结果白杨素以浓度依赖方式抑制KB细胞增殖并诱导其凋亡,促进caspase-3/7的活化,降低KB细胞线粒体膜电位;同时抑制AKT和PI3K磷酸化。结论白杨素诱导KB细胞凋亡作用可能与线粒体功能障碍和抑制PI3K/AKT通路相关。
目的对马钱子中生物碱进行系统的提取分离纯化,建立马钱子总生物碱高效液相色谱(HPLC)特征图谱分析方法,为更多马钱子的质量控制奠定一定的物质基础。观察马钱子中生物碱单体成分对人结肠癌HT-29细胞增殖的影响,筛选主要活性成分,并进一步研究其对人结肠癌HT-29细胞的作用机制。方法通过加热回流的方法对砂烫马钱子进行提取,采用硅胶柱色谱,薄层色谱,半制备高效液相色谱等方法进行分离纯化,得到生物碱单体化合物。将十批砂烫马钱子采用Epacadostat供应商加热回流的方法进行提取,得到马钱子总生物碱,利用HPLC法建立马钱子总生物碱特征图谱。运用MTT法,筛选出对人结肠癌HT-29细胞抑制作用较强的生物碱单体成分,并计算其IC50值。取主要活性成分,比较在不同浓度作用下分别培养24 h、48 h、72 h后对人结肠癌HT-29细胞的抑制作用;运用流式细胞仪检测不同实验Fer-1组对HT-29细胞凋亡、细胞周期以及线粒体膜电位的影响;利用Western Blot法检测不同实验组P53、caspase3、parp、caspase9、bcl-2蛋白表达情况。结果1.通过对砂烫马钱子系统的提取分离纯化,得到10种生物碱化合物,利用波谱分析技术最终鉴定出9种生物碱单体成分,包括马钱子碱、士的宁、伪士的宁、伪马钱子碱、异士的宁、异马钱子碱、奴弗新、伊卡金、和16-甲氧基原士的宁。