0统计软件分析数据。2、在细胞水平,采用血清饥饿合并释放同步化处理卵巢癌细胞,流式细胞仪检测细胞周期,Western MG-132分子量 blot及核浆分离技术检测Cyclin H及相关分子的表达。构建Cyclin H过表达、核定位缺失及干扰表达载体,并稳定转染细胞株,MTT法、Western blot、核浆分离、Transwell及免疫共沉淀等实验分析Cyclin H参与卵巢癌细胞增殖及侵袭的影响及其机制。3、在体内研究水平,采用裸鼠成瘤实验研究Cyclin H对卵巢肿瘤生长的影响。 结果1.免疫组化结果显示：在不同组织分级的卵巢癌中,Cyclin H在卵巢癌中的表达水平随肿瘤恶性程度增高而增高,有显著差异(P2+)的患者(P=0.003)。 2.构建Cyclin H过表达、核定位缺失及干扰表达载体,筛选稳定转染细胞株,并鉴定。MTT法检测正常的及以上稳定转染的卵巢癌H08910细胞株的增殖情况,过表达Cyclin H能促进H08910细胞的增殖(P0.05)。在血清饥饿-释放的H08910细胞增殖模型中,Cyclin H、CDK7及MAT1的表达上调,同时CDK2的磷酸化水平也上调。核浆分离显示在H08910细胞增殖中,胞核中的Cyclin

H、CDK7及MAT1表达增加,而胞质中无明显改变。免疫共沉淀显示在H08910细胞的增殖中,Cyclin H与CDK7及MAT1形成复合物的能力上调。Western Blot检测过表达Cyclin H的H08910细胞中的P-CDK2的表达上调,抑制Cyclin H的表达能抑制P-CDK2的水平。 3.Transwell实验发现,过表达Cyclin H的H08910细胞的侵袭能力增加(P
目的1、通过44种细胞常见信号通路蛋白靶向抑制剂作用小鼠MC3T3-E1细胞,从中筛选出对细胞的增值有明显抑制作用的抑制剂。 2、选取有效抑制剂作用于小鼠MC3T3-E1细胞,观察抑制剂对细胞周期的影响以及对细胞周期与细胞凋亡相关蛋白表达的影响。探讨影响成骨细胞增殖的相关信号通路。 方法1、应用44种细胞信号蛋白抑制剂,分别以4种不同浓度(0.01uM/L、0.1uM/L、1uM/L、10uM/L)作用于小鼠MC3T3-E1细胞,应用MTS法检测各组细胞存活率,筛选出对小鼠MC3T3-E1细胞有明显抑制且呈剂量依赖性的抑制剂。 2、选取其中S1021(Dasatinib)(靶点为SRC/ABL)、S1111(XL880(GSK1363089))(靶点为MET/VEGFR)两种抑制剂,分别以0.5uM/L作用于小鼠MC3T3-E1细胞,运用FACS法检测各周期(Sub-G1,G1,

S, G2/M)细胞百分比,分析抑制剂对成骨细胞增殖周期的影响。 3、运用western blot检测抑制剂作用后MC3T3-E1细胞CCND1、P53、AKT、 P-AKT及BAX的表达。 结果1、通过MTS法共筛选出7种抑制剂,可以显著抑制小鼠MC3T3-E1细胞的增殖,且抑制效果呈剂量依赖关系。七种抑制剂为：S2703(GSK1838705A)、 ATM激酶抑制剂购买 S2743(PF-04691502)、S1021(Dasatinib)、S1064(Masitinib)、S1065(GDC-0941)、 S1111(XL880)、S1120(Everolimus)。 2、以0.5uM/L的抑制剂S1021(Dasatinib)、S1111(XL880)分别作用于小鼠MC3T3-E1细胞。与对照组比较,S1021组Sub-G1细胞比例显著增高(P=0.00)；S1111组Sub-G1期细胞比例显著升高(P=0.01),且两组药物间无显著差异(P=0.26)。

3、与对照组比较,S1021可以抑制CCND1的表达,且可降低P-AKT的水平,对于P53及BAX的表达无明显影响。S1111可以抑制CCND1的表达,而对P-AKT、P53及BAX表达无明显影响。 结论：抑制SRC/ABL可以通过抑制AKT的磷酸化并下调CCND1抑制成骨细胞MC3T3-E1的增殖,抑制VEGFR/MET可以通过下调CCND1抑制成骨细胞增殖,说明SRC/ABL通过依赖AKT磷酸化的信号通路在成骨细胞增殖过程中起到关键作用。VEGFR/MET受体介导的信号通路在成骨细胞增殖中同样发挥重要作用,且其介导成骨细胞增殖过程不依赖于AKT的磷酸化。
背景 http://www.selleck.cn/products/azd5363.html 胃肠道间质瘤是最常见的间质源性的消化道肿瘤,该肿瘤主要分子特点是存在能够异常激活KIT与PDGFRA的基因突变。虽然病例的总体生存率随着酪氨酸激酶抑制剂的问世得到了很大的改善,但由于治疗过程中会产生KIT或PDGFRA的继发性突变,大多数病例最终仍然会发展到耐药阶段,造成病情的恶化。近来的研究表明,组蛋白乙酰基转移酶(histone acetyltransferase, HAT) CBP及p300的功能与多种肿瘤的发生发展密切相关,而应用针对CBP和p3DD的靶向小分子抑制剂则可以抑制某些实体瘤细胞的增殖并且诱导肿瘤细胞发生凋亡。此外,另有报道显示,CBP/p300可以在体外细胞模型中直接作用于一种转录因子ETV1,通过催化ETV1的乙酰化从而促进其的转录活性；而在GIST组织中,ETV1则有着特异性的表达,并且被认为是一种与GIST生存相关的特殊因子。因此,转录后乙酰化修饰在GIST起源与成瘤过程中的潜在作用已逐渐受到重视。 目的 明确ETV1在GIST组织与细胞中的表达特征及潜在生物学作用,进而探究其调控因子CBP/p300在GISTs成瘤和肿瘤细胞增殖过程中的作用,并评估它们在GIST靶向治疗中的应用前景。对选择性CBP/p300抑制剂C646的潜在治疗作用进了探索,并对具体的分子机制进行了深入的研究。 方法 通过向GIST细胞转染特异的小干扰RNA序列从而下调细胞中的ETV1.