方法使用超速离心的方法对人乳腺癌BT549细胞培养液中的外泌体进行提取和纯化,以通用透射电子显微镜观察外泌体的形态和大小,蛋白免疫印迹实验鉴定外泌体的标志蛋白,以CCK-8实验、细胞划痕实验和Transwell实验检测外泌体对BT549细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。结果透射电子显微镜下外泌体的形状为椭圆形,外包被一层磷脂膜,直径40～110 nm;蛋白免疫印迹实验结果显示外泌体内标志蛋YH25448浓度白TSG101以及外标志蛋白CD63均明显富集;CCK-8实验结果显示共培养24 h后,实验组的BT549细胞增殖力较对照组明显增强(F=12.99～50.95,P<0.001);细胞划痕实验结果显示外泌体明显促进了BT549细胞的迁移(t=8.93,P<0.01);Transwell实验结果显示实验组BT549细胞迁移数较对照组明显增多(t=4.77,P<0.购买ARN-50901)。结论乳腺癌细胞来源的外泌体能促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移,表明肿瘤来源外泌体可作为交叉信号的传递平台,在促进肿瘤的生长和肿瘤转移方面发挥自分泌作用。
目的建立裸鼠乳腺癌细胞三阴性转移模型,并用超声造影观察三阴性乳腺癌细胞在裸鼠体内的增强情况。方法将乳腺癌模型小鼠随机分为试验组和对照组,每组10～20只。试验组在用药前1、3、5天给予联合用药,对照Ilomastat半抑制浓度组给予生理盐水溶液。常规超声和大体超声观察裸鼠三阴性乳腺癌细胞状态。接种后6周,尾静脉注射SonoVue超声造影剂,瘤周皮下注射超声造影剂。最后对原发性肿瘤和三阴性乳腺癌细胞进行病理检查。结果A组裸鼠种植后第7天肿瘤形成率为7/7,B组裸鼠种植后第5天肿瘤形成率为5/5;两种方法,实验组肿瘤形成后的第七天,Peak值均显著降低,与对照组差异显著。实验组B中第3、5、7天的Peak值与第1天给药前的Peak值的差值与对照组B间均有统计学意义。

AS发病机制十分复杂,有关学说甚多,目前认为AS是一种以脂质沉积异常为特征的慢性炎症性疾病。诸多AS危险因素中,氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)是促进内皮细胞凋亡的最主要原因。Ox-LDL可以促进平滑肌细胞、单核/巨噬细胞、内皮细胞的凋亡、增殖和迁移,以及引起内皮细胞的氧化应激反应和细胞损伤,最终导致AS斑块形成。前蛋白转化酶枯草溶菌素9PX-478订单(PCSK9)是和常染色体显性高固醇血症相关的新型基因,可以降解肝细胞表面的低密度脂蛋白受体(LDLR),使循环中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)清除障碍,增加血浆中LDL-C水平,从而参与胆固醇代谢的调节,促进AS的进展。但是,PCSK9是否可以通过影响内皮细胞功能对AS产生直接的毒性作用,至今没有突破性进展。LY3023414生产商替格瑞洛是新型的血小板抑制剂,通过和P2Y12受体结合,抑制血小板活性,防止冠心病患者发生血栓事件,但是替格瑞洛是否可以参与调节内皮细胞功能对AS有直接的影响未见报道。目的本研究拟通过RNA干扰技术下调PCSK9基因,以慢病毒包装转染入人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中,在ox-LDL刺激下测定凋亡率及凋亡相关蛋白Smoothened Agonist小鼠表达量,观察下调PCSK9对细胞凋亡的影响,并进行可能的机制探讨;将替格瑞洛应用于小鼠及HUVEC,观察其对AS斑块及内皮细胞功能的作用。方法本研究分三部分1、应用高脂喂养Apo E基因敲除小鼠构建动脉粥样硬化模型18只健康雄性4-6周龄小鼠正常组野生型C57BL/6J小鼠(8只);模型组高脂喂养Apo E-/-小鼠(5只);替格瑞洛组高脂喂养Apo E-/-小鼠,替格瑞洛灌胃10天(5只)。

鉴于靶向治疗的精准性,人们已开始探索靶向治疗在胃癌中的应用。本研究旨在以HER2蛋白为靶点,构建并合成融合基因工程蛋白,探讨其对HER2阳性胃癌细胞的杀伤效果。单克隆抗体是目前应用较广泛的靶向治疗药物,抗体依赖的细胞毒作用(ADCC)是单抗发挥杀伤作用的重要机制,但单抗抗体分子量大,难以穿透肿瘤组织,这些弊端限制了单抗的应用,同时具有免疫杀伤作用的T细胞因表面缺乏与单抗结合的受体而不能许多被有效介导,从而削弱了机体对肿瘤的免疫反应。单链抗体(sc Fv)仅含有全抗的可变区片段,具有免疫源性小、分子量小、穿透力强的特点,因此是理想的肿瘤治疗靶向载体。CCL19是一类可趋化免疫细胞定向移动的小分子蛋白,可诱导T细胞、NK细胞、DC细胞等发挥抗肿瘤作用。IL7在T细胞的发育、分化及增殖过程中发挥着重要作用,可通过促进IFN-γ、TNF-α等细胞因子分Ulixertinib供应商泌抑制多种实体瘤的生长。所以本研究设计了以人源HER2 sc Fv为靶向载体,连接免疫细胞趋化因子CCL19及介导T细胞活化的IL7,构建了抗HER2sc Fv-CCL19-IL7全基因序列的慢病毒载体,转染并筛选出稳定表达融合基因工程蛋白的HEK293T细胞株,并从其培养上清中成功获得目标蛋白。获得目标蛋白后,第二部分实验验证了抗HER2 scFv-CCL1selleck产品9-IL7融合基因工程蛋白的HER2靶向性及生物学活性。第三部分实验为融合蛋白抗肿瘤疗效研究,选用高表达HER2蛋白的NCI-N87胃癌细胞和HER2阴性的SGC7901细胞分别给予不同剂量融合蛋白,观察其杀伤效果。同时建立了人源化NOD/SCID小鼠模型,并建立胃癌移植瘤小鼠模型,给予抗HER2 scFv-CCL19-IL7融合基因工程蛋白进行治疗,观察肿瘤体积变化,检测体内IFN-γ和IL-2细胞因子分泌水平,评价其体内抗肿瘤效果。

3.构建L1210/CDDP尾静脉模型,观察复方浙贝颗粒对L1210/CDDP尾静脉模型小鼠的治疗作用。结果1.注射细胞7天后成功复制L1210/CDDP模型,复方浙贝颗粒联合顺铂干预后可减小荷瘤小鼠的肿瘤体积,减轻瘤质量,增加抑瘤率,并延长生命时长。2.与模型组比较,CDDP 组 Mdr-1、p-gp、Topo Ⅱ、bax 表达升高,GST、Bcl-2 表达降Tozasertib研究购买低,(P<0.05)。与CDDP组比较,中剂量复方浙贝组、中剂量联合组Mdr-1表达升高;中剂量复方浙贝组、低、中、高剂量联合组P-gp表达升高;高剂量联合组TopoⅡ表达升高;中剂量复方浙贝组、低剂量联合组GST表达升高,中、高剂量联合组GST表达降低;中剂量复方浙贝组Bcl-2表达升高,高剂量联合组Bcl-2表达降低;中剂量联合组BThiazovivin分子量ax表达升高(P<0.05)。3.尾静脉注射L1210/CDDP细胞21d后,随机抽取6只小鼠,取骨髓,作涂片,观察计算原始细胞比例在5～15%之间。外周血未见骨髓原始细胞外排,与正常对照组相比,模型组白细胞计数、血小板数降低(P<0.05);与模型组相比,低剂量联合组生存期延长、骨髓原始细胞比例降低(P<0.05);与CDDP组相比,半抑制浓度低剂量联合组血红蛋白含量、白细胞计数、血小板计数升高(P<0.05)。结论复方浙贝颗粒联合顺铂可延长L1210/CDDP荷瘤小鼠生存期,减小肿瘤质量、体积,增加肿瘤抑制率;对于L1210/CDDP尾静脉模型可延长小鼠生命期、降低骨髓原始细胞比例,保护血象,从而起到治疗作用,即可以提高两种ALL耐药模型治疗效果并可通过Mdr-1、P-gp、GST、Bcl-2、Bax机制逆转L1210/CDDP多药耐药,增强化疗有效性。

方法1.术中收取15例高级别浆液性卵巢癌患者的腹水,直接镜下观察形态、细胞免疫荧光和石蜡包埋切片后免疫组化分析腹水MCA的细胞成份及细胞表型。检测指标包括上皮性钙粘附蛋白(E-cadherin,E-cad)、神经性钙粘附蛋白(N-cadherin,N-cad)、波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMATM/ATR 抑制�?临床试验A)、成纤维细胞活化蛋白(Fibroblast activation protein,FAP)、成纤维细胞特异性蛋白1(Fibroblast specific protein 1,FSP-1)、上皮特异性抗原(Moc-31)、核转录因子8(PAX8)、增殖细胞相关核抗原Ki-67、钙结合蛋白(calretinin)、紧密连接蛋白(claTozasertib浓度udin 4)和雌激素受体(estrogen receptor,ER);2.原代分离培养来自无转移网膜的成纤维细胞(Normal fibroblasts,NF)及已发生转移的晚期卵巢癌网膜组织中癌相关成纤维细胞CAF。免疫组化和western blot检测CAF的特异性标志物α-SMA;3.流式细胞分选获取卵巢癌腹水中的卵巢癌细胞(上皮临床试验细胞粘附分子EpCAM阳性)。肿瘤细胞(原代腹水肿瘤细胞或SKOV3细胞)单独悬浮培养或与CAF悬浮共培养,观察多细胞聚集体MCA形成;4.悬滴法获取仅由肿瘤细胞(Tumor cell,TC)构成的多细胞聚集体MCAs~(TC)和由肿瘤细胞及CAF构成的多细胞聚集体MCAs~(TC/CAF),比较两者的体外基质胶粘附能力;小鼠腹腔注射比较两者在体内对腹膜的粘附及定植能力;3D共培养模型间皮清除实验比较两者间皮清除能力。

FIGO分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、组织学分级为G3级的上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中ATF-4蛋白的阳性表达率均高于FIGO分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移、组织学分级为G_1～G_2级的患者(P﹤0.05);FIGO分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移、组织学分级为G_3级的上皮性卵巢癌患者上皮性卵巢癌组织中SMAC蛋白的阳性表达率均明显低于FIGO分期为Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移、组织selleck产品学分级为G_1～G_2级的患者(P﹤0.01);不同病灶直径的上皮性卵巢癌组织中ATF-4、SMAC蛋白的阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。结论上皮性卵巢癌组织中ATF-4蛋白的表达上调,SMAC蛋白的表达下调,且ATF-4、SMAC蛋白表达可能与上皮性卵巢癌患者的病情进展有一定关系。
目的检测黏蛋白1(MUC1)在上皮性卵巢癌组织www.selleck.cn/products/ag-120-Ivosidenib.html中的表达情况及其与上皮性卵巢癌临床病理特征和预后的关系,并结合数据库分析其在卵巢癌患者诊断和治疗中的临床价值。方法收集2015～2016年山东大学齐鲁医院收治的51例上皮性卵巢癌组织及14例正常卵巢组织,组织标本均经HE染色证实符合病理要求,采用免疫组化法检测MUC1蛋白表达。结合数据库分析MUC1表达与临床病理特征的相关性。结果免疫组化验证MUC1蛋白在AZD1208上皮性卵巢癌中阳性表达率[52.9%(27/51)]显著高于正常卵巢组织[7.1%(1/14)]。上皮性卵巢癌组织中MUC1蛋白表达与FIGO分期呈正相关(P=0.019),但与患者年龄、肿瘤组织学类型、分化、转移、腹水等无明显相关(P>0.05)。总生存期分析显示,MUC1蛋白表达阴性组的预后明显好于MUC1蛋白阳性组(P=0.0308)。以上结果与数据库分析RNA水平MUC1表达相一致,数据库分析还提示MUC1表达可能与化疗耐药相关。

所得生物碱单体成分对人结肠癌HT-29细胞有一定的抑制作用,其中马钱子碱作用最强,伪士的宁次之。马钱子碱与伪士的宁对人结肠癌HT-29细胞具有显著的抑制作用,且呈时间-剂量依赖性;还可影响线粒体膜电位的变化,使线粒体膜电位降低,诱使HT-29细胞在G1期发生阻滞,可通过上调p53、caspase3、parp、caspase9蛋白表达水平,下调bcl-2蛋白表达更多水平来诱导细胞凋亡。
目的通过益气健脾活血法对线粒体凋亡的调控作用研究,探寻益气健脾活血法防治T2DM骨骼肌细胞病变的作用靶点及作用规律,揭示其治疗机制,为益气健脾活血法的临床应用提供科学依据,也为中医药防治T2DM骨骼肌病变提供新的研究思路。方法将SPF级SD大鼠,随机分为2组,每组20只,即空白组和中药组,中药组给予参芪复方Ulixertinib3mL(2mg生药/mL)中药浸膏灌胃。正常组给予等体积生理盐水灌胃,每日2次,连续3天。于末次灌胃1h后腹主动脉取血,室温静置2h,4℃离心,取血清,56℃水浴30min灭活,-80℃冻存备用。取第4代大鼠L6肌细胞胰酶消化后,加DMEM(含10%FBS)培养液于离心管中,吹打,混匀。细胞密度接近70%时,更换无血清培养基继续培养2购买Thiazovivin4h,使细胞同步化。每6孔细胞为一组,分组与刺激方法如下取第4代大鼠L6肌细胞接种于T75培养瓶,细胞密度接近70%时,更换无血清培养基继续培养24h,使细胞同步化。分组干预方法如下(1)HBM高糖模型组;(2)HRM高糖对照组;(3)HLS5%中药含药血清组;(4)HMS10%中药含药血清组;(5)HHS15%中药含药血清组;(6)HBL罗格列酮组;(7)CTRL空白对照组。上述干预液配制完成后,0.22μm过滤。

结果白杨素以浓度依赖方式抑制KB细胞增殖并诱导其凋亡,促进caspase-3/7的活化,降低KB细胞线粒体膜电位;同时抑制AKT和PI3K磷酸化。结论白杨素诱导KB细胞凋亡作用可能与线粒体功能障碍和抑制PI3K/AKT通路相关。
目的对马钱子中生物碱进行系统的提取分离纯化,建立马钱子总生物碱高效液相色谱(HPLC)特征图谱分析方法,为更多马钱子的质量控制奠定一定的物质基础。观察马钱子中生物碱单体成分对人结肠癌HT-29细胞增殖的影响,筛选主要活性成分,并进一步研究其对人结肠癌HT-29细胞的作用机制。方法通过加热回流的方法对砂烫马钱子进行提取,采用硅胶柱色谱,薄层色谱,半制备高效液相色谱等方法进行分离纯化,得到生物碱单体化合物。将十批砂烫马钱子采用Epacadostat供应商加热回流的方法进行提取,得到马钱子总生物碱,利用HPLC法建立马钱子总生物碱特征图谱。运用MTT法,筛选出对人结肠癌HT-29细胞抑制作用较强的生物碱单体成分,并计算其IC50值。取主要活性成分,比较在不同浓度作用下分别培养24 h、48 h、72 h后对人结肠癌HT-29细胞的抑制作用;运用流式细胞仪检测不同实验Fer-1组对HT-29细胞凋亡、细胞周期以及线粒体膜电位的影响;利用Western Blot法检测不同实验组P53、caspase3、parp、caspase9、bcl-2蛋白表达情况。结果1.通过对砂烫马钱子系统的提取分离纯化,得到10种生物碱化合物,利用波谱分析技术最终鉴定出9种生物碱单体成分,包括马钱子碱、士的宁、伪士的宁、伪马钱子碱、异士的宁、异马钱子碱、奴弗新、伊卡金、和16-甲氧基原士的宁。

结果病理活检确诊结肠癌76例,其中乙状结肠30例(39.47%)、降结肠18例(23.68%)、横结肠12例(15.79%)、升结肠16例(21.05%);结肠镜检查检出结肠癌68例,其中乙状结肠27例(39.70%)、降结肠16例(23.53%)、横结肠11例(16.18%)、升结肠14例(20.59%);结肠镜检查诊已经断结肠癌的灵敏度为85.53%,特异度为91.18%,准确度为87.27%,误诊率为8.82%,漏诊率为14.47%。结论结肠镜检查对结肠癌诊断具有一定价值,可为临床诊治提供参考依据。
目的探讨人软骨糖蛋白(YKL)-40、核糖体S6蛋白激酶(RSK)4、细胞周期蛋白(cyclin)D1在购买Etomoxir结肠癌中的表达及意义。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测86例结肠癌患者血清中YKL-40、cyclinD1、RSK4 mRNA表达水平;采用免疫组织化学法检测结肠癌组织及癌旁组织中YKL-40、cyclinD1、RSK4蛋白的表达情况。采用Pearson法分析结肠癌患者血清获悉更多YKL-40、RSK4、cyclinD1表达水平的相关性,应用受试者工作特征(ROC)曲线分析其对结肠癌的诊断价值。分析YKL-40、RSK4、cyclinD1表达与结肠癌患者临床病理特征的关系。所有患者随访3年,采用Kaplan-Meier法分析YKL-40、RSK4、cyclinD1表达与患者预后的关系。采用COX比例风险回归多因素分析影响结肠癌患者预后的独立危险因素。

CDC6表达升高与肿瘤转移、TNM分期明显相关(P<0.05);与患者年龄、性别、肿瘤分级等无关(P>0.05)。CDC6高表达组结肠癌患者5年生存率为54.9%(28/51),而低表达组为81.82%(18/22),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CDC6在结肠癌组织中表达增高与癌转移、TNM分期及患者生存期相关,其有望成为结肠癌预后的可靠以及指标。
为分析HIF-1α、β-catenin蛋白在结肠癌组织中的表达及其与临床病理的关系,选取我院2017-2018年收治的结肠癌患者80例。使用腹腔镜获取结肠癌组织标本80份,将其纳入病例组;另获取结肠癌旁正常组织80份,将其纳入对照组,采用免疫组化方法检测2组结肠组织中HIF-1α、β-catenin表达,问卷调Tariquidar订单查统计患者性别、年龄、肿瘤直径、分期、分化程度、淋巴结转移情况等。结果显示,病例组HIF-1α阳性率、β-catenin异位率高于对照组(P <0.05)。结肠癌组织HIF-1α、β-catenin表达与患者年龄、性别、肿瘤直径、合并症无关(P>0.05),与TNM分期、分化程度、淋巴结转移有关(P <0.05)。结肠癌组织JQ-EZ-05花费中HIF-1α与β-catenin表达具有显著正相关性(P <0.05)。结果表明,HIF-1α、β-catenin蛋白与结肠癌发生、发展密切相关,二者均参与了结肠癌淋巴转移和肿瘤发展过程。
目的探讨CT应用于术前诊断结肠癌及术后结肠癌复发的临床价值。方法本研究选取2014年7月至2017年2月期间我院收治的60例结肠癌患者,完善CT检查及组织活检,均在术后半年进行复诊,对比两种检查方案临床效果。