0E04、ALT＜40U／L(简称e~+ALT＜40U／L组)共7例； D组：HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)、HBV-DNA≥1.0E04、ALT＞40U/L(简称e~+ ALT＞40U／L组)共9例：E组：以排除HBV感染的健康体检者为对照组，共8例，(2)分离HBV感染者外周血单个核细胞：将所分离的PBMC分装成2份，1份检测总的p38[p38(Toral)]和磷酸化的p38[p38(pTpY180／182)]基线水平，另一份检测经LPS刺激后p38(Toral)和磷酸化的p38(pTpY180／182)，MAPK p38用定量ELISA方法测定。 [结果]经方差分析，未经LPS刺激时各组间p38(Total)和p38(pTpY180／182)无统计学差异(p＞0.05)；LPS刺激后各组间p38(Total)无统计学差异(p＞0.05)：LPS刺激后p38(pTpY180／182)e~+ALT＞40U/L组和对照组之间以及e~+ALT＞40U／L组和e~-DNA(-)组之间存在统计学差异(P＜0.05)。经独立样本的t检验，LPS刺激前后各组内p38(Total)无统计学差异(p＞0.05)。LPS刺激前后e~-DNA(-)组和e~+ALT＞40U／L组p38(pTpY180／182)存在统计学差异(p＜0.05)。其余组内无统计学差异。

很少 [结论] 1．HBV感染者PBMCs中，无论其血清免疫标志物、HBV-DNA水平及ALT升高与否，MAPK p38总量和磷酸化基线水平无明显差异，与对照组相似。
第一部分摘要 吗啡依赖对红细胞膜的脂质过氧化作用 目的 探讨吗啡依赖猴红细胞的脂质过氧化损伤情况。研究吗啡依赖是否可以直接导致红细胞脂质过氧化损伤和红细胞数量减少，受损红细胞增加。

方法 恒河猴15只，雌性7只，雄性8只，体质量3.42～5.56 kg，皮下注射吗啡，以剂量递增方式建立吗啡依赖猴模型。第1、2、3、4周剂量分别为每次3mg／kg、6 mg／kg、9 mg／kg、12 mg／kg，第5～13周剂量为每次15mg／kg，每天皮下注射吗啡3次。检测第一次注射吗啡前一天和吗啡依赖模型建立成功后一天红细胞丙二醛、谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物岐化酶、血红蛋白含量和红细胞数。 结果 建模前丙二醛为2.46±0.65μmol／L，建模后升至3.52±1.5μmol／L(P＜0.01)；谷胱甘肽过氧化物酶建模前为8833.3±878.8U／L，建
细胞内的信号转导途径调节细胞对于来自胞内外刺激的反应。丝裂原活化蛋白激酶信号转导途径是真核生物中普遍存在的信号转导机制之一,三级激酶级联反应是其通路的核心成份。然而2002年Ge等发现TAB1所介导的p38α自我磷酸化反应打破了传统的MAPK家族只能通过三级激酶的磷酸化途径来激活的观念,这一直接激活机制,成为MAPK激活机制的一个有力补充。此外,TAB1与p38α的相互作用在p38家族中是十分特异的。因而确定TAB1和p38α相互作用必需区域氨基酸的序列将有助于对这一令人感兴趣的蛋白?蛋白相互作用的分子机制的理解。 selleckchem 本论文分析了TAB1的缺失突变体和点突变体与p38α的相互作用,发现其羧基末端的脯氨酸残基(Pro412)是与p38α结合的必要位点,并进一步发现Pro412氨基末端存在一个貌似“D-结构域”的结合位点,而Pro412正好处于结合位点的ΦB+3的位置。通过突变体分析,我们发现以前报道的p38α中的疏水结合槽也与该相互作用有关,而CD结构域和ED位点却与之无关。同时,用不与TAB1相互作用的p38β和p38α构建嵌合拼接体,发现Thr218和Ile275是p38α特异性结合于TAB1的重要位点。并且将其中的任何一个残基置换为p38β的相应氨基酸都会阻止p38α和TAB1结合。当p38α的底物和激活物与p38α结合时,结合位点(p38α的疏水结合槽)发生了较大的构象改变,而Thr218和Ile275恰在这个位置附近,这提示我们TAB1诱导p38α自我磷酸化也可能是由于p38α发生了类似于p38α与其底物或激酶相互作用时引起的独特的构象变化。
背景和目的

Tyrosine Kinase 抑制剂 Library价格 糖尿病肾病(DN)是糖尿病(DM)常见的慢性并发症，也是DM患者死亡的主要原因之一，目前尚无有效的治疗手段。未经治疗的早期DN患者将快速进展，多数在较短时间内到达终末期肾病(ESRD)阶段。治疗早期DN可延缓其进展，对提高患者生活质量、延长其生存年限意义重大。多项研究均表明，血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)／血管紧张素受体拮抗剂(ARB)可通过抑制肾脏局部过度激活的肾素-血管紧张素-醛固酮系统起到肾脏保护作用，且联合两者效果更佳。本文即通过观察西拉普利联合伊贝沙坦对早期DN的影响，探讨两者在防治DN中的作用。 方法 将血压正常的早期DN共12例分为西拉普利组(A组)、伊贝沙坦组(B组)和联合用药组(C组)，A组给予西拉普利2.5mg，每日1次；B组给予伊贝沙坦150mg，每日1次；C组给予西拉普利2.

0对结果进行统计学分析,多组间比较采用单因素方差分析,组间比较采用q检验。

结果: 1、SHG-44细胞株在DMEM培养液中生长良好,在倒置显微镜下可见细胞呈长梭形,核异形性常见。细胞的冻存与复苏对细胞生物学特性没有影响。加入他莫昔芬后,细胞折光性变弱,轮廓增强,突起减少,胞质中出现大量颗粒,细胞之间的间隙明显增大,细胞变老,脱落,生长受到抑制。正常对照细胞生长良好。2、加入PKCα抗体的SHG-44细胞的细胞质中出现棕黄色染色,提示细胞中含有PKC,而加入ER抗体的细胞中未出现染色,提示SHG-44细胞中无ER成分。3、MTT试验显示:应用不同浓度他莫昔芬作用后测量各培养孔的吸光值,与空白对照组相比,他莫昔芬使细胞的吸光值明显下降。再计算细胞的抑制率,结果显示,随着他莫昔芬从2μmol/L上升至10μmol/L,SHG-44细胞的抑制率也明显增加,但超过10μmol/L,则抑制率的变化就不够显著。同一药物浓度下,48h组的细胞抑制率明显高于24h组,但与48h组相比较,在72h组中只有6μmol/L组的抑制率增加了。4、流式细胞仪检测显示:与空白对照组相比,SHG-44细胞经过他莫昔芬作用后,G0/G1期细胞比例减少,G2/M期及S期细胞比例增多,细胞阻滞于G2/M期及S期。细胞凋亡检测显示:与空白对照相比,应用他莫昔芬组凋亡细胞比例增高,并且随着作用剂量的增加,凋亡细胞比例有增多的趋势。 PI3K抑制剂 第二部分SHG-44人胶质瘤细胞离子通道特性及他莫昔芬调控研究 方法:1、培养SHG-44胶质瘤细胞,试验前,以0.25%胰蛋白酶及0.02% EDTA消化,制成细胞悬液,接种于预先放置盖玻片含无血清培养基的培养板中,经过48小时后可进行膜片钳记录。应用全细胞膜片钳方式记录SHG-44细胞膜上的钠通道、内向整流钾通道及氯离子通道电流,细胞破膜后5min开始记录。2、绘制各离子通道的电流密度–电压关系(I–V)曲线。观察施用不同浓度他莫昔芬后各离子通道的I-V曲线及峰值电流密度的变化。3、以I/Imax为纵坐标,以他莫昔芬浓度为横坐标,绘制各通道药物作用的量效关系散点图,以Origin 7.5软件行Hill拟合,求出他莫昔芬抑制各离子通道的半数抑制浓度(IC50)值。4、以标准化后的电导值对测试电压脉冲作图。以Origin 7.5软件行Boltzmann拟合,绘出对照组及各处理组钠、钾、氯通道的激活曲线,求出通道的半数激活电压(V1/2)及斜率(k)值,并观察不同浓度的他莫昔芬对它们的影响。5、比较空白组及加入他莫昔芬、PKC抑制剂、PKC激活剂、他莫昔芬+PKC抑制剂各处理组之间的氯离子通道电流变化情况,以分析他莫昔芬对通道的影响是否与抑制PKC活性有关及其程度。他莫昔芬浓度为1.5μmol/L selleck合成 ,PKC抑制剂为100nmol/L十字孢碱(staurosporine),PKC激活剂为1μmol/L 12-佛波醇脂(PMA)。6、应用SPSS 12软件进行统计学分析。计量资料以均数±标准差(χ-±s)表示,首先进行组间均衡性检验,两组计量资料采用t检验或配对t检验,成组资料间比较采用配伍组分析,以P
目的: 1.研究月经周期不同时期人输卵管黏膜上皮维生素D受体(vitamin

D receptor,VDR)蛋白及其mRNA的表达与变化,阐明人输卵管组织中是否存在VDR表达及其表达状况。 2.检测输卵管妊娠病理状态下人输卵管黏膜上皮VDR蛋白的表达及其变化,分析人输卵管黏膜上皮VDR蛋白表达与输卵管妊娠发病的可能关系。 3.体外培养人输卵管上皮细胞,观察1α,25-二羟维生素D_3(1α,25-dihydroxyvitamin D_3,1α,25-(OH)_2D_3)对人输卵管上皮细胞增殖的影响。

4.检测1α,25-(OH)_2D_3对体外培养人输卵管上皮细胞VDR、钙结合蛋白calbindin-D28k(CaBP-D28k)mRNA及其蛋白表达的影响,分析1α,25-(OH)_2D_3对人输卵管上皮细胞VDR、CaBP-D28k表达可能的调控作用,探讨1α,25-(OH)_2D_3调节人输卵管上皮细胞CaBP-D28k表达可能的作用机制。 方法: 1.应用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)法和逆转录聚合酶链反应(reversetranscription polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测人输卵管黏膜上皮VDR蛋白及其mRNA的表达。 2.应用IHC法检测输卵管妊娠病理状态下,种植部位和非种植部位人输卵管黏膜上皮VDR蛋白的表达。 3.应用机械法结合差速贴壁原理获取并体外培养人输卵管上皮细胞,免疫细胞化学(immunocytochemistry,ICC)法鉴定上皮细胞纯度,建立人输卵管上皮细胞的体外培养体系。应用噻唑兰(3.(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium JQ1购买 bromide,MTT)比色法检测1α,25-(OH)_2D_3对体外培养人输卵管上皮细胞增殖的影响。 4.应用RT-PCR法和免疫印迹(Western blot,WB)法检测1α,25-(OH)_2D_3对体外培养人输卵管上皮细胞VDR、CaBP-D28k mRNA及其蛋白表达的影响。 结果: 1.人输卵管黏膜上皮VDR蛋白及VDR mRNA的表达 人输卵管黏膜上皮可检测到VDR蛋白及其mRNA表达。VDR蛋白主要表达于人输卵管上皮细胞的细胞核内,部分间质平滑肌细胞核内亦可见阳性染色。相同时期各不同部位人输卵管上皮细胞VDR蛋白表达无明显差别(P＞0.05),随月经周期变化,各不同部位输卵管上皮细胞VDR蛋白表达发生改变,在增生早期和分泌中晚期较低,与之比较,在增生中晚期和分泌早期其表达明显增高(P＜0.01),至分泌早期达最高值。壶腹部人输卵管黏膜上皮组织VDR mRNA表达在增生早期和分泌中晚期较低,在增生中晚期和分泌早期明显增高(P＜0.01)。 2.输卵管妊娠病理状态下人输卵管黏膜上皮VDR蛋白的表达 输卵管妊娠病理状态下,种植部位和非种植部位人输卵管黏膜上皮均可检测到VDR蛋白阳性表达。VDR蛋白阳性表达于输卵管上皮细胞的细胞核内,部分间质平滑肌细胞核内亦可见阳性染色。种植部位人输卵管上皮细胞VDR蛋白表达较低,与之比较,非种植部位输卵管上皮细胞VDR蛋白表达明显增高(P=0.017,P＜0.05)。 3.

目的观察血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)是否可以诱导大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)基质金属蛋白酶2(MMP-2)基因表达及VSMC的迁移,探讨p38信号通路在这一过程中的作用,为血管重建性疾病的研究提供实验依据。方法 PDGF-BB不同浓度和不同时间刺激体外培养的大鼠VSMC,用放线菌素D、SB202190(MAPK/p38特异性抑制剂)处理PDGF-BB诱导的VSMC。细胞划痕实验检测细胞迁移,运用Real-time RT-PCR检测MMP-2基因表达水平,Western blot检测p38的活性变化。结果 PDGF-BB可促进VSMC迁移,SB202190可抑制PDGF-BB诱导的VSMC迁移。不同浓度PDGF-BB(10μg/L~50μg/L)作用VSMC

0.5 h,MMP-2基因表达明显增加,其中以20μg/L较显著;用20μg/L PDGF-BB作用VSMC 0.5 h~4 h,可显著上调MMP-2基因表达,以0.5 h较显著。用放线菌素D和SB202190预处理后MMP-2基因表达降低。PDGF-BB可激活VSMC中磷酸化p38水平,SB202190可抑制p38的磷酸化以及相应的MMP-2基因表达。结论 p38参与了PDGF-BB诱导的VSMC迁移及MMP-2基因表达。
目的探讨猕猴桃根多糖(Actinidia chinensis Planch polysaccharid,ACPS)对人胃腺癌细胞(SGC-7901)增殖和凋亡的影响,及对SGC-7901细胞磷酸化p38(p-p38)蛋白表达的影响。方法采用CCK-8检测不同浓度ACPS对SGC-7901细胞的24、48、72 INCB018424细胞系 h的抑制作用;流式细胞技术检测各浓度ACPS作用48 h后SGC-7901细胞凋亡的发生率;Western

blot法检测各浓度ACPS作用SGC-7901细胞后前体半胱氨酰天冬氨酸酶-9(pro-caspase-9)、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)和p-p38蛋白量的表达,以及p38特异性抑制剂预处理细胞后pro-caspase-9、PARP和p-p38蛋白量的表达。结果与对照组比较,1、2.5、5、10 mg/mL ACPS作用胃癌SGC-7901细胞后吸光度下降(P<0.05);同时药物剂量越高,作用时间越长,吸光度越低(P<0.01),增加PARP剪切蛋白的表达(P
目的观察体外模拟低剪切力对血管内皮细胞产生的氧化应激性损伤并探讨其可能机制。方法用平行板流动腔装置于体外模拟低剪切力作用于体外培养的人脐静脉内皮细胞60 OTX015研究购买 min后,用MitoSOX检测线粒体内活性氧簇(ROS)含量,用TUNEL及DAPI染色标记凋亡的细胞。低剪切力作用不同时间后,用Western Pomalidomide溶解度 blotting检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS),P38,细胞外调节蛋白激酶(ERK),c-Jun及其磷酸化蛋白的表达水平,并分别用P38,ERK和c-Jun的抑制剂作用细胞后检查eNOS的负性调节位点Thr495的表达。结果体外模拟低剪切力可以明显诱导血管内皮细胞的氧化应激性损伤伤,呈时间依赖性激活eNOS、P38、ERK及c-Jun蛋白的磷酸化,但对总蛋白的合成无影响。ERK抑制剂可有效抑制eNOS-Thr495的活化并逆转LSS诱导的细胞内超氧化物歧化酶(SOD)减少。结论体外模拟低剪切力诱导的细胞氧化应激性损伤与促分裂素原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路活化有关,ERK/eNOS的活化参与低剪切力调节的氧化应激。
【目的】研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)选择性抑制剂SB202190对卡英酸(KA)致痫大鼠学习、记忆能力的影响及其与海马神经元凋亡的关系的探讨。【方法】40只大鼠随机分为4组:假处理组、模型组和SB202190低、高剂量组(剂量分别为7.5

mg/kg,30 mg/kg),对各组大鼠进行行为学观察,应用Morris水迷宫试验,检测大鼠学习和记忆能力,同时通过BL-420F生物机能实验系统描记脑电图的变化,采用TUNEL检测细胞凋亡并计算凋亡率,应用免疫组织化学染色及Westernblotting方法检测与凋亡有关的因子:Bcl-2、Bax和Caspase-3。【结果】假处理组无发作;模型组给KA后均出现3～5级癫痫发作;与模型组相比,低、高剂量SB2021902组发作程度明显减轻,表现为1～3级;Morris水迷宫试验:定位航行试验:SB202190两个剂量组逃避潜伏期同模型组比较均明显缩短(P<0.05),以高剂量组显著;空间探索试验:同模型组比较,SB202190两个剂量组第一象限停留时间均延长(P<0.05),穿环指数均增加(P<0.05),以高剂量组显著;模型组较假处理组Bax、Caspase-3因子表达明显增强(P<0.01),同时Bcl-2因子表达明显减弱(P<0.01),细胞凋亡明显增加,而与模型组比较,SB202190两个剂量组使这些结果发生相反改变(P<0.

8%±12.0%,63.5%±11.1% and 76.3%±12.3%, respectively.The effect of twice exposure to 3vol% isoflurane was blocked by U0126(6.1%±1.5%).Conclusion It is concluded that 寻找更多 twice isoflurane preconditioning could achieve better neuroprotection than once via activation of extracellular signal-regulated protein kinase(MEK-ERK1/2).
目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38MAPK)和环氧化酶-2(cvclooxygenase-2,COX-2)的关系,从而研究p38MAPK和COX-2在糖尿病肾病中的作用及硒在防治糖尿病肾病中的作用机制。方法分别以高葡萄糖、高胰岛素、过氧化氢和糖基化终末产物孵育大鼠肾小球系膜细胞系HBZY-1;先给予p38MAPK特异性抑制剂SB203580和亚硒酸钠分别预处理细胞系HBZY-1后,再给予上述4种因素孵育细胞系HBZY-1,观察细胞系HBZY-1

p38MAPK和COX-2的蛋白表达。结果高葡萄糖、高胰岛素、过氧化氢和糖基化终末产物均可独立激活p38MAPK,使其磷酸化表达量增加,COX-2蛋白表达也明显增加;SB203580预处理后,COX-2蛋白表达被显著抑制;亚硒酸钠预处理后,p38MAPK磷酸化被明显抑制,同时COX-2蛋白表达明显降低。结论p38MAPK调控COX-2的表达,表明p38MAPK是COX-2的上游激酶之一,p38MAPK和COX-2在糖尿病肾病的发生发展过程中起重要作用;亚硒酸钠可通过抑制p38MAPK而抑制COX-2表达,从而表明硒能有效地防治糖尿病肾病。
目的探讨促分裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)在蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管痉挛(CVS)

中的作用。方法采用枕大池二次注血的方法建立SAH模型。用酶联免疫吸附测定法(ELISA)、免疫组织化学、测量基底动脉横截面积的方法分别检测兔脑脊液肿瘤坏死因子-α(TNF—α)浓度变化及平滑肌细胞p38MAPK的表达与CVS程度变化的关系。结果 TNF—α浓度在注血后第3天达高峰,持续到第5天时,与注血前有明显差异(P< 0．01);平滑肌细胞p38MAPK表达增强;基底动脉横截面积则显著小于对照组(P0．05)。结论 因为 SAH后继发性的CVS可能是激活的p38MAPK通过对细胞因子增量调节机制作用的结果。
目的探讨脓毒症肝损害的原因及p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂的保护作用。方法采用盲肠结扎并穿刺(CLP)来制作脓毒症模型。在不同时相点观察大鼠肝功能[谷丙转氨酶(ALT)]、血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)浓度。结果CLP术后血清TNF-α、IL-1β进行性升高,ALT也显著升高。血清ALT、TNF-α、IL-1β呈显著正相关。应用p38MAPK抑制剂SB203580后,血清TNF-α、IL-1浓度显著降低,同时血ALT减低。结论TNF-α、IL-1的大量释放是脓毒症肝损害的原因之一,通过调控p38MAPK信号通路可对脓毒症鼠肝损害起保护作用。
目的:通过瞬时转染p38MAPK途径中上游激酶,组成激活型MAPK激酶3和MAPK激酶6,进一步了解p38MAPK级联传导信号系统调节诱导型一氧化氮合酶基因在胶质细胞中的转录激活机制。方法:实验于2003-01/2004-08在美国南卡洲医科大学神经科学研究室和南通大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室进行。采用MAPK激酶3和MAPK激酶6表达质粒与接有荧光素酶的大鼠诱导型一氧化氮合酶启动基因质粒;cAMP反应元件和核因子-κB联合转染C6胶质细胞株。测定荧光素酶活性,观察诱导型一氧化氮合酶基因激活表达机制。结果:①MKK3b/MKK6b能引起诱导型一氧化氮合酶启动基因质粒的激活,并都能够被p38MAPK抑制剂SB203580所抑制。②MKK可以诱导cAMP反应元件介导的和核因子-κB依赖的转录活性。③显性抑制型CRE结合蛋白和CCAAT/增强子结合蛋白都是p38MAPK的靶向作用目标,转染这两种转录因子产生相反的影响:显性抑制型CRE结合蛋白增强了诱导型一氧化氮合酶启动基因质粒的表达,而显性抑制型CCAAT/增强子结合蛋白则引起抑制作用,对cAMP反应元件也具有相同的影响。④此外,激活型MAPK激酶3和MAPK激酶6诱导诱导型一氧化氮合酶启动子的激活能够被野生型活化转录因子增强。然而磷酸化缺陷型的野生型活化转录因子则起抑制作用。结论:转录因子的靶向作用特点,对于炎症反应中NO的过量产生具有选择干扰性,在临床上具有实用价值。
采用CD62L生物素-链霉亲和素染色流式细胞术检测L-选择素在细胞表面表达的方法,分别观察新鲜PBMC和刺激后培养3~21

查找更多 d的γδT细胞表面L-选择素的表达,并研究培养6~7 d的MtbAT预先用LY294002(PI3K途径抑制剂)、SB203580(p38途径抑制剂)、PD98059(MEK抑制剂)分别处理20 min,然后用Mtb-Ag再刺激3 h时γδT细胞表面L-选择素的表达情况。结果显示新鲜PBMC中γδT细胞L-选择素的表达率为(43.9%±6.7%),αβT细胞L-选择素的表达率为(76.6%±7.

95%、71.74%、80.88%，变异系数分别为2.15%、4.33%、6.50%；肺的绝对回收率分别是71.55%、66.02%、93.77%，变异系数分别为11.96%、7.21%、5.82%；肾脏的绝对回收率分别是68.65%、72.52%、68.63%，变异系数分别为7.70%、6.74%、10.01%；脑的绝对回收率分别是55.11%、74.47%、93.70%，变异系数分别为7.62%、3.42%、3.11%。SU2162在血、心、肝、脾、肺、肾、脑的绝对回收率均大于50%，变异系数均小于15%，SU2162在血、心、肝、脾、肺、肾、脑的绝对回收率均符合要求[71]。SU2162高、低浓度氮气吹干的生物样品-20℃放置4天的稳定性分别为98.25%、104.66%；SU2162高、低浓度乙腈复溶后的样品-20℃反复冻融5次(每次间隔24h)的稳定性分别为104.79%、101.48%。该方法简单、灵敏、稳定，适用于SU2162的体内药物分析。 所以 本课题对SU2162在大鼠体内的药动学进行研究。静脉注射给予大鼠单剂量的SU2162，高效液相色谱法测定SU2162的血药浓度，应用3P97和kinetica药动学软件对测得的数据进行房室模型拟合。结果表明SU2162在大鼠体内符合以1/c2为权重系数的二室模型。

3P97药动学软件计算得到的房室模型药动学参数如下：分布相混合参数A为6.7873mg/L，消除相混合参数B为2.5753mg/L，分布相混合一级速率常数α为6.50331/h，消除相混合一级速率常数β为0.60781/h，血药浓度与时间关系方程为C=6.7873×e~(-6.5033t)+2.5753×e~(-0.60781t)。表观分布体积Vc为0.5874L/kg，分布半衰期T1/2α为0.1066h，消除相半衰期T1/2β为1.1404h，中央室向周边室转运的速率常数K12为3.1087h-1，从周边室向中央室转运的速率常数K21为2.2294h-1，总消除速率常数K10为1.7729h-1，血药浓度时间曲线下面积AUC为5.2808(mg/L)*h，清除率CL为0.3115L/h。 Kinetica药动学软件计算得到的房室模型药动学参数如下：达峰时间为0h,最大血药浓度为9.3621mg/l，分布相混合参数A为6.7875mg/L，消除相混合参数B为2.5747mg/L，分布相混合一级速率常数α为6.50191/h，消除相混合一级速率常数β为0.60761/h，中央室向周边室转运的速率常数K12为3.1082h-1，从周边室向中央室转运的速率常数K21为2.2286h-1，总消除速率常数K10为1.7728h-1，分布半衰期T1/2α为0.1066h，消除相半衰期T1/2β为1.1404，总消除半衰期T1/2kel为0.3910h，表观分布体积Vc为0.5874L/kg，稳态表观分布体积Vss为1.4066L/kg，血药浓度时间曲线下面积AUC为5.2808(mg/L)*h，清除率CL为0.3115L/h。3P97和Kinetica药动学软件计算得到的药动学参数相似，没有显著性差异。

Kinetica药动学软件计算得到的非房室模型药动学参数如下：最大血药浓度Cmax为7.8157mg/l，达峰时间Tmax为0.05h，血药浓度时间曲线下面积AUC为5.0774(mg/l)*h，末端相的血药浓度消除速率常数Lz为0.74981/h，半衰期T1/2为0.9244h，平均驻留时间MRT为1.1961h，清除率CL为0.3240L/h，稳态表观分布体积Vss为1.2957L/kg，末端相表观分布体积Vz为1.4447L/kg。 selleck screening library 本课题对SU2162在大鼠体内的组织分布进行研究。给大鼠单剂量静脉注射SU2162后，应用高效液相色谱法测定SU2162在各组织中的浓度，根据不同时间药物分布的特点，以及非房室模型处理的结果，探讨SU2162在大鼠体内的组织分布情况。 非房室模型处理的结果显示脾脏的AUC值最高，为6.7685(mg/l)*h，其次是肝和肾，分别为2.6847(mg/l)*h和2.5829(mg/l)*h。肝的末端相的血药浓度消除速率常数(Lz)最大为1.57291/h，消除最快；最慢的是脾脏，其次是肾脏。肝的消除半衰期最短，为0.4407h；半衰期最长的是脾脏，其次是肾脏。肝的平均驻留时间(MRT)最短，为0.6760h；最长的是脾脏，其次是肾脏。由此可知，SU2162进入脾脏的药量最多，在脾脏的消除速度最慢。加之，0.03h至0.83h时，药物在脾脏的浓度迅速减少；0.83h至1.33h时，脾脏中的药物浓度迅速增加。这些结果显示SU2162会在脾脏中蓄积。SU2162进入肝脏的量次多，在肝脏中的消除半衰期为0.4407h，反映SU2162在肝脏中的代谢最快，说明其在肝脏有靶向作用，证明了我国中医学长期用斑蝥治疗肝癌是有科学依据的。SU2162进入肾脏的量与肝脏相当，但是在肾脏的消除速度是除脾脏外最慢的。肝的稳态表观分布体积和末端相表观分布体积均最小，显示了SU2162在肝中分布最多。
背景：肺癌是严重人类健康和生命的恶性肿瘤,发现多为晚期,预后差。中西医结合治疗肺癌如何进一步改善临床症状,减轻放化疗副作用,提高生存质量等方面仍值得深入研究。

目的：观察肺积复康方在改善非小细胞肺癌(NSCLC)中医证候、生活质量及减轻化疗毒副反应等方面的作用,为NSCLC的中西医结合临床诊治探索新的方法。 方法：采用肺积复康方联合GP方案治疗NSCLC患者20例,设对照组,疗程两个周期,观察治疗前后患者中医证候、生活质量及毒副反应等的变化。 什么 结果：两组治疗后中医证候积分均有明显改善(P<0.05),但治疗组治疗后改善更为明显(P<0.05),两组中医证候积分总有效率分别为80%和50%,治疗组有显著优势(P<0.05)。治疗组治疗后生活质量评分提高1.70,对照组为-0.50,两组治疗前后相对基线变化比较有非常显著差异(P<0.01)。治疗组治疗后Karnofsky评分提高7.87,对照组提高1.17,两组治疗前后相对基线变化比较有显著差异(P<0.05)。两组毒副反应比较,治疗组白细胞、红细胞减少和恶心呕吐发生率较对照组轻(P0.05)。 结论：肺积复康方联合GP方案治疗NSCLC患者具有改善中医证候、提高生活质量及减轻化疗毒副反应的作用。
In this study, a nonlinear quantitative structure–activity relationship model for the prediction of the IC_(50) of 6-alkenylamides of 4-anilinothieno [2, 3-d] pyrimidine as epidermal growth factor receptor(EGFR) inhibitors was developed by the Gene Expression Programming(GEP). This model is based on…

4)洗涤3次×5min；除去PBS液,每张切片加50uL生物素标记的羊抗小鼠二抗,室温下孵育20min,孵育后PBS冲洗3次,每次5min；甩去PBS液,滴加50uL链霉菌抗生物素-辣根过氧化物酶溶液,室温孵育40min,PBS冲洗5min×3次；DAB显色3-5min,显微镜下控制,自来水冲10min-15min终止反应,苏木素复染约3min,梯度酒精脱水和二甲苯透明后中性树胶封片。结果判断由两个独立的病理医生无相关样本临床资料的信息分析,出现结果不一致时重新判片,直至达成一致意见。结果判定的标准：以细胞浆出现棕黄色颗粒的细胞定为阳性细胞,每张切片采用盲法随机观察10个高倍镜视野(×400),结果采用半定量计分方法,根据细胞染色强度(A)和染色细胞所占的比例(B)两者乘积来判定。

3、采用RT-PCR方法检测膀胱尿路上皮癌组织及其对应的癌旁正常膀胱组织由Nodal mRNA表达水平,并分析Nodal mRNA表达与膀胱尿路上皮癌病理分级及临床分期的关系 GenBank上查找NodalmRNA序列,并应用在线引物设计软件Premier Primer5.0和Oligo6设计相关引物。引物均由上海英骏生物技术有限公司合成。按照Trizol Reagent说明书将总RNA提取后,按70℃5min,37℃5min,42℃60min,70℃10min进行反转录合成cDNA,加4uL反转录DNA产物于25uLPCR反应体系中,94℃5min,94℃30s,55℃45s,72℃1min,循环36次。选择β-actin为PCR内参。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像系统分析后,计算待测指标与B-actin A值的比值。应用SPSS13.0软件进行统计学分析比较膀胱尿路上皮癌生物学行为与Nodal mRNA表达之间的关系,PⅡ级(PⅠ级(PT1期>Ta期(P均
目的：近年来，有研究表明GDF-15可以诱导外周单个核细胞（PBMC）中Foxp3转录水平的的增加，Foxp3是调节性T细胞（Tregs）的标志性分子，那么GDF-15对Tregs分化发育及功能有何影响呢？因此本研究拟探讨GDF-15在体外诱导人Na ve CD4~+T细胞向Tregs分化过程中的作用及其影响；通过临床样本观察结直肠癌患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞比例和血清中GDF-15表达水平的相关性；初步探讨GDF-15在iTregs分化中的分子作用机制。 GW-572016数据表 方法：本课题设计了以下三个方面实验：1、GDF-15诱导iTregs分化及其功能的鉴定。通过采取免疫磁珠法分选Na ve CD4~+T细胞，经GDF-15刺激后，通过Real-time PCR、流式细胞术检测标志性分子Foxp3、CD25，GITR，CD103等的表达，通过Real-time PCR、ELISA检测抑制性细胞因子IL-10和TGF-β等的分泌从而鉴定GDF-15诱导的iTregs表型，进一步用BrdU掺入和CFSE检测诱导的iTregs对效应CD4~+T细胞增殖的影响，同时收集培养细胞上清用ELISA检测诱导的iTregs分泌的功能相关细胞因子IL-10和TGF-β等。2、收集临床标本，流式细胞术检测外周CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞比例以及ELISA检测血清中GDF-15浓度，进而分析两者相关性；3、GDF-15在iTregs分化中的分子作用机制研究。利用激光共聚焦实验观察GDF-15在Na

ve CD4~+T细胞膜表面的表达情况，进一步用TGF-β受体阻断剂阻断后，Real-time PCR检测相关基因的转录水平。 结果：第一部分GDF-15诱导iTregs分化及其功能的鉴定的实验结果显示GDF-15能诱导Na 哪里 ve CD4~+T细胞向iTregs表型分化，且在GDF-15浓度为10ng/mL诱导5天时Foxp3的表达量最高，Real-time

GPCR Compound Library体内 PCR和流式细胞术显示iTregs的相关功能分子如Foxp3、CD25、GITR和CD103均表达升高。在进行相关功能检测中，Real-time PCR和ELISA实验显示iTregs可以分泌功能相关的抑制性细胞因子IL-10和TGF-β，BrdU掺入和CFSE实验结果进一步证实诱导的iTregs具有抑制效应CD4~+T细胞增殖的作用。第二部分临床实验通过SPSS13.0分析表明结直肠癌患者外周CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞与血清中GDF-15表达水平两者之间具有良好的相关性，相关系数达到0.7909。第三部分GDF-15在iTregs分化中的分子作用机制的实验中，通过激光共聚焦检测发现，GDF-15在Na ve CD4~+T细胞膜表面存在定位现象，Real-time PCR结果显示TGF-β受体阻断剂SB431542可以抑制GDF-15诱导Na ve CD4~+T分化过程中Foxp3的表达。 结论：GDF-15可以在体外诱导Na ve CD4~+T细胞向调节性T细胞方向分化，同时表现出天然调节性T细胞的表型和抑制功能；临床上结直肠癌患者外周CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞与血清中GDF-15表达水平表现出良好的相关性；初步确认了GDF-15可以在Na ve CD4~+T细胞表面存在定位现象，提示Na ve CD4~+T表面可能有GDF-15受体的存在。
目的：探讨TGF-β1/Smad信号通路在食管鳞癌上皮-间质转化（EMT）的作用及其机制；在细胞学实验的基础上探讨TGF-β1/Smad信号通路蛋白和EMT相关蛋白在哈萨克族食管鳞癌中的表达，分析其与临床病理特征的关系，为深入研究TGF-β1/Smad信号通路调控哈萨克族食管癌EMT的发生发展作用机制奠定基础，为食管癌浸润转移的阻断治疗提供理论基础。 方法：用不同浓度的重组TGF-β1刺激及TGFβ受体抑制剂SB431542抑制处理食管癌细胞Eca109，采用Western Blot方法检测TGF-β1/Smad通路和EMT相关蛋白表达水平；Transwell侵袭实验检测侵袭和迁移能力；进一步运用免疫组化检测100例食管鳞癌组织和58例癌旁非癌组织构成的组织芯片，研究TGF-β1/Smad信号和EMT相关蛋白的表达，分析TGF-β1/Smad和EMT相关蛋白与临床病理参数的关系。 结果： TGF-β1处理Eca109细胞，可以诱导细胞发生EMT形态改变，并且增强细胞侵袭能力，Western Blot检测发现N-cadherin、Vimentin、Smad2/3和Smad4蛋白表达显著上调，但Smad7蛋白表达下调；而SB431542处理细胞，结果显示：Vimentin、Smad2/3和Smad4蛋白表达水平下调，Smad7蛋白表达水平上调；免疫组化检测哈萨克族食管鳞癌组织中TGF-β1、p-Smad2/3、N-cadherin和Vimentin蛋白表达明显高于癌旁组织中的表达（p＜0.001），E-cadherin蛋白在食管鳞癌组织中的表达低于癌旁组织中的表达（p＜0.

0统计软件分析数据。2、在细胞水平,采用血清饥饿合并释放同步化处理卵巢癌细胞,流式细胞仪检测细胞周期,Western MG-132分子量 blot及核浆分离技术检测Cyclin H及相关分子的表达。构建Cyclin H过表达、核定位缺失及干扰表达载体,并稳定转染细胞株,MTT法、Western blot、核浆分离、Transwell及免疫共沉淀等实验分析Cyclin H参与卵巢癌细胞增殖及侵袭的影响及其机制。3、在体内研究水平,采用裸鼠成瘤实验研究Cyclin H对卵巢肿瘤生长的影响。 结果1.免疫组化结果显示：在不同组织分级的卵巢癌中,Cyclin H在卵巢癌中的表达水平随肿瘤恶性程度增高而增高,有显著差异(P2+)的患者(P=0.003)。 2.构建Cyclin H过表达、核定位缺失及干扰表达载体,筛选稳定转染细胞株,并鉴定。MTT法检测正常的及以上稳定转染的卵巢癌H08910细胞株的增殖情况,过表达Cyclin H能促进H08910细胞的增殖(P0.05)。在血清饥饿-释放的H08910细胞增殖模型中,Cyclin H、CDK7及MAT1的表达上调,同时CDK2的磷酸化水平也上调。核浆分离显示在H08910细胞增殖中,胞核中的Cyclin

H、CDK7及MAT1表达增加,而胞质中无明显改变。免疫共沉淀显示在H08910细胞的增殖中,Cyclin H与CDK7及MAT1形成复合物的能力上调。Western Blot检测过表达Cyclin H的H08910细胞中的P-CDK2的表达上调,抑制Cyclin H的表达能抑制P-CDK2的水平。 3.Transwell实验发现,过表达Cyclin H的H08910细胞的侵袭能力增加(P
目的1、通过44种细胞常见信号通路蛋白靶向抑制剂作用小鼠MC3T3-E1细胞,从中筛选出对细胞的增值有明显抑制作用的抑制剂。 2、选取有效抑制剂作用于小鼠MC3T3-E1细胞,观察抑制剂对细胞周期的影响以及对细胞周期与细胞凋亡相关蛋白表达的影响。探讨影响成骨细胞增殖的相关信号通路。 方法1、应用44种细胞信号蛋白抑制剂,分别以4种不同浓度(0.01uM/L、0.1uM/L、1uM/L、10uM/L)作用于小鼠MC3T3-E1细胞,应用MTS法检测各组细胞存活率,筛选出对小鼠MC3T3-E1细胞有明显抑制且呈剂量依赖性的抑制剂。 2、选取其中S1021(Dasatinib)(靶点为SRC/ABL)、S1111(XL880(GSK1363089))(靶点为MET/VEGFR)两种抑制剂,分别以0.5uM/L作用于小鼠MC3T3-E1细胞,运用FACS法检测各周期(Sub-G1,G1,

S, G2/M)细胞百分比,分析抑制剂对成骨细胞增殖周期的影响。 3、运用western blot检测抑制剂作用后MC3T3-E1细胞CCND1、P53、AKT、 P-AKT及BAX的表达。 结果1、通过MTS法共筛选出7种抑制剂,可以显著抑制小鼠MC3T3-E1细胞的增殖,且抑制效果呈剂量依赖关系。七种抑制剂为：S2703(GSK1838705A)、 ATM激酶抑制剂购买 S2743(PF-04691502)、S1021(Dasatinib)、S1064(Masitinib)、S1065(GDC-0941)、 S1111(XL880)、S1120(Everolimus)。 2、以0.5uM/L的抑制剂S1021(Dasatinib)、S1111(XL880)分别作用于小鼠MC3T3-E1细胞。与对照组比较,S1021组Sub-G1细胞比例显著增高(P=0.00)；S1111组Sub-G1期细胞比例显著升高(P=0.01),且两组药物间无显著差异(P=0.26)。

3、与对照组比较,S1021可以抑制CCND1的表达,且可降低P-AKT的水平,对于P53及BAX的表达无明显影响。S1111可以抑制CCND1的表达,而对P-AKT、P53及BAX表达无明显影响。 结论：抑制SRC/ABL可以通过抑制AKT的磷酸化并下调CCND1抑制成骨细胞MC3T3-E1的增殖,抑制VEGFR/MET可以通过下调CCND1抑制成骨细胞增殖,说明SRC/ABL通过依赖AKT磷酸化的信号通路在成骨细胞增殖过程中起到关键作用。VEGFR/MET受体介导的信号通路在成骨细胞增殖中同样发挥重要作用,且其介导成骨细胞增殖过程不依赖于AKT的磷酸化。
背景 http://www.selleck.cn/products/azd5363.html 胃肠道间质瘤是最常见的间质源性的消化道肿瘤,该肿瘤主要分子特点是存在能够异常激活KIT与PDGFRA的基因突变。虽然病例的总体生存率随着酪氨酸激酶抑制剂的问世得到了很大的改善,但由于治疗过程中会产生KIT或PDGFRA的继发性突变,大多数病例最终仍然会发展到耐药阶段,造成病情的恶化。近来的研究表明,组蛋白乙酰基转移酶(histone acetyltransferase, HAT) CBP及p300的功能与多种肿瘤的发生发展密切相关,而应用针对CBP和p3DD的靶向小分子抑制剂则可以抑制某些实体瘤细胞的增殖并且诱导肿瘤细胞发生凋亡。此外,另有报道显示,CBP/p300可以在体外细胞模型中直接作用于一种转录因子ETV1,通过催化ETV1的乙酰化从而促进其的转录活性；而在GIST组织中,ETV1则有着特异性的表达,并且被认为是一种与GIST生存相关的特殊因子。因此,转录后乙酰化修饰在GIST起源与成瘤过程中的潜在作用已逐渐受到重视。 目的 明确ETV1在GIST组织与细胞中的表达特征及潜在生物学作用,进而探究其调控因子CBP/p300在GISTs成瘤和肿瘤细胞增殖过程中的作用,并评估它们在GIST靶向治疗中的应用前景。对选择性CBP/p300抑制剂C646的潜在治疗作用进了探索,并对具体的分子机制进行了深入的研究。 方法 通过向GIST细胞转染特异的小干扰RNA序列从而下调细胞中的ETV1.

0对结果进行统计学分析,多组间比较采用单因素方差分析,组间比较采用q检验。

结果: 1、SHG-44细胞株在DMEM培养液中生长良好,在倒置显微镜下可见细胞呈长梭形,核异形性常见。细胞的冻存与复苏对细胞生物学特性没有影响。加入他莫昔芬后,细胞折光性变弱,轮廓增强,突起减少,胞质中出现大量颗粒,细胞之间的间隙明显增大,细胞变老,脱落,生长受到抑制。正常对照细胞生长良好。2、加入PKCα抗体的SHG-44细胞的细胞质中出现棕黄色染色,提示细胞中含有PKC,而加入ER抗体的细胞中未出现染色,提示SHG-44细胞中无ER成分。3、MTT试验显示:应用不同浓度他莫昔芬作用后测量各培养孔的吸光值,与空白对照组相比,他莫昔芬使细胞的吸光值明显下降。再计算细胞的抑制率,结果显示,随着他莫昔芬从2μmol/L上升至10μmol/L,SHG-44细胞的抑制率也明显增加,但超过10μmol/L,则抑制率的变化就不够显著。同一药物浓度下,48h组的细胞抑制率明显高于24h组,但与48h组相比较,在72h组中只有6μmol/L组的抑制率增加了。4、流式细胞仪检测显示:与空白对照组相比,SHG-44细胞经过他莫昔芬作用后,G0/G1期细胞比例减少,G2/M期及S期细胞比例增多,细胞阻滞于G2/M期及S期。细胞凋亡检测显示:与空白对照相比,应用他莫昔芬组凋亡细胞比例增高,并且随着作用剂量的增加,凋亡细胞比例有增多的趋势。 Fulvestrant订单 第二部分SHG-44人胶质瘤细胞离子通道特性及他莫昔芬调控研究 方法:1、培养SHG-44胶质瘤细胞,试验前,以0.25%胰蛋白酶及0.02% EDTA消化,制成细胞悬液,接种于预先放置盖玻片含无血清培养基的培养板中,经过48小时后可进行膜片钳记录。应用全细胞膜片钳方式记录SHG-44细胞膜上的钠通道、内向整流钾通道及氯离子通道电流,细胞破膜后5min开始记录。2、绘制各离子通道的电流密度–电压关系(I–V)曲线。观察施用不同浓度他莫昔芬后各离子通道的I-V曲线及峰值电流密度的变化。3、以I/Imax为纵坐标,以他莫昔芬浓度为横坐标,绘制各通道药物作用的量效关系散点图,以Origin 7.5软件行Hill拟合,求出他莫昔芬抑制各离子通道的半数抑制浓度(IC50)值。4、以标准化后的电导值对测试电压脉冲作图。以Origin 7.5软件行Boltzmann拟合,绘出对照组及各处理组钠、钾、氯通道的激活曲线,求出通道的半数激活电压(V1/2)及斜率(k)值,并观察不同浓度的他莫昔芬对它们的影响。5、比较空白组及加入他莫昔芬、PKC抑制剂、PKC激活剂、他莫昔芬+PKC抑制剂各处理组之间的氯离子通道电流变化情况,以分析他莫昔芬对通道的影响是否与抑制PKC活性有关及其程度。他莫昔芬浓度为1.5μmol/L BGB324供应商 ,PKC抑制剂为100nmol/L十字孢碱(staurosporine),PKC激活剂为1μmol/L 12-佛波醇脂(PMA)。6、应用SPSS 12软件进行统计学分析。计量资料以均数±标准差(χ-±s)表示,首先进行组间均衡性检验,两组计量资料采用t检验或配对t检验,成组资料间比较采用配伍组分析,以P
目的: 1.研究月经周期不同时期人输卵管黏膜上皮维生素D受体(vitamin

D receptor,VDR)蛋白及其mRNA的表达与变化,阐明人输卵管组织中是否存在VDR表达及其表达状况。 2.检测输卵管妊娠病理状态下人输卵管黏膜上皮VDR蛋白的表达及其变化,分析人输卵管黏膜上皮VDR蛋白表达与输卵管妊娠发病的可能关系。 3.体外培养人输卵管上皮细胞,观察1α,25-二羟维生素D_3(1α,25-dihydroxyvitamin D_3,1α,25-(OH)_2D_3)对人输卵管上皮细胞增殖的影响。

4.检测1α,25-(OH)_2D_3对体外培养人输卵管上皮细胞VDR、钙结合蛋白calbindin-D28k(CaBP-D28k)mRNA及其蛋白表达的影响,分析1α,25-(OH)_2D_3对人输卵管上皮细胞VDR、CaBP-D28k表达可能的调控作用,探讨1α,25-(OH)_2D_3调节人输卵管上皮细胞CaBP-D28k表达可能的作用机制。 方法: 1.应用免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)法和逆转录聚合酶链反应(reversetranscription polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测人输卵管黏膜上皮VDR蛋白及其mRNA的表达。 2.应用IHC法检测输卵管妊娠病理状态下,种植部位和非种植部位人输卵管黏膜上皮VDR蛋白的表达。 3.应用机械法结合差速贴壁原理获取并体外培养人输卵管上皮细胞,免疫细胞化学(immunocytochemistry,ICC)法鉴定上皮细胞纯度,建立人输卵管上皮细胞的体外培养体系。应用噻唑兰(3.(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium 还有 bromide,MTT)比色法检测1α,25-(OH)_2D_3对体外培养人输卵管上皮细胞增殖的影响。 4.应用RT-PCR法和免疫印迹(Western blot,WB)法检测1α,25-(OH)_2D_3对体外培养人输卵管上皮细胞VDR、CaBP-D28k mRNA及其蛋白表达的影响。 结果: 1.人输卵管黏膜上皮VDR蛋白及VDR mRNA的表达 人输卵管黏膜上皮可检测到VDR蛋白及其mRNA表达。VDR蛋白主要表达于人输卵管上皮细胞的细胞核内,部分间质平滑肌细胞核内亦可见阳性染色。相同时期各不同部位人输卵管上皮细胞VDR蛋白表达无明显差别(P＞0.05),随月经周期变化,各不同部位输卵管上皮细胞VDR蛋白表达发生改变,在增生早期和分泌中晚期较低,与之比较,在增生中晚期和分泌早期其表达明显增高(P＜0.01),至分泌早期达最高值。壶腹部人输卵管黏膜上皮组织VDR mRNA表达在增生早期和分泌中晚期较低,在增生中晚期和分泌早期明显增高(P＜0.01)。 2.输卵管妊娠病理状态下人输卵管黏膜上皮VDR蛋白的表达 输卵管妊娠病理状态下,种植部位和非种植部位人输卵管黏膜上皮均可检测到VDR蛋白阳性表达。VDR蛋白阳性表达于输卵管上皮细胞的细胞核内,部分间质平滑肌细胞核内亦可见阳性染色。种植部位人输卵管上皮细胞VDR蛋白表达较低,与之比较,非种植部位输卵管上皮细胞VDR蛋白表达明显增高(P=0.017,P＜0.05)。 3.

20只普通级3月龄新西兰兔,随机分为空白血清组(0.9%生理盐水灌胃)与含药血清组(壮骨健膝方药液灌胃),连续灌胃5天,2次/日,于末次灌胃3h后腹主动脉采血,制备新西兰兔的正常血清及壮骨健膝方含药血清。 2.取4周龄普通级新西兰兔双侧膝关节透明软骨,建立离体培养的关节软骨细胞体系,应用形态学观察、甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原染色观察并鉴定,MTT法检测第2代软骨细胞增殖情况。 3.10ng/ml IL-1β诱导软骨细胞退变,甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原染色观察并鉴定；MTT法检测壮骨健膝方含药血清对退变软骨细胞增殖的影响,并确定含药血清干预的最佳时间及浓度。 4.诱导退变的软骨细胞随机分为模型组、含药血清组、阻滞剂组(SB203580干预)、含药血清+阻滞剂组,并设无IL-1p诱导干预的为正常组,分别干预48h后,流式细胞术检测细胞的凋亡率；Western Blot法检测软骨细胞中caveolin-1和p-p38蛋白的表达；RT-PCR检测细胞IL-1β、TNF-α、MMP-3、MMP-13及caveolin-1mRNA表达的变化。

结果 1.研究中分离培养的第2代关节软骨细胞,经形态学观察、甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原染色显示符合软骨细胞的生物学特性。IL-1p干预的关节软骨细胞呈现退变表现：细胞生长速度减慢,细胞变狭长,胞内见空泡,形态不规则,其甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色均变淡。 Selleck ATM激酶抑制剂 2.壮骨健膝方含药血清对IL-1p诱导退变的软骨细胞增殖作用呈剂量依赖性的促进趋势,48h时,正常组、15%、20%含药血清组与模型组比较有显著性差异(p0.05),含药血清以20%为最佳干预浓度,其最佳干预时间为48h。

3.IL-lp诱导退变的软骨细胞再继续培养48h出现明显的凋亡,凋亡率达(14.17+0.43)%,含药血清组、阻滞剂组、含药血清+阻滞剂组细胞凋亡率明显降低,与模型组比较均有极显著差异(p<0.01)；含药血清+阻滞剂组与单纯阻滞剂组比较,凋亡率也显著下降(p
背景和目的 目前临床上在脂质代谢紊乱方面的治疗还主要集中在降低血浆低密度脂蛋白胆固醇(low-density BI6727 lipoprotein cholesterol, LDL-C)水平方面。降低LDL-C水平减少罹患心血管疾病风险的观点已经得到广泛认同。然而临床结果显示经过他汀类药物标准治疗后即使LDL-C达标,仍有10.9%的心血管剩留风险。治疗新靶点研究(TNT)显示,经过他汀类药物强化治疗后即使LDL-C水平降至1.99mmol/L,明显低于达标水平,仍有8.7%的绝对冠状动脉事件剩留风险,提示即使经过他汀类药物强化治疗,冠状动脉事件剩留风险仍较高。血脂异常相关的心血管剩留风险与多种因素有关,以低高密度脂蛋白(high-density lipoprotein cholesterol, HDL-C)为特征的血脂异常是经过他汀类药物治疗降低LDL-C水平后最常见的其中一种。如何降低冠状动脉事件剩留风险,减少心血管事件发生率,也是目前研究的焦点之一。HDL-C水平与心血管发生率呈负相关,约有1/3的血脂异常患者通过提高HDL-C水平而受益,有研究表明血浆HDL-C每升高0.03mmol/L(1.0mg/dl)就可以使罹患心血管疾病的风险下降2%-4%。另外LDL-C/HDL-C比值也是一个与心血管事件密切相关而独立于LDL-C和HDL-C的重要指标。因此治疗动脉粥样硬化除了在一定范围内降低LDL-C水平之外如何有效的提高HDL-C水平就成为了重要的研究方向。 内皮脂酶(endothelial lipase, EL)是近年新发现的甘油三酯脂肪酶家族新成员,直接由血管内皮细胞分泌,在局部发挥作用。主要具有磷脂酶活性,是代谢HDL-C的关键酶,如何能够通过减低或抑制EL活性,从而减少HDL-C的降解,是治疗动脉粥样硬化的新发展思路。因此研究EL的转录表达调节,如何有效的降低EL就显得极为迫切。 血管紧张素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ)和炎症因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)是两种非常重要的致动脉粥样硬化危险因素。Ang Ⅱ能通过增加巨噬细胞清道夫受体CD36,促进巨噬细胞摄取氧化低密度脂蛋白(oxidized

low density lipoprotein,ox-LDL),加速泡沫细胞形成；能通过诱导炎症反应及细胞凋亡、产生氧自由基和影响纤溶功能等多方面参与动脉粥样硬化的病理过程;可以增加斑块不稳定因子[7]EMMPRIN和MMPs[8、9]的表达,加重动脉粥样硬化病变。IL-6也是一种重要的致动脉粥样硬化炎症因子,它构成了许多急慢性疾病的病理学基础,能够损伤内皮细胞造成内皮细胞功能障碍,增加单核-内皮细胞的粘附,还可以促进巨噬细胞对脂质的摄取。核因子NF-κB是种重要的核转录调节因子,激活后可启动包括细胞因子、化学因子等多种效应基因的表达。丝裂原活化蛋白激酶MAPKs级联反应是细胞内重要的信号传导系统之一,参与多种胞内信息传递过程,能对广泛的细胞外刺激发生反应,研究表明,NF-κB和p38MAPK在动脉粥样硬化中表达增加，可能是各种危险因子诱发动脉粥样硬化的机制之一,NF-κB和p38MAPK信号传导途径可能在EL的转录表达过程中发挥作用。本课题通过体外培养人脐静脉内皮细胞,以IL-6和Ang 为什么 Ⅱ刺激内皮细胞,观察IL-6、Ang Ⅱ、NF-κB p65阻断剂PDTC (Pyrrolidinedithioearbamic acid)和SB203580(p38MAPK抑制剂)对EL表达的影响,验证IL-6和AngⅡ是否通过NF-κB和MAPK信号传导途径调节EL的表达。 研究方法 1.提取新生儿脐静脉内皮细胞进行原代培养,经鉴定为内皮细胞后,贴壁法传代培养。第四代细胞用于实验。 2.用于实验的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells.

抑制GSK3β可增加吗啡处理引起的phosphor-p38水平升高。 已经 第三部分P38 MAPK信号通路在吗啡诱导小胶质细胞凋亡中的作用研究 目的 使用体外培养原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞系探讨p38 MAPK信号通路在吗啡诱导小胶质细胞凋亡中的作用及其具体机制。 方法 1.体外培养原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞系并进行吗啡处理 体外培养原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞分别分组如下：1.正常对照组、吗啡组(10u M)、纳洛酮组(10μM)、吗啡+纳洛酮组(纳洛酮提前吗啡1h加入使之预先与阿片类受体结合)；2.正常对照组、吗啡组、SB203580组(10μM)、吗啡+SB203580组(SB203580提前1h加入)；置细胞培养箱孵育。 2. Western Blotting 使用Western Blot方法检测小胶质细胞phosphor-p38、cleaved caspase-3、cleaved caspase-8、Bax、Bcl-2等蛋白水平变化。 3.细胞凋亡检测 使用TUNEL染色法检测小胶质细胞凋亡。 4. RT-PCR 使用RT-PCR方法检测小胶质细胞Bax和Bcl-2 mRNA水平变化。 结果 1.吗啡处理使小胶质细胞phosphor-p38蛋白水平升高 Western Blot结果显示,吗啡使小胶质细胞phosphor-p38水平升高,而纳洛酮可阻断吗啡的作用。

2.抑制p38 MAPK减少吗啡诱导的小胶质细胞凋亡 TUNEL方法检测细胞凋亡,发现p38 MAPK特异性阻滞剂SB203580预处理明显减少了吗啡诱导的小胶质细胞凋亡。Western Blot方法检测小胶质细胞中cleaved caspase-3和cleaved caspase-8蛋白水平,发现SB203580预处理可以明显减少吗啡引起的caspase-3和caspase-8活化。 3.抑制p38 MAPK减少吗啡处理引起的Bax/Bcl-2变化 Western Blot方法检测小胶质细胞中Bax和Bcl-2蛋白水平变化,发现吗啡处理使小胶质细胞Bax蛋白水平升高,Bcl-2蛋白水平降低。而SB203580预处理减少了吗啡引起的Bax/Bcl-2蛋白变化。RT-PCR方法检测小胶质细胞中Bax和Bcl-2

确认细节 mRNA表达变化,发现吗啡处理使小胶质细胞Bax mRNA水平升高,Bcl-2 mRNA水平降低。而SB203580预处理减少了吗啡引起的Bax/Bcl-2 mRNA变化,与蛋白变化趋势一样。 结论 1.吗啡通过阿片受体途径增加小胶质细胞phosphor-p38水平。 2.抑制p38减少吗啡诱导的小胶质细胞凋亡 3.抑制p38减少吗啡处理引起的Bax/Bcl-2变化。4.P38对Bax和Bcl-2的调控发生在转录水平。 第四部分β-arrestin 2信号通路在吗啡诱导小胶质细胞凋亡中的作用研究 目的 使用体外培养原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞系探讨β-arrestin 2信号通路在吗啡诱导小胶质细胞凋亡中的作用及其机制。

方法 1.体外培养原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞系并进行吗啡处理 体外培养原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞分别分组如下：1.正常对照组、吗啡组(2,10μM)；2.正常对照组、吗啡组(10μM)、纳洛酮组(10μM)、吗啡+纳洛酮组(纳洛酮提前吗啡1h加入使之预先与阿片类受体结合)；置细胞培养箱孵育。 2.基因转染 将携带P-arrestin 2全长质粒、RNAi质粒和空白对照质粒转染入BV-2小胶质细胞实验各组细胞。转染48h后,将培养基更换为不含血清的DMEM培养基,并进行后续实验。 3.细胞存活率的检测 使用MTT方法检测小胶质细胞存活率。4.细胞凋亡检测 使用TUNEL染色法检测小胶质细胞凋亡。5. Western Blotting 使用Western Blot方法检测小胶质细胞phosphor-Akt和cleaved caspase-3等蛋白水平变化。 结果 1.吗啡处理引起小胶质细胞P-arrestin 2蛋白水平降低 Western Blot结果显示,吗啡使小胶质细胞β-arrestin 2蛋白水平明显降低,而P-arrestin 1蛋白水平无明显变化。纳洛酮可阻断吗啡的作用。 2.高表达β-arrestin 2可减少吗啡引起的小胶质细胞凋亡 将携带P-arrestin NVP-BGJ398 价格 2全长质粒、RNAi质粒和空白对照质粒转染入BV-2小胶质细胞,然后进行吗啡处理。MTT检测细胞存活率,发现高表达P-arrestin 2可减少吗啡处理引起的细胞存活率下降。而RNA干扰减少β-arrestin 2水平,可增加吗啡处理引起的细胞存活率下降。采用TUNEL方法检测细胞凋亡,发现高表达β-arrestin 2,可减少吗啡处理引起的细胞凋亡。而RNA干扰减少P-arrestin 2水平,可增加吗啡处理引起的细胞凋亡。Western Blot结果显示高表达β-arrestin 2,可减少吗啡处理引起的caspase-3激活,而RNA干扰减少β-arrestin 2水平,可增加吗啡处理引起的caspase-3激活。 3.β-arrestin 2通过激活Akt发挥对小胶质细胞的保护作用 将携带β-arrestin2全长质粒、RNAi质粒和空白对照质粒转染入BV-2小胶质细胞,然后进行吗啡处理。Western Blot结果显示,高表达P-arrestin 2可缓解吗啡引起的phosphor-Akt水平降低,而通过RNA干扰降低P-arrestin 2水平,可增加吗啡引起的phosphor-Akt降低。 结论 1.吗啡通过阿片受体途径引起小胶质细胞β-arrestin 2蛋白水平降低。 2.高表达β-arrestin 2可减少吗啡处理引起的小胶质细胞凋亡。 3.