信号传导与抑制caspase-3活化相关。
乙型脑炎(Japanese encephalitis, JE)是由日本乙型脑炎病毒(Japanese

encephalitis virus, JEV)引起的一种人畜共患病,患者多表现为发热、腹泻、头痛、恶心、意识水平下降、颤抖以及行动异常等,而猪群受感染后表现为明显生殖障碍。靶向中枢神经系统,引发中枢神经系统炎症反应,是乙型脑炎病毒导致人和动物发病、、死亡的主要因素。而小胶质细胞过度激活及其诱导的大量炎症因子分泌,则是JEV引发脑部炎症反应的重要途径。但JEV通过何种信号通路激活小胶质细胞,其分子机制如何等科学问题仍不清楚。 不 本研究首先从TLR3和RIG-Ⅰ信号通路入手,研究了JEV感染小鼠小胶质细胞之后炎症因子的表达、信号通路的激活情况。 具体研究内容如下： 以小鼠小胶质细胞系BV-2为体外模型,研究了乙型脑炎病毒在该细胞中的增殖情况,发现该病毒可以感染BV-2,但在该细胞中的增殖滴度较低,荧光定量检测C基因拷贝数在48h内增加不超过10倍。经荧光定量PCR与ELISA方法检测,乙型脑炎病毒感染能有效刺激细胞因子、趋化因子如TNF-α、IL-6、CCL-2表达量显著上调；同时,Western Blot检测结果显示TLR3、RIG-Ⅰ蛋白表达量因乙脑病毒刺激表现明显上调,且该病毒刺激能诱导信号通路激酶ERK、p38MAPK磷酸化蛋白及转录因子NF-κB、AP-1的核内表达量均显著上调。通过shRNA转染方法分别对TLR3和RIG-Ⅰ进行干扰,观察干扰后上述指标的变化,发现：ERK、p38MAPK蛋白磷酸化、转录因子NF-κB、AP-1的核内表达以及炎症因子表达均受到了不同程度的抑制,且细胞内病毒含量增加。表明TLR3与RIG-Ⅰ在乙脑病毒诱导小胶质细胞炎症反应与病毒增殖过程中起到了重要作用,且RIG-Ⅰ较TLR3更显著。
奶牛乳腺炎是世界范围内影响奶牛业最大的疾病。在众多能引起奶牛乳腺炎的病原中,S.

各治疗组小鼠与模型组对比一般状况均有不同程度的改善。 2.模型组小鼠肺组织p38、JNK、ERK蛋白及mRNA表达较正常组均显著升高（P<0.05）；清肺培元组与唐草片组对比，p38蛋白表达降低，差异有统计学意义（P<0.05）；清肺培元组与AZT组对比，JNK蛋白表达降低，差异有统计学意义（P<0.05）；清肺培元组与唐草片组对比，JNK蛋白表达降低，差异有统计学意义（P<0.05）；清肺培元组与AZT组对比，ERK蛋白表达降低，差异有统计学意义（P
【目的】

研究低氧促有丝分裂原因子（HIMF）调节大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖影响，并探讨Ca2+/PKC/MAPKs和PI3K/Akt/mTOR信号通路在此过程中的作用。 【方法】⑴将原代培养的大鼠PSAMCs随机分为对照组和低氧组H3h,H6h,H12h,H24h,H48h后，用荧光实时定量PCR和Western blotting分别检测每组的HIMFmRNA和蛋白表达变化；⑵构建过表达HIMF病毒，并用EDU法观察其对各组PASMCs增殖的影响；⑶过表达HIMF基因，将PSAMCs随机分为正常对照组（A组），空质粒转染组（B组）和过表达HIMF组（C组）。每组都依次单独加入EGTA（细胞外Ca2+螯合剂）、BAPTA-AM（细胞内Ca2+螯合剂）、A23187（Ca2+载体激动剂）、LY294002（PI3K抑制剂），Akt抑制剂检测各组PASMCs的P-PI3k，P-AktThr308，P-AktSer473，P-mTOR蛋白水平的变化;⑷过表达HIMF基因，分组同上，每组都依次单独加入EGTA（细胞外Ca2+螯合剂）、BAPTA-AM（细胞内Ca2+螯合剂）、A23187（Ca2+载体激动剂）、staurosporine（PKC抑制剂），检测各组PASMCs的p-PKC，p-p44/42（Thr202/Tyr204），p-p38（Thr180/Tyr182）蛋白水平的变化。 AC220半抑制浓度 不 【结果】 ⑴HIMF mRNA和蛋白在常氧组均少量表达，在低氧条件下，它们表达均明显增加，与对照组比较均有显著差异(P
目的：沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis，Ct）是导致沙眼、性传播疾病的重要病原微生物。炎症反应是Ct致病的基础，但其具体机制尚不明确。pORF5是由沙眼衣原体质粒基因编码、唯一一种分泌性质粒蛋白。NALP3炎性复合体是一类位于细胞核内多蛋白复合物，激活NALP3炎性复合体后可诱发产生炎症因子。本实验探讨pORF5质粒蛋白是否通过激活NALP3炎性复合体诱导THP-1细胞分泌IL-1β、IL-18炎症因子，以及p38MAPK信号通路与NALP3炎性复合体之间的关系。 方法：将pGEX-6p-1/pORF5原核表达载体转化XL1-blue菌，0.2mM

IPTG诱导表达pORF5融合蛋白。pORF5融合蛋白通过Glutathione Sepharose4B纯化和PreScission Protease切除制备没有GST标签的pORF5质粒蛋白。BCA法测量pORF5质粒蛋白浓度，SDS-PAGE分析和Western blotting鉴定pORF5质粒蛋白。用3～36μg/mL的pORF5质粒蛋白刺激经PMA处理的THP-1细胞，并于0h、8h、16h、24h、36h收集上清及细胞，ELISA检测IL-1β、IL-18的含量；Realtime-PCR检测NALP3炎性复合体和IL-1β的mRNA表达水平；Western blotting检测p38的磷酸化情况。利用RNA干扰技术沉默NALP3、ASC基因的表达，观察NALP3和ASC的mRNA表达、IL-1β和IL-18的表达水平及对p38MAPK信号通路的影响。用Caspase-1特异性抑制剂（Z-YVAD-FMK）和p38抑制剂（SB202190）预处理THP-1细胞30min后，再用24μg/mL的pORF5质粒蛋白分别刺激THP-1细胞30min和24h，ELISA分析其对IL-1β和IL-18产生的影响，Realtime-PCR分析其对NALP3炎性复合的mRNA的影响。 结果: （1）pGEX-6p-1/pORF5原核表达载体转化XL1-blue菌后，IPTG诱导表达54KD大小的pORF5融合蛋白，经PreScission

Protease切除后得到不含有GST标签的大小约28KD的pORF5质粒蛋白。 （2） pORF5质粒蛋白能以剂量和时间依赖性方式刺激THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18。用24μg/mL的pORF5质粒蛋白刺激THP-1细胞，IL-1β蛋白表达水平在24h达到最高，IL-18在16h达到最高。 （3） Realtime-PCR结果发现，pORF5质粒蛋白能刺激NALP3炎性复合体mRNA的表达；Western blotting结果发现，pORF5质粒蛋白能促进p38发生磷酸化。 没有 （4）NALP3-siRNA、ASC-siRNA转染THP-1细胞后，NALP3、ASC mRNA的表达水平分别降低31.5%、48%。NALP3-siRNA组IL-1β mRNA表达降低23%、ASC-siRNA组降低了39%。ELISA结果显示NALP3-siRNA组IL-1β和IL-18的表达分别减少27.7%、21%，ASC-siRNA组IL-1β和IL-18的表达分别减少44.1%、40.1%。Western blotting结果发现p38磷酸化水平与对照组无明显差异。 （5） Caspase-1抑制剂能降低IL-1β、IL-18的表达，分别降低41.9%和37.2%；p38抑制剂使IL-1β、IL-18表达降低，分别降低29.6%和37.8%，NALP3、ASC、Caspase-1及IL-1β的mRNA表达分别减少23%、31%、13%和23%。 结论: （1）pORF5质粒蛋白可通过激活NALP3炎性复合体诱导THP-1细胞分泌炎症因子IL-1β、IL-18。 （2）pORF5质粒蛋白激活的p38MAPK信号通路能够影响NALP3炎性复合体的激活。
目的：通过建立小鼠急性放射性肺损伤模型，观察甘草次酸对模型组小鼠的病理形态及肺组织中Smad2、Smad3、TGF-β1表达的影响，探讨甘草次酸抗急性肺损伤可能的作用机制。 材料和方法：将90只成年雌性C57BL/6小鼠随机分为四组，每组30只：(1)空白对照组（CG组）：不照射；(2)单纯照射组（IR组）：照射+生理盐水0.

Rab23对鳞癌Sa3细胞生长增殖的影响 1)选取口腔鳞癌Sa3细胞株，构建稳定过表达和干涉Rab23的Sa3细胞株；Western blot实验检测Rab23表达。结果显示：过表达Rab23组融合蛋白转染成功，干涉Rab23组，其表达较空载体组下降； 2)平板克隆形成实验检测Rab23对Sa3细胞增殖的影响。结果显示：过表达Rab23组较对照组相比，细胞增殖能力降低，干涉Rab23组较空载体组相比细胞增殖能力明显提高； 3)流式细胞仪检测Rab23对Sa3细胞周期的影响。结果显示：过表达Rab23可引起Sa3细胞G1期阻滞，影响细胞周期进程； 4) CCK8实验检测Rab23对Sa3细胞生长的影响。结果显示：与对照组相比，过表达Rab23组细胞生长能力降低，干涉Rab23组生长能力增高。

2. Rab23抑制鳞癌Sa3细胞生长增殖机制的初步探讨 1) Western blot检测Rab23对Hedgehog信号通路分子Gli1、Gli2表达的影响。结果显示：稳定转染过表达Rab23组和干涉Rab23组其Hedgehog信号通路重要的转录因子Gli1、Gli2表达水平与对照组和空载体组相比未见明显变化； 2) Western blot检测Rab23对细胞Erk1/2、p-Erk1/2表达的影响。结果显示：过表达Rab23组和干涉Rab23组较对照组和空载体组相比Erk1/2表达水平无明显变化；与对照组相比，过表达Rab23组p-Erk表达水平降低，而干涉Rab23组较空载体组相比p-Erk表达水平升高。 3) Western blot检测Rab23对细胞周期相关蛋白表达的影响。结果显示：CyclinE在各组细胞中的表达水平未见明显变化；与对照组相比，过表达Rab23组Cyclin D1表达水平降低，而干涉Rab23组较空载体组相比Cyclin KPT-330细胞系 D1表达水平升高。 主要结论： 1) Rab23对鳞癌Sa3细胞的生长增殖具有抑制作用； 2) Rab23可能不通过Hedgehog信号通路来抑制鳞癌Sa3细胞的生长增殖； 3) Rab23抑制鳞癌Sa3细胞生长增殖可能是通过调控Erk MAPKs信号通路发挥作用； 4) Rab23下调鳞癌Sa3细胞周期蛋白Cyclin D1的表达引起Sa3细胞G1期阻滞，从而对细胞周期进程产生影响。
目的： 建立Walker-256大鼠移植性肝癌模型后切除肿瘤并植入自制门静脉泵,经泵灌注不同剂量Licartin并联合灌注化疗(FOLFOX方案),评价这种联合用药方案的安全性、有效性和可行性,从而为这种新疗法的临床应用提供实验理论基础。

Selleck MAPK inhibitor 材料与方法： 选取雄性SD大鼠100只,将含有大量Walker-256中瘤细胞的浓缩腹水种植于大鼠肝脏的左外叶。一周后通过CT扫描,选取瘤体直径在2.0-3.0cm的大鼠,切除肿瘤后植入自制门静脉泵。7天后将存活大鼠随机分为A、B、C三组。A组(小剂量Licartin+PVIC组)：通过门静脉泵灌注Licartin (2.5mCi/kg)+灌注化疗(FOLFOX方案)；B组(大剂量Licartin+PVIC组)：通过泵灌注Licartin(5.0mCi/kg)+灌注化疗(FOLFOX方案)；C组(PVIC组)：通过泵行灌注化疗(FOLFOX方案)。每次手术前后均观察大鼠一般情况,抽血查血常规、肝肾功能和甲状腺功能。行CT扫描了解肿瘤生长和转移情况,A、B组行SPECT扫描检测核素分布情况。大鼠死亡后切取肝、肺和其他转移灶行病理学检查。观察所有大鼠生存资料进行生存分析。 结果： 通常 本研究共进行了肝癌种植术、肝癌切除和门静脉泵植入术及经门静脉泵灌注术三次实验,术程基本顺利,麻醉满意,术后恢复情况良好。整个实验过程中大鼠体重呈现下降趋势。

注射法种植肝癌简单易行,成瘤率为95.7%。切除肿瘤并植入门静脉泵后术后一周共46只大鼠行灌注术(其中A组18只,B组18只,C组10只)。 灌注术后血常规检查提示术后7dA组和B组WBC计数明显降低,而且B组WBC计数又低于A组和C组(P=0.043),C组计数基本正常。术后14d计数均基本回归正常。RBC计数和PLT计数变化不大(P>0.05)。 肝功能检查显示灌注术后Id AST和ALT计数都明显上升(P值分别是0.024和0.104),A组和B组计数高于C组,而且B组ALT计数还高于A组(P0.05)。肾功能检查发现BUN和Cr计数在灌注术前后基本无大变化(P>0.05)。 甲状腺功能检查发现A组和B组术后7d FT3、FT4计数明显低于术前(P值均<0.001),TSH明显高于术前(P<0.001),B组甲状腺功能损伤明显高于A组(P0.05)。 术后5min SPECT扫描显示未见核素在肝脏内明显浓聚,甲状腺内富集大量核素。术后21d对于肿瘤明确复发的大鼠行SPECT扫描显示核素在肝肿瘤区域大量富集。 肝癌种植术后一周行CT扫描发现63%的大鼠瘤体直径在2.0-3.0cm之间。灌注术后21d CT扫描发现B组复发和转移最少,A组次之,C组最多,但是分组治疗和TNM分期二者之间并没有关系(P=0.371)。 病理学检查见肝肿瘤核分裂象增多,异型性明显,瘤细胞弥漫密集分布。免疫组化检查显示AFP阴性,CEA阴性,Hepa阴性,Glypican-3阴性(局灶±),Ki-67阳性(比例约40%)。 所有大鼠都在灌注术后48天内死亡。生存状况分析显示三组大鼠的MST分别为27d、39d和24d,其中B组生存时间长于A组和C组(P
目的:原发性肝癌(primary hepatic carcinoma，PHC)是一种常见的恶性肿瘤。目前对于肝癌的发病机制仍不清楚。近年来，由于干/祖细胞学说的提出，有学者认为肝癌可能起源于肝干/祖细胞。本文选择ATP结合转运蛋白G家族成员2(ATP-binding cassette superfamilyG2,ABCG2)为干细胞标志物，探讨ABCG2在肝细胞癌、癌旁组织及正常肝组织中的表达，及其与患者临床病理特征之间的关系及其预后作用。 方法:收集桂林医学院附属医院肝胆胰外科2009年5月～2012年7月手术切除的60例肝细胞癌（HCC)、60例癌旁和7例正常肝组织标本，其中男性42例，女性18例，年龄30～68岁，中位年龄50.

IL-25、TSLP mRNA在寻常型银屑病患者与正常人外周血中的表达及其差异；2.不同性别的寻常型银屑病患者IL-25、TSLP mRNA表达的差异；3. IL-25、TSLP在寻常型银屑病患者外周血中的表达与银屑病皮损面积及严重程度指数(Psoriasis Area And Severity Index, PASI)的相关性；4. IL-25、 TSLP表达之间的相关性,探讨这两个细胞因子在寻常型银屑病发病中的作用；5.白芍总苷胶囊治疗寻常型银屑病患者4周、8周后外周血中IL-25、TSLP 没有 mRNA的表达水平的变化,以探讨白芍总苷胶囊对寻常型银屑病患者的治疗作用。 方法：采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-Time Fluorescence Quantitative Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction, RT-PCR)的方法,对50例寻常型银屑病患者和40例正常对照者外周血IL-25、TSLP mRNA的表达量进行检测分析。按照PASI的评分标准对50例寻常型银屑病患者进行评分。利用统计软件分析IL-25和TSLP的表达及与PASI评分的相关性,以P0.05)。 3.寻常型银屑病患者外周血中IL-25和TSLP

mRNA的表达量水平与PASI评分均呈负相关(*r=-0.366,*P=0.009;**r=-0.581**P=0.010)。 4.寻常型银屑病患者外周血中IL-25和TSLP mRNA的表达呈正相关,且有统计学意义(r=0.452,P=0.001)。 5.经白芍总苷胶囊治疗4周后,患者PASI评分降低,外周血中IL-25和TSLP mRNA的表达水平比治疗前升高,且均有统计学意义(IL-25的△CT值分别为5.24±1.42.3.13±0.82,t=8.37,P
目的：

本研究应用稳定表达GLUT4myc的L6GLUT4myc和C2C12GLUT4myc两种骨骼肌细胞模型探讨去极化和收缩调节GLUT4myc转位的机制。 方法： 第一部分比较55mM高钾溶液诱发的L6GLUT4myc肌管去极化和C2C12GLUT4myc肌管收缩对GLUT4myc转位的影响。测定两种细胞GLUT4myc转位响应高钾作用的时间曲线。第二部分比较55mM高钾溶液刺激L6GLUT4myc肌管和C2C12GLUT4myc肌管GLUT4myc转位过程中的信号分子的作用,检测信号分子的磷酸化。在C2C12GLUT4myc肌管中通过使用不同蛋白激酶抑制剂,分析高钾刺激GLUT4myc转位的信号机制。 Ivacaftor研究购买 结果： L6GLUT4myc肌管的GLUT4myc转位对高钾诱发的去极化作用呈时间依赖关系,最大值为基础状态的1.67±0.41倍(P<0.05)：C2C12GLUT4myc肌管的GLUT4myc转位对高钾诱发的收缩作用同样呈时间依赖关系,最大值为基础状态的1.51±0.15倍(P<0.05)的GLUT4myc的转位,钙离子螯合剂BAPTA-AM可抑制42%(P<0.05)的GLUT4myc的转位,CaMKⅡ抑制剂KN93可抑制50%(P
肌肉是动物机体利用葡萄糖最重要的组织,其糖代谢是维持机体内环境稳定的重要基础,大量的研究集中在胰岛素刺激葡萄糖转运的信号转导通路上。胰岛素和运动均促使葡萄糖转运子4转位到细胞膜上,转运更多的葡萄糖进入细胞而调节细胞的葡萄糖摄取量。普遍认为,胰岛素和运动引发的葡萄糖转运机制是完全不同的,胰岛素激发的葡萄糖转运主要依赖于P13K的激活,而运动导致的糖摄取则可能有Ca2+和AMPK的参与。相对于胰岛素,对运动/肌肉收缩刺激骨骼肌摄取葡萄糖的机制了解较少。

或者 目前研究运动/肌肉收缩多应用转基因动物,但成本高,操作复杂。而应用培养的细胞株则没有诸多限制,费用较低,并可单独分析细胞内信号转导。 本研究的目的是应用稳定过表达GLUT4myc的能收缩的C2C12GLUT4myc小鼠骨骼肌细胞模型探讨运动/肌肉收缩刺激骨骼肌细胞GLUT4运输机制中AMPK和CaMKⅡ的作用。 方法： 第一部分确定C2C12GLUT4myc细胞的培养和分化条件。测定此细胞的GLUT4myc转位响应Carbachol刺激的时间曲线,并用Western blot法检测Carbachol对AS160的调节作用。 第二部分测定在Carbacho1刺激下骨骼肌细胞内Ca2+浓度的变化。 第三部分在AMPK和CaMKⅡ的特异性药物抑制剂存在的条件下,测定收缩刺激GLUT4myc转位,并用Western blot法检测高钾溶液和Carbachol对ACC、 AMPK、CaMKⅡ和CaMKⅠ的调节作用,研究AMPK和CaMKⅡ在收缩刺激GLUT4myc转位中的作用。 结果： 第一部分比较不同浓度Carbachol刺激的C2C12GLUT4myc肌管GLUT4myc转位,结果显示,C2C12GLUT4myc细胞的GLUT4myc转位对Carbachol的作用呈剂量和时间依赖关系。0.1mM和1mM的Carbachol刺激均增加细胞表面GLUT4myc含量,0min为基础状态,0.1mM Carbachol刺激20min使GLUT4myc转位达最大值,为基础状态的(1.91±0.41)倍(p<0.

02±7.61%,与25ng/ml的抵抗素诱导相比,50ng/ml及100ng/ml的抵抗素组的血小板活化率更高,具有统计学意义(P=0.028及0.036),200ng/ml的抵抗素组的血小板活化无统计学差别(P=0.077)。2)抵抗素(50ng/ml)与ADP(10uM)诱导的血小板活化率差值无统计学意义(51.74±5.2% vs 52.96±2.88%, P=0.621)。抵抗素与ADP联合作用后的血小板P-选择素的表达率比单独抵抗素或ADP作用无明显升高(55.51±3.91% vs 51.74±5.2%, 52.96±2.88%, P值分别为0.224及0.203)。3)抵抗素(50ng/ml)比凝血酶(0.05U/ml)对血小板的活化作用更强(51.74±5.2% vs 45.08±2.7%,P=0.028)。抵抗素联合凝血酶作用后血小板的活化率比凝血酶组的明显增高(45.08±2.7% vs 50.41±3.59%, P=0.02)。4)与抵抗素组(50ng/ml)比较,SB203580预处理后,抵抗素对血小板的激活率明显降低(25.22±8.34% vs 51.74±5.2%, P
背景 肠易激综合征(Irritable bowel syndrome,IBS)是一种慢性功能性肠道疾病,发病率呈上升趋势,IBS的主要特点是内脏敏感性增高,但其神经生物学机制尚不完全清楚,故对其发病机制研究有较重要意义。新近研究表明,神经胶质细胞在内脏痛反应中可能起较为重要作用,尤其是脊髓中支配左半结肠的骶髓后联合核(Dorsal

还有 commissual nucleus, DCN)中神经胶质细胞与IBS内脏高敏感性可能具有密切相关性,也成为目前研究的热点问题。 目的 本实验采用旋毛虫感染大鼠成功制作IBS大鼠模型,通过对模型大鼠的①结肠扩张刺激,观察脊髓背角中NMDAR(N-methyldaspartate receportes, NMDAR)、CGRP(Calcitoningene-related peptide, CGRP)和DCN中小胶质细胞的变化；②给予椎管内插管注射小胶质细胞上MAPK-38特异性抑制剂SB203580,观察脊髓背角中MAPK-P38、ERK以及DCN中小胶质细胞的变化,为进一步研究IBS内脏敏化的神经生物学机制提供理论依据。 方法 用旋毛虫悬液灌胃建立IBS模型,采用电生理学方法观察正常大鼠和IBS大鼠腹直肌肌电的变化；采用免疫荧光组织化学方法观察两者骶髓后角中NMDAR、CGRP、MAPK-P38、ERK以及骶髓后联合核中的小胶质细胞的表达情况。

结果 IBS结肠刺激组大鼠腹直肌肌电、大鼠骶髓后角中NMDAR、CGRP表达以及DCN中的小胶质细胞活化程度较正常大鼠及IBS未刺激组均显著增强(P<0.01)。IBS大鼠予以结肠扩张性刺激,其骶髓后角中P38、ERK表达较正常大鼠明显升高,同时OX42表达明显增高,二者相比差异显著(P<0.01),而当给予抑制剂SB203580后P38表达明显下降,同时OX42水平降低(P0.05)。 一般 结论 IBS内脏高敏感性可引起骶髓DCN中小胶质细胞的变化,其反应与小胶质细胞存在密切关系。IBS的内脏敏化可能是通过DCN中小胶质细胞的MAPK-P38信号转导途径实现的。
目的：牙周炎是人类最普遍的口腔疾病之一,它不仅是牙列缺损乃至缺失的主要原因,也是某些全身疾病如糖尿病、心血管疾病、妊娠并发症的危险因素。近一百年来,对牙周疾病的研究不断深入,其致病机理仍有诸多未解之谜,以往研究已经证实咬合创伤可参与牙周炎的发生与发展,并直接影响牙周组织的改建与修复。牙周膜成纤维细胞作为牙周膜中的主要感受性细胞和效应性细胞,在适宜的周期性应力作用下,可发生增殖、迁移、分化和凋亡,参与组织的适应性改建。本研究拟在成功构建成纤维细胞体外培养一力学刺激模型的基础上,采用流式细胞术及RT-PCR等先进检测技术,从分子和基因水平探讨周期性张应力诱导成纤维细胞凋亡的相关机制,初步阐明P38MAPK信号通路在周期性张应力诱导成纤维细胞凋亡中的作用,明确周期性张应力、细胞凋亡及P38MAPK信号通路三者的关系,为全面诠释咬合创伤的致病机理以及探寻咬合创伤干预治疗的关键靶点提供理论依据和新的思路。

方法：以体外培养的成纤维细胞为实验对象,采用多通道细胞牵张应力加载系统,分别对待测细胞施加0h,6h,12h,24h周期性张应力。实验分为加力组(0h,6h,12h,24h)及加力+SB203580组(0h,6h,12h,24h)共八组。细胞所受力值大小以加力板底部硅胶膜的拉伸形变率(%)表示,拉伸形变率越大,表示成纤维细胞所受张应力越大。本实验细胞所受形变率为12%,频率为6循环/分钟,即每循环包括5秒钟牵张和5秒钟松弛。通过流式细胞术分析细胞的凋亡率,RT-PCR检测Bax蛋白的表达情况。加力之前对细胞施加P38MAPK特异性抑制剂SB203580,然后再对细胞施加相同的张应力之后再检测细胞的凋亡率及Bax蛋白的表达情况。应用SPSS10.0统计软件对实验数据进行统计学分析。 结果： 1.细胞培养获得了性状稳定的成纤维细胞,并成功构建了成纤维细胞体外培养-力学刺激模型。 可能 2.形变率为12%、频率为6循环/分钟的周期性张应力可诱导成纤维细胞的凋亡,成纤维细胞的凋亡率随加力时间的延长而增加,达到最高峰后开始下降,24小时内仍高于未加力组(p<0.05)；阻断p38MAPK信号通路后,凋亡基因bax的表达量降低(p
目的：翼外肌在错(?)畸形的发展及诊疗的各个阶段中起着重要作用,可以受到外环境改变的刺激而发生适应性改建。本研究在成功构建成肌细胞体外培养—力学刺激模型的基础上研究P38MAPK信号通路在应力介导的成肌细胞凋亡中的作用。 方法：本实验将实验细胞分为对照组和抑制剂组。对每组细胞分别施加0小时,6小时,12小时和24小时的周期性张应力。加力设备采用多通道细胞牵张应力加载系统,加力的力值设定为15%,每分钟10循环,每循环包括3s牵张,3s松弛。应用Hoechst33258和光学显微镜检测细胞凋亡的形态学变化；RT-PCR和流式细胞术检测细胞凋亡情况；Western Blot检测信号通路中P38MAPK蛋白P-P38MAPK蛋白的表达变化情况。实验结果应用SPSS17.0软件分析处理。 结果：光学显微镜可见持续张应力的作用下,骨骼肌成肌细胞发生不同程度的凋亡。Hoechst 33258检测观察到细胞受力后细胞核固缩并出现凋亡小体。RT-PCR和流式细胞术结果显示随加力时间的延长细胞凋亡率增加(P<0.

基于大鼠肝脏组织代谢组数据建立的PLS-DA模型,计算出三个主成份,模型能够很好地区分炎症期、硬化期和肝癌期三个阶段；

9.基于大鼠肝癌组织和肿瘤邻近组织代谢组数据建立的OPLS模型,发现牛磺酸结合胆汁酸是最重要的代谢产物； 10.人血浆的代谢组与上述50个不同代谢产物相比,共有29个可以配对上； 11.用这29个代谢产物所建立的PLS-DA模型,能够很好地区分肝炎、肝硬化及肝细胞癌病人； 12.二元logistic回归进行计算,方程式显示如下(1,2)：5个代谢产物进入最后的肝癌预测方程。这些产物包括：二氢(神经)鞘氨醇(Measured mass:301.2980,X1),棕榈酰肉碱(Measured mass:399.3351,X2),一种胆汁酸衍生物(Measured mass:356.2711,X3),溶血磷脂酰胆碱(LPE(22：5),Measured mass:569.3475,X4),以及溶血磷脂酰乙醇胺(LPC(16：0),Measuredmass:453.2856,X5),5个代谢产物组合后的ROS曲线下面积为0.951； 13.5个代谢产物在肝癌病人血浆相对浓度与肝炎病人及肝硬化病人相比,除了胆汁酸衍生物在HCC与肝硬化之间差异没有统计学意义,均有显著差异。 [结论] 本研究采用液相色谱—质谱联用分析技术(LC-MS),对DEN诱导的大鼠肝癌动物模型血浆及肝脏组织进行代谢组学研究,筛选出区分肝癌与非肝癌的50个代谢产物,与肝炎、肝硬化及肝癌病人的血浆代谢组数据比较,最终寻找到5个潜在代谢标志物：二氢(神经)鞘氨醇,棕榈酰肉碱,一种胆汁酸衍生物,溶血磷脂酰胆碱,以及溶血磷脂酰乙醇胺。研究结果为寻找肝癌分子标志物、肝癌代谢相关通路研究及肝癌的诊断提供了新的思路与方法。 selleck化学药品液面控制 第二部分Hedgehog信号通路在肝内胆管癌发生发展中的作用 ZD6474临床试验 [研究目的] 肝内胆管癌(Intrahepatic Cholangiocarcinoma,ICC),又称胆管细胞癌或周围型胆管癌,是来自肝内二级分支以下胆管树上皮的肿瘤。在世界范围内,肝内胆管癌是仅次于肝细胞癌的第二大肝脏恶性肿瘤,占原发性肝脏恶性肿瘤的10%-20%,其发病率近年来呈上升趋势。肝内胆管癌具有发生隐匿、恶性程度高、发展迅速、手术切除率低、复发转移早、临床预后差等特点,严重影响病人的生活质量及生存率。以往对这类非肝细胞起源的肝脏恶性肿瘤的发生与发展过程缺乏系统的了解,研究水平也相对滞后。因此针对临床肝内胆管癌诊治中的难点进行深入研究,尤其是研究其发生、发展以及复发、转移的机制,以寻找新的有效的肝内胆管癌特异性治疗方法十分必要。

Hedgehog(Hh)基因是编码一系列分泌蛋白的基因家族,1980年首先在果蝇中被发现。Hh信号转导通路最早被发现对胚胎发育过程中的细胞分化和增殖起重要作用。近年来通过对其信号转导途径深入研究,发现Hh通路的异常在人类肿瘤的形成中也有极其重要的作用。HH基因在不同组织中过度表达以及靶基因突变,均可导致细胞特异性的组织增生,参与肿瘤的发生和发展。Hh通路与肿瘤的关系最早在Glioma中被证实,其与脑部神经瘤的形成联系密切,后又发现Hh信号异常与基底细胞癌、肺癌、前列腺癌、口腔癌和消化道肿瘤等的形成均有重要关系。 Hh信号通路在肝脏发育、细胞分化以及肿瘤发生上均起重要作用,本实验拟分析Hh信号通路相关分子在肝内胆管癌组织及肝内胆管癌细胞系中的表达,体内外调节Hh信号通路观察其对肝内胆管癌细胞系生物学特性的影响,并分析Hh信号通路下游转录分子Gli1、Gli2表达水平与肝内胆管癌病人临床病理资料及预后的相关性。以上工作有助全面揭示肝内胆管癌发生、发展的分子机制,深化对Hh信号通路的认识,为寻找肝内胆管癌新治疗靶点提供线索和思路。 购买AG-014699 [研究方法] 1. Real-time PCR检测正常肝内胆管上皮组织与对肝内胆管细胞癌组织中Hh通路信号分子的mRNA表达水平； 2.免疫组织化学检测正常肝内胆管上皮组织与对肝内胆管细胞癌组织中Hh通路信号分子的蛋白表达水平； 3.体外用小分子化合物改变Hh信号通路的活性,观察其对肝内胆管癌细胞系生物学特性的影响； 4.体内用小分子化合物改变Hh信号通路的活性,观察其对肝内胆管癌细胞系生物学特性的影响；

5.Hh通路信号分子与肝内胆管癌病人临床病理资料及预后资料的统计分析。 [结果] 1.Hh信号通路在肝内胆管癌组织中异常激活：Hh信号通路配体shh和ihh分别有87.8%和78.0%表达升高,受体ptchl有87.8%表达升高,下游分子smo有85.4%表达升高,下游转录分子gli1、gli2及gli3分别有65.9%、87.8%及36.6%表达升高,下游靶分子hhip、bcl2和c-myc分别有17.1%、75.6%和82.9%表达升高； 2.Hh信号通路在肝内胆管癌细胞系QBC939、RBE及HCCC-9810中也异常激活； 3.在体外用Hh信号通路特异性抑制剂KAAD-Cyclopamine能够抑制QBC939、RBE和HCCC-9810的增殖,且其抑制程度与KAAD-Cyclopamine呈剂量依赖性； 4.在体内Cyclopamine能够明显抑制QBC939细胞种植肿瘤的大小； 5.肝内胆管癌组织中Hh信号通路下游转录分子Gli1蛋白高表达的病人更易发生肝内转移,预后更差； 6.肝内胆管癌组织中Hh信号通路下游转录分子Gli2蛋白高表达的病人更易发生肝内转移和血管侵犯,预后更差； 7.单因素分析发现发现血清CA19-9>37units/ml、最大肿瘤直径>5cm、伴有肝内转移、淋巴结转移、血管侵犯、T3/4、TNMⅢ/Ⅳ期和Gli1、Gli2蛋白在肿瘤组织中高表达的肝内胆管癌病人总体生存率更低； 8.

5、2.5、5、10μmol/L)培养对数生长期细胞24h,分别收集5×105个细胞,预冷4℃后用缓冲液重悬,洗涤调节至1×105／ml,按AnnexinV:PE试剂盒说明行流式细胞仪(FACS BVD-523数据表 BIVA option, Becton Dickinson)检测。 4、细胞周期检测：对数生长期细胞,按上述分组加入不同药物浓度,培育24小时后,收集细胞,缓冲液洗涤,加70%酒精重悬固定,4℃过夜,缓冲液洗涤,以1ml含有lmg/ml RNA酶及50μg/ml PI的缓冲液重悬,室温暗箱培育30分钟后按PI试剂盒说明行流式细胞仪(FACS BIVA option, Becton Dickinson)检测。 5、细胞内活性氧化物检测：对数生长周期细胞,1×104/孔种入96孔板,细胞培养24h后进行实验。按上述分组加入不同药物浓度,每组4个复孔,培养24h。每空加入5μmol/L溶于缓冲液的CM-H2DCFDA,培育30分钟,酶标仪(BIO-RAD

Model680)485/530nm波长测定吸光度值A。 6、聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白检测：细胞分组加入不同药物浓度(0、0.5、1、2.5μmol/L),培育24小时后,以预冷的缓冲液洗涤,后用蛋白裂解液裂解,4℃下3000g离心10分钟,以蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度(Pierce BCA protein assay kit)。30μg蛋白及加样缓冲液以同等体积混合,95℃加热5分钟,加样于聚丙烯酰胺凝胶行凝胶电泳,然后于4℃下,以200毫安电流转移3小时,将蛋白转移至硝酸纤维素膜上。纤维素膜经洗涤、封闭、一抗孵育、二抗孵育、清洗后按蛋白显色试剂盒(BioRad enhanced chemiluminescence kit)说明行显色,相关蛋白水平用beta肌动蛋白作平衡。 7、白花丹素的药物吸收及亚细胞分布的检测：用共焦显微镜检测白花丹素在A549及H23细胞的药物吸收过程及亚细胞分布。细胞种入8孔方格玻片。培养过夜后,加入白花丹素,作用超24小时。用PBS洗涤细胞3次,并用para-formaldehyde固定。用DAPI染色DNA。盖上盖玻片,用指甲油封口。用Leica TCS SP2激光扫描共焦显微镜检测,检测波长405nm {Selleck Anti-infection Compound Library|Selleck Antiinfection Compound Library|Selleck Anti-infection Compound Library|Selleck Antiinfection Compound Library|selleck Anti-infection Compound Library|selleck Antiinfection Compound Library|selleck Anti-infection Compound Library|selleck Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|Anti-infection Compound Library|Antiinfection Compound Library|buy Anti-infection Compound Library|Anti-infection Compound Library半抑制浓度|Anti-infection Compound Library价格|Anti-infection Compound Library花费|Anti-infection Compound Library溶解度|Anti-infection Compound Library购买|Anti-infection Compound Library制造商|Anti-infection Compound Library查找购买|Anti-infection Compound Library订单|Anti-infection Compound Library mouse|Anti-infection Compound Library chemical structure|Anti-infection Compound Library分子量|Anti-infection Compound Library molecular weight|Anti-infection Compound Library数据表|Anti-infection Compound Library supplier|Anti-infection Compound Library体外|Anti-infection Compound Library细胞系|Anti-infection Compound Library concentration|Anti-infection Compound Library nmr|Anti-infection Compound Library体内|Anti-infection Compound Library clinical trial|Anti-infection Compound Library cell assay|Anti-infection Compound Library screening|Anti-infection Compound Library high throughput|buy Antiinfection Compound Library|Antiinfection Compound Library半抑制浓度|Antiinfection Compound Library价格|Antiinfection Compound Library花费|Antiinfection Compound Library溶解度|Antiinfection Compound Library购买|Antiinfection Compound Library制造商|Antiinfection Compound Library查找购买|Antiinfection Compound Library订单|Antiinfection Compound Library chemical structure|Antiinfection Compound Library数据表|Antiinfection Compound Library supplier|Antiinfection Compound Library体外|Antiinfection Compound Library细胞系|Antiinfection Compound Library concentration|Antiinfection Compound Library clinical trial|Antiinfection Compound Library cell assay|Antiinfection Compound Library screening|Antiinfection Compound Library high throughput|Anti-infection Compound high throughput screening| (DAPI),488nm(白花丹素)。 8、细胞自噬检测：对数生长周期细胞,5×104/孔种入24孔玻璃底板,细胞培养24h后进行实验。设空白对照组、不同药物浓度白花丹素(0.5～10μmol/L)及2.5μmol/L白花丹+促细胞自噬/抗细胞自噬药物组,每组4个复孔,每孔加入对应药物及15μl

CellLight Lysosome-RFP试剂,培养24h。用Leica TCS SP2镭射共焦显微镜以555/584nm波长检测。以WST-1实验作平衡。 9、细胞凋亡与细胞自噬间的关系与影响：对数生长周期细胞,1.5×105/孔种于6孔板,培育过夜。设空白对照组、不同药物浓度白花丹素(0.5～10μmol/L)及2.5μmol/L白花丹+促细胞自噬/抗细胞自噬药物/抗细胞内活性氧化物生成药物组,加入对应药物后培育24小时,胰蛋白酶收集细胞,100g离心5分钟,去掉上清,重悬后细胞等分为2份,缓冲液洗涤,一份加Annexnin-ATTO647N:PI试剂,黑暗中培育10分钟。用缓冲液洗涤一次,用190μl结合液重悬,加10μl浓度为20μg/ml的PI,用流式细胞仪(FACS BIVA option, Becton Dickinson)作细胞凋亡检测；另一份洗涤后用1-assay buffer(Enzo Life Sciences Inc, Farmingdale, No.ENZ-51031-K200)重悬,离心收集细胞,用250μl的加了5%的牛血清的无酚红的培养液(Invitrogen, Carlsbad, No.1294895)重悬,并加入250μl稀释的Cyto-ID Green试剂(Enzo Life Sciences Inc, Farmingdale, No. ENZ-51031-K200)混合,37℃黑暗中培育30分钟,离心收集细胞,1-assay buffer洗涤,用500μl新鲜的assay buffer重悬,流式细胞仪(FACS BIVA option, Becton Dickinson)作细胞自噬检测。 结果： 白花丹素对于A549及H23的半抑制浓度分别为10.87μmol/L及7.80μmol/L,可引起-G2/M细胞周期停滞,cyclin B1及Cdc2水平均明显下降,在A549细胞中,白花丹素使p53的水平升高,P21的表达也以药物浓度依赖的方式上升,受白花丹素处理的H23细胞中却无此表现。

白花丹素诱导A549及H23细胞的凋亡,白花丹素处理的各组A549及H23细胞均有明显的Bax表达水平的升高,而Bcl-2的表达则明显降低,Bax/Bcl-2比值的上升,且该作用有浓度依赖；在A549细胞中以浓度依赖方式引起PUMA表达的明显上升,但在H23细胞中无此作用；白花丹素在两种细胞中均诱导细胞色素C的释放；断裂的caspase-3(Asp175)及caspase-9(Asp315)在A549及H23细胞中均被白花丹素以浓度依赖方式激活。 不 白花丹素增加细胞内活性氧化物的水平。用细胞内活性氧化物抑制剂：5mmol/L的NAC、100mmol/L的维生素C或1mmol/L的GSH预处理后的A549及H23细胞,其细胞内活性氧化物的水平明显下降。 白花丹素诱导A549及H23细胞的细胞自噬,在A549及H23细胞中,白花丹素均以浓度依赖的方式明显减低P13K(p55)的Tyr199位点的磷酸化、增加p38在Thr180/Tyr182位点的磷酸化、减少Akt的Ser473位点的磷酸化、降低mTOR在Ser2448位点的磷酸化。白花丹素以浓度依赖方式明显诱导beclin1在两种细胞的表达、引起LC3-I及LC3-Ⅱ水平的升高。在两种细胞中,用20mmol/L的SB202190或SB203580处理,均能加强由白花丹素诱导的自噬反应。Chloroquine, bafilomycin及wortmannin抑制白花丹素诱导的自噬反应。：20mmol/L的SB202190及SB203580均明显加强白花丹素诱导的p38磷酸化作用,明显加强白花丹素诱导的mTOR的磷酸化的抑制作用,加强诱导LC3-I及LC3-Ⅱ水平的升高的作用。特异性p38MAPK抑制子及自噬诱导子SB202190,及自噬抑制子wortmannin均可增强A549及H23细胞的基础凋亡,但抑制白花丹素诱导的细胞凋亡。 白花丹素处理0.

05)。GSK3抑制剂组完全磷酸化的MafA降低(P
目的观察氯化锂预先给药对老龄大鼠术后认知功能的影响,探讨其可能的作用机制。方法雄性SD大鼠36只,18月龄,随机分为三组,其中C组和S组腹腔注射生理盐水,L组给予氯化锂2mmol/kg;每天1次,连续5d。S组和L组行肝脏缺血-再灌注手术。术后第3~6天行Morris水迷宫实验,记录逃逸潜伏期和游泳距离。测定大鼠海马组织中糖原合成激酶3β(GSK-3β)、低密度脂蛋白受体6(LRP6)、β-连环素(β-catenin)及其相应磷酸化蛋白的表达水平。结果与C组比较,S组第4~6天和L组第3,4天逃逸潜伏期和游泳距离明显延长(P<0.05);S组p-GSK-3β、p-LRP6蛋白表达明显降低(P<0.05),p-β-catenin蛋白表达明显增加(P<0.05);而L组p-GSK-3β、p-LRP6蛋白表达明显增加(P<0.05),p-β-catenin蛋白表达明显降低(P<0.05)。与S组比较,L组第3~6天逃逸潜伏期和游泳距离明显缩短(P<0.05),而p-GSK-3β、p-LRP6蛋白表达明显增加(P<0.05),p-β-catenin蛋白表达明显降低(P
糖原合成酶激酶-3β(GKS-3β)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,参与生物体内多种细胞功能活动的调节。近年研究发现,GSK-3β是心肌缺血再灌注过程中心肌细胞受损并最终走向死亡的交汇点,其磷酸化是心肌保护性信号通路汇集的关键。本文就GSK-3β在心肌缺血再灌注损伤中的作用及相关机制做一综述。
镉是一种分布广泛的重金属污染物,随着工业废弃物的排放通过水、植物、食物等途径进入食物链,从而在人体内蓄积,成为一种具有潜在毒性的有毒物质。镉对生物体的多个系统和器官均有毒害作用,其中有近50%的镉蓄积在肾脏,尤其是肾近曲小管,从而导致肾脏损伤,引发慢性肾脏疾病。本文对镉致肾脏毒性的机制如活性氧堆积、线粒体及内质网应激、钙紊乱、细胞凋亡等进行了总结,并简要的概述了其肾毒性的防治办法。
目的:探讨锂剂对神经干细胞(neural

和 Proteasome抑制剂 stem cells,NSCs)分化的调控作用及机制,为优化NSCs移植治疗SCI疗效提供理论基础。方法:以Fischer

344新生大鼠侧脑室下区培养的NSCs为细胞模型,首先采用Cyquant DNA定量法测定对照组及0.5、1、3、5mM锂剂处理组在分化条件下的生长曲线;同时结合星形胶质细胞(AST)标记物GFAP及S100β,行神经元标记物Tuj1细胞免疫化学染色,应用Western Blotting蛋白定量法检测不同浓度锂剂对NSCs分化终产物中神经元及AST总量的影响,同时采用TUNEL凋亡检测法寻找锂剂的非毒性浓度区间,以排除混杂因素。最后通过与其下游经典作用通路GSK3β抑制剂SB216763对NSCs增殖、分化、凋亡的作用比较,探究锂剂的可能作用机制。结果:TUNEL凋亡检测显示体外锂剂的非毒性浓度区间为(0~3mM);在此范围内,1mM锂剂处理组中Tuj+细胞总数较对照组提高约1.47±0.06倍(P<0.05),SB216763处理组Tuj+细胞总数提高约2.25±0.07倍(P<0.05);3mM锂剂处理组中GFAP+细胞总数为对照组的0.55±0.02倍(P0.05)。结论:锂剂可明显促进NSCs向神经元方向分化并AST的分化,其最佳作用浓度分别为1mM及3mM,前者可能是通过锂剂下游经典作用通路GSK3β实现,而后者可能通过GSK3β旁路途径实现。
抑郁症是一种常见的精神疾病,严重影响人们的生活质量。临床常用药物、睡眠剥夺法及电抽搐疗法来治疗抑郁症。但鉴于目前的治疗方法的起效慢,低治愈率及难以持续应用,从而增加致残率、自杀率等缺点,急需寻求新的治疗方法。有大量实验表明,氯胺酮作为临床麻醉药,具有快速抗抑郁作用,但其具体机制还不明确,本文就近年来对氯胺酮抗抑郁机制的研究加以综述。1氯胺酮的化学性质
目的:探讨丹参酮ⅡA通过环氧化酶-2(COX-2)-Wnt/β-catenin信号通路调控人肠癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的作用机制。方法:分别采用PGE2和COX-2选择性抑制剂NS-398上调及抑制LoVo细胞COX-2表达,Western

PD98059制造商 Blot检测COX-2对β-catenin蛋白表达的影响;分别采用丹参酮ⅡA、PGE2和/或GSK-3β选择性抑制剂SB-216763作用人肠癌HCT-116细胞24h,Western Blot法检测丹参酮ⅡA对COX-2和β-catenin蛋白表达的影响;ELISA法检测丹参酮ⅡA对VEGF表达的影响。结果:与对照组比较,PGE2能够显著上调LoVo细胞中COX-2蛋白表达,同时显著上调β-catenin在细胞总蛋白、浆蛋白和核蛋白中的表达水平;反之,COX-2抑制剂NS-398能够显著下调COX-2和β-catenin蛋白表达水平。丹参酮ⅡA能够显著下调COX-2和β-catenin蛋白在人肠癌LoVo细胞中表达水平,并且能够显著下调PGE2诱导的COX-2和β-catenin蛋白的高表达;同时,丹参酮ⅡA能够显著下调人肠癌LoVo细胞VEGF表达水平,并且能够下调PGE2和GSK-3β抑制剂SB-216763诱导的VEGF高表达。结论:丹参酮ⅡA通过抑制人肠癌细胞中COX-2的表达,阻止细胞中β-catenin的累积,从而阻断Wnt/β-catenin信号通路,下调VEGF表达,这可能是丹参酮ⅡA抗大肠癌血管新生的作用机制之一。
目的观察姜黄素对缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)H9c2心肌细胞凋亡和糖原合成酶激酶3(GSK-3)表达及其磷酸化的影响。方法利用缺血台氏液对体外培养的H9c2心肌细胞模拟I/R处理,同时随机分为模型组(模拟缺血90min,再灌注30min)、姜黄素组(再灌注同时加入7.5μmol/L姜黄素)和对照组(正常台氏液培养120min代替模拟I/R),采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,采用Western blot检测GSK-3、酪氨酸磷酸化GSK-3(pTyr-GSK-3)和丝氨酸磷酸化GSK-3(pSer-GSK-3)蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组H9c2细胞凋亡率明显提高(t=10.439,P=0.000),模型组pTyr-GSK-3和pSer-GSK-3表达均显著增加(t=5.208,P=0.006;t=5.854,P=0.004)。与模型组比较,姜黄素组凋亡率及pTyr-GSK-3表达水平显著降低(t=-8.325,P=0.001;t=-3.607,P=0.

001)，第21位丝氨酸残基磷酸化增加了2.1倍(P＜0.05)，而磷酸化的增加伴随着转录活性的下降。与PPARα磷酸化水平的提高相对应，细胞外信号调节激酶ERK1和ERK2的磷酸化也分别增加了14倍(P＜0.001)和4.1倍(P＜0.01)，提示ERK-MAPK信号转导通路可能介导了PPARα的磷酸化。与此相呼应，ERK1／2抑制剂的处理使得AR诱导的PPARα转录活性的抑制被显著改善(达到对照的78％，P＜0.001)，而P13K、p38、JNK及PKC抑制剂处理则没有此作用。特别重要的是，用25 为什么 mM浓度的葡萄糖处理AML12细胞也获得了与上述效应相似的结果。与在5

mM葡萄糖浓度下培养相比，25 mM葡萄糖的处理使得AML12细胞的AR的表达显著上调，同时引起PPARα／δ转录活性下降和ERK1／2及PPARα的磷酸化程度显著增加。用AR siRNA抑制AR表达后，25 mM葡萄糖浓度处理下的AML12中PPARα的磷酸化程度显著降低。 我们采用腹腔注射链脲佐菌素(streptozotoxin，STZ)在C57BL／6小鼠中诱导Ⅰ型糖尿病。在STZ—糖尿病小鼠中，AR抑制剂处理或敲除AR基因，导致肝组织ERK1／2和PPARα的去磷酸化，而且AR抑制剂处理使ACO的mRNA水平显著上升(44％，P＜0.01)，载脂蛋白ApoC3的mRNA水平显著下降(34.8％，P＜0.01)。与此同时，血甘油三酯(TG)和游离脂肪酸水平也显著下降。另一方面，在Ⅱ型糖尿病小鼠模型db／db小鼠中，AR抑制剂的处理也导致肝组织ERK1／2和PPARα显著的去磷酸化，同时伴随着ACO和载脂蛋白ApoA5的mRNA水平的显著上升(ACO上升92％，P＜0.05；ApoA5上升73％，P＜0.05)。与此相对应，肝TG和血TG水平显著下降，同时肝组织的油红染色结果也说明了AR抑制剂处理显著降低了db／db小鼠肝脏中性脂肪含量。 综上所述，AR在肝脏中可对PPARα的磷酸化及转录活性进行调控，进而影响动物体脂质代谢。AR对PPARα的调控作用在很大程度上是由ERK1／2信号转导通路介导的。
慢性乙型肝炎(Chronic Hepatitis B,CHB)是一种严重危害人类健康的病毒性传染病。我国是乙肝病毒(Hepatitis B Virus,HBV)高流行区,一般人群的乙型肝炎表面抗原(Hepatitis B surface Antigen,HBsAg)阳性率为9.09%,约有1.1～1.2亿为HBV携带者,其中部分有不同程度的肝细胞受损,并可能发展成肝硬化和肝癌。 干扰素(Interferon,IFN)是细胞和机体受到病毒感染,或者受核酸、细菌内毒素和促细胞分裂素等作用后,由淋巴细胞分泌的一种细胞因子,可分为α、β、γ三类。IFN-α具有抗病毒及免疫调节的双重作用,是临床常用的抗HBV药物。 目前用于临床的普通IFN-α半衰期只有4～6h,患者不得不接受频繁的皮下注射(疗程至少半年),但其长期疗效并不确切。重组人白蛋白融合干扰素α-2b融合蛋白( recombinant human serum albumin-interferon-α-2b

fusion protein ,rHSA-IFNα-2b)是运用基因重组技术开发出来的一种新型长效干扰素,其在体内的半衰期显著长于IFNα-2b和聚乙二醇干扰素(Pegylated Interferon,PEG-IFN)。rHSA-IFNα-2b注射频率可以从IFNα-2b的每天一次或每周3次减少到每两周一次,这将极大地方便患者。同时长效干扰素所提供的较为稳定的血药浓度也将提高疗效,降低不良反应。 动物实验及临床试验研究已证明rHSA-IFNα-2b可发挥有效的抗丙肝病毒(Hepatitis

C Virus,HCV)作用,但是否同样具有抗HBV作用还有待进一步研究。本研究拟通过探索rHSA-IFNα-2b对体外2.2.15细胞(HepG2 BLU9931 C646 2.2.15 cell)HBsAg、HBeAg(Hepatitis B e Antigen)分泌、HBV DNA复制的影响,及对鸭乙型肝炎动物模型的肝功能影响和对鸭乙肝病毒(DHBV)DNA的抑制作用,来系统考察rHSA-IFNα-2b的抗HBV作用,为rHSA-IFNα-2b治疗CHB的临床试验提供依据。 IFN-α主要通过激动特异性细胞膜受体来发挥抗病毒作用。当IFN-α与靶细胞表面的特异性受体结合后,通过JAK-STAT信号通路,触发细胞内一系列酶活化,产生一组抗病毒蛋白,包括2′-5′-寡腺苷酸合成酶(2′-5′-oligoadenylate synthetase,2′-5′-OAS)、磷酸二脂酶(phosphodiesterase,PDE)及蛋白激酶(protein Kinase,PK)。OAS可催化2′-5′-寡核苷酸(2′-5′-oligoadenylate,2-5A)合成,激活内源性核酸内切酶,抑制病毒mRNA信息的传递,从而阻止病毒在宿主细胞内繁殖。本研究同时拟通过考察rHSA-IFNα-2b对抗病毒蛋白OAS的影响,及与Jak-Stat通路、p38-MAPK通路的关联,来阐述其发挥抗HBV作用的机制。 (一)体外药效学及机制研究: 本课题选用2.2.15细胞作乙型肝炎体外模型,首先采用MTT法考察rHSA-IFNα-2b对2.2.15细胞的毒性作用。选择含8个实验浓度梯度rHSA-IFNα-2b(500、250、125、62.5、31.2、15.6、7.8、3.9nmol/L)的培养液,培养2.2.15细胞9天后,加入含有400mg/L MTT的培养液孵育4 h,弃MTT液并加入DMSO,用酶标仪测定吸光度(absorbance,A)值,来考察药物对细胞的破坏程度。结果发现,rHSA-IFNα-2b对2.2.15细胞形态仅有轻微的损坏,且细胞破坏率与细胞形态变化无明显关系,TC50>500 nmol/L,远高于其有效剂量。 我们选用含三个不同rHSA-IFNα-2b浓度梯度(0.075,0.3,1.2 nmol/L)的培养液来培养2.2.15细胞,每3天更换含有药物的培养液,分别收集第3、6、9天上清液。细胞上清液中的HBsAg、HBeAg采用ELISA法检测,用酶标仪测定其A值,并根据标准品A值折算得出样品浓度。细胞上清液中的HBV DNA浓度通过实时荧光定量PCR测定,最后通过标准品的CT值来计算样品DNA的浓度。实验结果发现,rHSA-IFNα-2b明显抑制HBsAg、HBeAg分泌,其中浓度在0.075～1.2 nmol/L范围内时,其对HBsAg的抑制作用呈现浓度依赖性;rHSA-IFNα-2b能抑制培养上清液中HBV DNA复制,也呈明显浓度依赖性。IFNα-2b与rHSA-IFNα-2b作用无显著性差异。 随后,我们用rHSA-IFNα-2b(0.075、0.3、1.2 nmol/L)作用2.2.15细胞3天后,收集细胞并提取总RNA,用RT-PCR方法考察STAT1、ISGF3、2′-5′-OAS的变化;给予JAK抑制剂或p38抑制剂之后1h再给予rHSA-IFNα-2b(0.

pylori)是胃部感染最常见的病原微生物,全世界的平均感染率在50%左右,高发地区集中在东亚,包括我国还有日本和韩国。导致急慢性胃炎、胃溃疡、胃癌和胃黏膜相关性淋巴瘤(mucosa-associated lymphoid tissue, MALT)等。1994年幽门螺杆菌被世界卫生组织(World Health Organization, WHO)和国际癌症研究机构(TheInternational Agency for Research on Cancer, IARC)列为Ⅰ类致癌因子。胃癌在所有的癌症中排在第四位,但致死率排在第二位,且预后不良。胃癌发生与幽门螺杆菌感染密切相关。 幽门螺杆菌感染宿主后引起胃炎过程中,会使体内Th1/Th2平衡偏向于Th1反应,导致大量Th1型细胞因子的产生,其中包括IFN-γ(Interferon-gamma)。IFN-γ是Th1反应中的关键分子,也是Th1反应中产生最多的免疫分子,是免疫活化的标志分子。正常情况下的人体组织或血清中不含有IFN-γ,只有在某些特定因素的刺激下才能诱导其产生。来源于临床标本和动物模型的证据显示幽门螺杆菌感染所致胃炎患者胃黏膜表面有高水平的IFN-γ。体外细胞试验也显示幽门螺杆菌或幽门螺杆菌的组分刺激细胞后,细胞产生IFN-γ,然而,细胞产生IFN-γ的机制尚未知。

www.selleckchem.cn/products/abt-199.html 对于IFN-γ在幽门螺杆菌感染引起的胃炎中所起的作用和起作用的机制,有研究者进行了研究。虽然Shimizu et al在儿童感染幽门螺杆菌的病例中发现IFN-γ和炎症细胞浸润没有关联,但Antonia et al发现成人感染幽门螺杆菌后具有高水平的IFN-γ且IFN-γ和单核细胞浸润有显著的联系。动物实验表明IFN-γ在幽门螺杆菌感染过程中可降低细菌粘附率,对于清除细菌具有重要的作用,所以IFN-γ起着保护性作用；但是若长期感染幽门螺杆菌,IFN-γ起着诱导胃炎的作用。单就IFN-γ对幽门螺杆菌所起的作用还未有研究,特别是IFN-Y在幽门螺杆菌感染引起胃癌中起作用及作用的机制少有研究。 胃癌发生发展过程中另一个重要的因素是胃癌细胞的增殖。有人报道癌细胞对IFN-γ不敏感,但大部分研究者持相反的观点。IFN-γ是一种致炎因子,IFN-Y在引起炎症的过程中起诱导作用,大部分研究显示它对癌细胞的增殖起负向调控作用。有报道称IFN-γ可以通过直接或间接地方式引起癌细胞的凋亡,如引起胃癌、脑胶质瘤、多发性骨髓瘤和宫颈癌等细胞的凋亡。它还可引起细胞的衰老、导致细胞周期变化、降低癌细胞的侵袭能力以及影响一些基因如编码促分泌剂3A1

(Secretoglobin 3A1, SCGB3A1)、骨桥蛋白(Osteopontin, OPN)、趋化因子CXCL10(IFN-γinducible 因为 protein-10, IP-10)等基因的表达、影响基因的修饰如信号传导子及转录激活子(signal transducer and activator of transcription, STAT1)的磷酸化等。IFN-Y对胃癌细胞的衰老、细胞周期变化是否有影响,是否影响基因的表达,影响哪些基因的表达还未见报道。 幽门螺杆菌感染胃黏膜细胞后,幽门螺杆菌、宿主的免疫和胃癌细胞的增殖是胃癌发生发展的重要因素。有鉴于此,本研究首先探讨了幽门螺杆菌感染胃粘膜上皮细胞系胃癌细胞引起细胞产生IFN-γ的信号途径,然后从IFN-γ调节幽门螺杆菌的蛋白质表达和对胃粘膜上皮细胞系胃癌细胞的影响入手研究IFN-γ在幽门螺杆菌感染引起胃癌中所起作用及其机制。 一.幽门螺杆菌诱导胃粘膜细胞产生IFN-γ 细胞因子主要由免疫细胞产生,但随着研究的深入发现癌细胞和分泌细胞如黏膜细胞也能产生某些细胞因子。以前的研究显示感染幽门螺杆菌的胃黏膜具有大量的IFN-γ,除了免疫细胞产生的IFN-Y,我们通过体外细胞试验从RNA水平和蛋白水平证实胃癌细胞感染幽门螺杆菌后亦能产生IFN-γ。我们将幽门螺杆菌感染细胞后,幽门螺杆菌的主要毒力CagA (cytotoxin-associated gene A)阳性质粒转染胃癌细胞,胃癌细胞亦能产生IFN-γ。CagA (cytotoxin-associated gene A)阳性质粒转染胃癌细胞后,加入MEK/ERK、Src、P38和NF-KB的抑制剂,发现加入MEK/ERK、P38和NF-KB抑制剂后,IFN-γ的产生受到抑制,说明幽门螺杆菌刺激IFN-γ的产生依赖于这三者参与的信号途径。这有助于解释感染幽门螺杆菌的胃黏膜具有大量的IFN-Y。

二·IFN-γ影响幽门螺杆菌的蛋白质表达 幽门螺杆菌感染胃部后,受到酸、胆汁、盐和N0等人体环境因子的胁迫,会产生相应的反应。除了以上因素,幽门螺杆菌也暴露于人体的免疫环境中。免疫分子IFN-γ结合绿脓杆菌并上调其主要毒力,通过Blast比对,我们推测IFN-γ结合幽门螺杆菌,IFN-γ是否调节幽门螺杆菌的毒力表达值得探讨。我们首先把对数期的幽门螺杆菌暴露于IFN-γ中,发现IFN-γ不影响幽门螺杆菌的生长、增殖和形态变化。但是我们把对数期的幽门螺杆菌暴露于IFN-γ2h,用间接免疫荧光的方法发现IFN-γ结合于幽门螺杆菌的表面。然后我们用双向凝胶电泳技术获得幽门螺杆菌暴露于IFN-γ6h的蛋白质表达谱,发现IFN-γ可以影响该菌的某些蛋白表达,如参与DNA复制的蛋白、参与蛋白翻译和递呈的蛋白、压力蛋白等,其中还包括幽门螺杆菌的主要毒力蛋白CagA。 AC220研究购买 三.IFN-γ下调幽门螺杆菌的主要毒力蛋白CagA 在双向凝胶电泳结果的基础上,我们又用RT-PCR、实时荧光定量PCR以及Western Blot方法进一步验证了IFN-Y可以使幽门螺杆菌的主要毒力CagA下调。CagA是幽门螺杆菌的主要和重要毒力,它可以增加胃癌的风险。CagA被细菌的VI型分泌系统注入细胞,进入细胞的CagA有磷酸化和非磷酸化状态,磷酸化和非磷酸化状态都对细胞有损伤的功能,磷酸化CagA能引起细胞的蜂鸟状改变。所以我们把暴露于IFN-γ的幽门螺杆菌感染胃癌细胞,Western Blot鉴定细胞内的磷酸化和非磷酸化状态的CagA,并观察细胞形态的变化。结果发现幽门螺杆菌暴露于IFN-γ后再感染细胞,细胞内的磷酸化和非磷酸化状态的CagA都下降,细胞的蜂鸟状改变的比率也下降。因为磷酸化CagA可以使鼠特异性的发展成胃肠肿瘤,所以我们的试验体外证明了IFN-Y下调幽门螺杆菌的主要毒力蛋白CagA,且具有细胞生物学效应,从而降低胃癌的风险。 四.