方法1 术中收取15例高级别浆液性卵巢癌患者的腹水,直接镜下观察形态、细胞免疫荧光和石蜡包埋切片后免疫组化分析腹水MCA的细胞成份

方法1.术中收取15例高级别浆液性卵巢癌患者的腹水,直接镜下观察形态、细胞免疫荧光和石蜡包埋切片后免疫组化分析腹水MCA的细胞成份及细胞表型。检测指标包括上皮性钙粘附蛋白(E-cadherin,E-cad)、神经性钙粘附蛋白(N-cadherin,N-cad)、波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMATM/ATR 抑制�?临床试验A)、成纤维细胞活化蛋白(Fibroblast activation protein,FAP)、成纤维细胞特异性蛋白1(Fibroblast specific protein 1,FSP-1)、上皮特异性抗原(Moc-31)、核转录因子8(PAX8)、增殖细胞相关核抗原Ki-67、钙结合蛋白(calretinin)、紧密连接蛋白(claTozasertib浓度udin 4)和雌激素受体(estrogen receptor,ER);2.原代分离培养来自无转移网膜的成纤维细胞(Normal fibroblasts,NF)及已发生转移的晚期卵巢癌网膜组织中癌相关成纤维细胞CAF。免疫组化和western blot检测CAF的特异性标志物α-SMA;3.流式细胞分选获取卵巢癌腹水中的卵巢癌细胞(上皮临床试验细胞粘附分子EpCAM阳性)。肿瘤细胞(原代腹水肿瘤细胞或SKOV3细胞)单独悬浮培养或与CAF悬浮共培养,观察多细胞聚集体MCA形成;4.悬滴法获取仅由肿瘤细胞(Tumor cell,TC)构成的多细胞聚集体MCAs~(TC)和由肿瘤细胞及CAF构成的多细胞聚集体MCAs~(TC/CAF),比较两者的体外基质胶粘附能力;小鼠腹腔注射比较两者在体内对腹膜的粘附及定植能力;3D共培养模型间皮清除实验比较两者间皮清除能力。

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