52μg/mL。细胞实验结果显示，紫菜多糖和龙须菜寡糖均能够显著抑制Th2细胞因子（IL-4、IL-5、IL-13）水平，促进Th1细胞因子（IFN-γ，紫菜多糖还能促进IL-10的产生）的产生，紫菜多糖和龙须菜寡都能有效缓解空肠组织的过敏病理现象。紫菜多糖诱导IFN-γ的产生是通过JNK和JAK2两条信号通路途径。 综上所述，紫菜多糖和龙须菜寡糖均能够显著降低小鼠血清特异性IgE和IgG1的水平，促进IgG2a的水平，能够促进Th1细胞因子的水平，抑制Th2细胞因子的水平，能有效缓解空肠组织的过敏病理现象。这些结果说明紫菜多糖和龙须菜寡糖能够有效调节辅助性T细胞的免疫功能向Th1细胞转换，使Th1、Th2细胞重新处于相对平衡状态，从而抑制Th2细胞主导的食物过敏反应。
肿瘤（Tumor）已成为当前人类健康的一大杀手，严重威胁着人们的生命与健康。肺癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤，是导致癌症相关死亡的主要因素。于此同时，动物肿瘤病的发病率和病死率也呈上升趋势。马立克氏病（Marek’s

disease，MD）等肿瘤病具有高致病性和传染性，给畜牧业生产造成了严重损失。中药治疗肿瘤具有许多优势，从天然植物中寻找抗肿瘤活性成分是抗肿瘤药物研发的热点。秦岭主峰太白山为我国三大“药山”之一，中草药资源丰富，其中有149种以“七”字命名的药用植物，即太白“七药”。本研究从太白“七药”中筛选出6味中草药组成抗肿瘤中药方剂“肿瘤消”。为了验证“肿瘤消”方剂的抗肿瘤活性和作用机理，以人肺腺癌A549细胞和马立克氏淋巴瘤MDCC-MSBl细胞为主要的体外肿瘤细胞模型，对“肿瘤消”方剂诱导肿瘤细胞凋亡的作用和机理进行了研究，目的在于为科学、合理地开发太白山中草药资源提供指导，为临床抗肿瘤药物筛选提供理论支持。

所以 （1）“肿瘤消”方剂对多种肿瘤细胞具有抗肿瘤活性。采用MTT法对“肿瘤消”方剂的抗肿瘤活性进行了检测，结果表明“肿瘤消”方剂对马立克氏淋巴瘤MDCC-MSBl细胞、人肺腺癌A549细胞、大鼠胶质瘤C6细胞、小鼠骨髓瘤SP2/0细胞和人宫颈癌HeLa细胞的增殖具有明显抑制作用，但对正常人胚肾293A细胞的增殖无显著影响。 Selleckchem BI-2536 （2）“肿瘤消”方剂具有明显的诱导肿瘤细胞凋亡的作用。采用细胞形态学观察和Hoechst332580染色法对“肿瘤消”方剂诱导A549细胞凋亡的作用进行了检测，两种方法均证实“肿瘤消”方剂具有诱导A549细胞凋亡的作用；采用DNA片段化分析和线粒体膜电位势能检测法对“肿瘤消”方剂诱导MDCC-MSBl细胞凋亡的作用进行了检测，两种方法均证实“肿瘤消”方剂具有诱导MDCC-MSBl细胞凋亡的作用；采用AnnexinV/PI双染法，流式细胞仪检测分析“肿瘤消”方剂对肿瘤细胞（MDCC-MSBl、A549、C6、SP2/0、HeLa）凋亡率的影响，结果证实“肿瘤消”方剂作用后肿瘤细胞的凋亡率明显上升。 （3）“肿瘤消”诱导A549细胞凋亡涉及到p38MAPK信号通路的持续活化，是由死亡受体途径和线粒体途径共同介导的。采用Western Blotting对“肿瘤消”方剂诱导A549细胞凋亡的死亡受体通路和线粒体通路进行检测，同时对细胞凋亡信号通路相关调控基因（p38、p-p38、p53、p-p53、Bax、Bcl-2）的表达水平进行检测。Western 许多 Blotting检测结果证实“肿瘤消”诱导A549细胞凋亡涉及到p-p38MAPK信号通路的持续活化，与死亡受体（TNF-R1、DR5）活化以及caspase8活化有关，启动细胞凋亡外源性死亡受体途径。此外，“肿瘤消”方剂诱导A549细胞凋亡过程中，上调了p53基因的蛋白表达水平，进而上调Bax表达水平，同时下调Bcl-2的表达水平。在Bcl-2和Bax共同调节作用下，线粒体膜电位下降，cytochrome

c从线粒体释放到细胞质，导致caspase9活化，启动细胞凋亡内源性线粒体凋亡途径。死亡受体通路和粒体途径在均caspase3处汇合，诱导A549细胞发生凋亡。
凡纳滨对虾（Litopeneaus vannamei），又称南美白对虾、万氏对虾，由于其具有生长速度快、抗病能力强、适合高密度养殖和营养成分高等优点，成为我国乃至世界对虾养殖中的主要品种，然而，我国凡纳滨对虾养殖仍然受到营养、品种及病害的制约。研究凡纳滨对虾肌肉生长发育和免疫系统根本机制，为提高凡纳滨对虾生长速度和抗病能力提供理论依据，对凡纳滨对虾高效健康养殖具有重要的意义。 本研究中通过同源克隆获得了凡纳滨对虾p38的cDNA部分序列并对其进行了生物信息学分析，同时利用实时定量PCR检测了p38的组织分布和蜕壳周期不同阶段表达量变化，然后通过双链RNA干扰和抑制剂阻断法分别沉默p38的表达和抑制p38酶活性后检测肌肉相关基因表达量的变化，最后分析了p38在不同细菌和病毒感染后的表达规律和白斑综合症病毒感染后虾体内病毒拷贝数的变化规律。 实验结果表明，本研究克隆获得了凡纳滨对虾p38cDNA部分序列，克隆片段长1206bp，包括1098bp的开放阅读框，编码365个氨基酸，蛋白分子量为41.87kDa、等电点约为6.

05)；与IR组比较，Tan ⅡA高、低剂量治疗组磷酸化p38MAPK和MMP-9表达均降低，且高Tan ⅡA组明显低于低Tan ⅡA组（均P＜0.05）；⑵与Sham组相比，IR组凋亡细胞明显增加，病理形态学改变明显；与IR组比较，Tan Ⅱ A高、低剂量治疗组凋亡细胞均减少，病理学改变减轻，且高Tan Ⅱ A组凋亡细胞明显低于低Tan ⅡA组（均P＜0.05）。⑶与Sham组比较，IR组脑组织EB含量明显升高；与IR组比较，Tan Ⅱ A高、低剂量治疗组脑组织EB含量明显降低（P＜0.05），且高TanⅡ A组明显低于低Tan ⅡA组（均P＜0.05）。结论Tan ⅡA减少脑缺血再灌注后细胞凋亡，抑制MMP-9表达，降低血脑屏障通透性，可能与抑制p38MAPK信号通路有关。
口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma, OSCC)是头颈部最常见的恶性肿瘤(Head and neck squamous

cell carcinomas, HNSCC)之一,占口腔恶性肿瘤的90%以上。近来流行病学资料表明其发病率逐渐升高,并趋于年轻化。目前对早期OSCC患者的治疗方法多采用以手术为主,放化疗为辅的综合序列治疗,而晚期患者则以放化疗为主。化疗仍是OSCC重要的治疗手段之一。而当前化疗效果不佳的主要原因之一是长期使用化疗药物后肿瘤细胞对化疗药物的敏感性下降,使肿瘤细胞出现多药耐药(Multidrug 更多 resistance, MDR)现象。近年来在耐药机制的研究中,P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)介导的化疗药物外排增强是当前的研究热点之一 P-gp由MDRl基因编码,属ATP结合盒转运蛋白超家族(ATP-binding Cassette superfamily,

ABC)成员,是一种位于细胞膜上的渗透性磷酸糖蛋白,也是第一个被发现的、迄今为止最具有ABC家族特点的药物外排蛋白。P-gp在ATP作用下能逆向地将细胞内的抗癌药物转运到细胞外,从而降低细胞内的药物浓度,借此限制其细胞作用位点的药物的细胞毒性。其作用底物广泛,包括蒽环类药物、多肽类抗生素、生物碱及某些染料等。P-gp分布广泛,在肿瘤细胞中首次被发现,后来研究证实正常组织细胞包括肝肾脏、肠道系统、胰腺、肾上腺、血脑屏障和血睾屏障的毛细血管内皮、脉络丛、胎盘滋养层等均有表达。研究认为P-gp参与外源性及内源性物质的吸收及排泄。P-gp的功能包括：(1)限制药物的肠吸收：(2)一旦药物处于系统循环中,P-gp抑制药物致敏的通路,使组织细胞对药物不敏感；(3)促进药物清除及代谢。生理情况下,P-gp是在体内发挥保护作用,例如维持血脑屏障,将内皮细胞中的外源性物质转运到毛细血管腔内从而保护脑组织；肾脏中P-gp对药物排泄发挥重要作用；胃肠道中P-gp能减少外源性毒素的吸收。病理情况下,P-gp在组织中过表达,从而诱导MDR。当肿瘤细胞与化疗药物接触后,药物将与P-gp结合,P-gp借ATP水解的能量将底物逆浓度梯度泵到细胞外,从而降低细胞内药物浓度,导致化疗药物的细胞毒性作用减弱甚至消失,细胞出现耐药现象。有关人恶性肿瘤的研究证实MDR和细胞膜上P-gp的水平密切相关。研究一致认为在不同MDR细胞株中,P-gp表达水平与药物耐受程度相关,而在药物敏感细胞中其水平很低。 有 环氧化酶(Cycloxygenase, COX)是催化花生四烯酸转化成前列腺素(Prosta-glandin, PG)的关键限速酶,有COX-1和COX-2两种亚型。COX-1在正常组织中表达,是一种负责各种生理功能的“管家酶”,维持自我平衡功能,如胃细胞保护、肾脏血管扩张和通过血小板生成促凝集前列腺素血栓素等。而COX-2除了在精囊、肾脏和大脑某些区域中表达外,正常组织中COX-2表达低或检测不到。COX-2由有丝分裂原、细胞因子、生长因子及致癌因子刺激产生,并参与肿瘤发展及发病机制如细胞凋亡、免疫监视、血管生成、侵犯与转移以及细胞分化。COX-2在肿瘤发生发展的作用机制大致为1、激活致癌物；2、诱导肿瘤细胞增殖；3、抑制肿瘤细胞凋亡；4、刺激新生血管生成；5、增强肿瘤细胞侵袭力及转移；6、促进肿瘤细胞逃避免疫监视等。研究发现COX-2的表达与总生存率以及预后参数如肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移情况和肿瘤分期密切相关。COX-2是口腔癌预防及治疗的潜在分子靶点。而近年来研究发现COX-2与P-gp表达之间存在显著相关性。一些研究表明COX-2表达升高可能刺激MDR1/P-gp表达。因此人们设想,肿瘤组织中COX-2可能调控P-gp表达,从而降低肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,介导多药耐药现象,COX-2抑制可能阻断P-gp表达,从而增强肿瘤细胞对抗癌药物的敏感性。 Selleck MDV3100 近年来研究表明选择性COX-2抑制剂能降低体内外多种肿瘤细胞形成、生长和转移。塞来昔布能通过抑制COX-2活性而抑制肿瘤细胞增殖,而近年来发现表明COX-2非依赖性途径可能在抗增殖中发挥作用,报道的机制包括抑制细胞周期进程、诱导凋亡及抑制血管生成。研究同样发现COX-2抑制剂能增强化疗药物的细胞毒性作用。多项研究证实COX-2抑制剂联合化疗药物可显著抑制体内外肿瘤细胞生长,并认为COX-2抑制剂可能通过抑制P-gp或MRP1表达及活性增强肿瘤细胞对化疗的敏感性。

本研究中,我们通过体外实验探讨COX-2抑制剂塞来昔布增强口腔癌耐长春新碱细胞株KB/VCR对长春新碱敏感性与下调节P-gp表达和调节周期相关蛋白Cyclin D1、p21WAF1/CIP1表达的相关性,在前期研究的基础上进一步探索口腔癌化疗耐药性的产生及COX-2抑制剂逆转多药耐药的分子机制。 第一章塞来昔布联合长春新碱对KB/VCR细胞活力及细胞周期分布的影响 目的：探讨塞来昔布及长春新碱对人口腔癌耐长春新碱细胞株KB/VCR增殖及周期分布的影响,以及塞来昔布能否增强长春新碱对KB/VCR细胞的生长抑制作用及改变KB/VCR细胞的周期分布。方法：常规培养KB/VCR细胞。取对数生长期细胞进行实验。实验分为4组：(1)塞来昔布组：塞来昔布浓度分别为10、20、40和80μM。(2)长春新碱组：长春新碱浓度分别为0.375、0.75、1.5和3.0μM。(3)联合用药组：预实验已证实当塞来昔布浓度
目的:探讨姜黄素对DSS诱导的小鼠急性期UC的肿瘤坏死因子（TNF）-α、髓过氧化物酶（MPO）影响及其对UC治疗作用，同时检测结肠黏膜磷酸化p38MAPK及p38MAPK mRNA的表达，探讨p38MAPK信号通路在溃疡性结肠炎疾病中的机制，以及姜黄素对小鼠UC模型中p38MAPK通路的影响。方法：将健康60只雌性BALB/c小鼠，鼠龄6-7wk，体重16-20g，按随机数字表分为6组：正常组（A组）、模型组（B组）、地塞米松干预组（C组：1.5mg/kg.d）、姜黄素低剂量干预组（D组:姜黄素15mg/kg.d）、姜黄素中剂量干预组（E组：姜黄素30mg/kg.d）、姜黄素高剂量干预组（F组：姜黄素60mg/kg.

05）。 6.接受TKI治疗的患者共有38例，血浆EGFR突变者的疾病控制率（DCR）和客观缓解率（ORR）分别为90%（9/10）和60%（6/10），EGFR野生型患者的DCR和ORR分别为（53.57%，15/28）和（17.86%，5/28）。血浆EGFR基因是否突变，与TKI治疗疗效有关（DCR，P=0.059；ORR，P=0.019）。 7.接受TKI治疗的患者中，血浆KRAS野生型患者的DCR和ORR（66.67%，22/33；33.33%，11/33）高于KRAS突变患者（40%，2/5；0%，0/5）。但统计学差异不明显（DCR，P=0.337；ORR，P=0.295）。 8.接受TKI治疗的患者，总体中位PFS为6个月，EGFR基因19和21外显子突变的患者中位PFS为10.5个月，较EGFR野生型患者的中位PFS（5.1个月）显著延长，但统计学意义不明显（P=0.228）。KRAS突变的患者病情进展较快，其中位PFS仅为2.5个月，明显小于KRAS野生型患者的PFS（9个月），两组患者PFS具有显著统计学差异（P=0）。

结论： 1、晚期NSCLC血浆和组织中EGFR和KRAS基因突变具有高度的一致性，血浆样本可以作为组织样本的良好替代。 selleck抑制剂 2、焦磷酸测序技术具有操作简便、高通量检测的特点，与ME-PCR的结合可有效富集突变型EGFR基因，可以准确检测出血浆EGFR和KRAS基因突变，可用于筛选适合TKI治疗的NSCLC患者，有利于指导NSCLC患者的个体化用药。 3、晚期NSCLC组织中EGFR突变更多见于不吸烟的女性腺癌患者。组织中KRAS突变、血浆中EGFR及KRAS突变与临床病理特征间无显著统计学差异。 4、血浆EGFR突变是TKI治疗的敏感性指标，其PFS较长；血浆KRAS突变则预示患者预后较差，PFS较短，表明血浆EGFR和KRAS突变可以较好的预测晚期NSCLC患者TKI治疗的疗效和预后。
恶性肿瘤是威胁人类健康的重大疾病，其发病率逐年升高，因此抗肿瘤药物的研究一直被全世界所密切关注。近年来，随着分子生物学技术的发展和对发病机制从细胞水平、分子水平的进一步认识，以肿瘤发生发展信号通路中的关键酶为靶点，发现高效低毒的抗癌药物已经成为重要的研究方向。分子靶向治疗是通过靶向于特异性通路的治疗策略，可有效阻止肿瘤细胞的生长并降低对正常细胞的毒性。 蛋白酪氨酸激酶（PTK）与肿瘤信号转导的密切关系，被广泛地作为抗肿瘤药物的靶点。在各种受体酪氨酸激酶中，肝细胞生长因子受体（c-met）对促进细胞生长、降低细胞凋亡、改变细胞骨架功能、增加转移和其他生物学改变起关键作用。因此，靶向于HGF/c-met通路可改善依赖c-met的肿瘤的治疗。 本文根据小分子c-met抑制剂的构效关系，设计合成了16个多芳类的新化合物，并对其进行了初步的活性筛选。主要研究工作及结果如下：

1、总结小分子c-met抑制剂的构效特点，设计合成了16个以二苯醚为母核的新化合物。以二苯醚结构为母核，在醚键的间位或者对位以亚甲基形式连接不同的五元环，期望含有该结构的化合物在抑制肿瘤细胞的同时将有镇痛作用。在醚键的另一苯环的对位上通过氨基成酰胺接不同的侧链，以求获得较好的活性。 ISRIB供应商 2、对合成的16个化合物进行c-met激酶抑制活性评价，在10μM浓度下，将所合成的化合物与阳性药物XL880进行了c-met抑制活性的对比，大部分化合物在10μM的浓度下对c-met都有一定的抑制作用。其中，抑制率在30%以上的有2个化合物：T05和T13；抑制率在20%-30%的有5个化合物：T08,

那个 T11, T12, T14, T16；抑制率在10%-20%的有4个化合物：T01, T06, T10, T15；抑制率在0-10%的有5个化合物：T02, T03, T04,T07, T09。 3、对构效关系进行了初步分析。对于多芳类化合物，引入不同的酰基侧链有不同的抑制活性。含有脲基取代的化合物均有较好的抑制率，其活性优于含环丙基二酰胺取代的化合物。在含环丙基二酰胺取代的化合物中，苯环上吸电子基的引入有利于活性的提高，且引入的吸电子基的数目与其对PTK的抑制活性成正比。
C-met蛋白是肝细胞生长因子(HGF/SF)的受体,一种由位于染色体7q31区的C-met原癌基因编码的蛋白产物,具有酪氨酸激酶活性,参与细胞信号传导、细胞骨架重排的调控,是参与细胞增殖、分化与运动的重要因素。多项研究已证实在肿瘤组织中C-met的过表达与肿瘤的浸润、转移及不良预后密切相关。但在结直肠癌组织中C-met蛋白的表达水平与结直肠癌的临床分期,病理分级,生存期等关系的研究结果尚存争议,可能与以往国内缺少专门用于检测福尔马林固定标本中C-met表达水平的特异性单克隆抗体有关。本实验选用鼠抗人C-met单克隆抗体,特异性结合福尔马林处理过的C-met受体胞外区,检测了结直肠腺瘤及不同临床分期、病理分级的结直肠癌病灶中C-met蛋白的表达情况。结合临床病理特征进行综合分析,研究C-met蛋白与结直肠癌病理学特征相关性及预后的关系。目的：(1)研究C-met在结直肠癌组织中的表达水平及其与临床病理特征的关系。 (2)分析探讨C-met表达改变与肿瘤发生、侵袭、转移的关系,为结直肠癌的预后判断及临床靶向治疗提供依据。(3)比较分析C-met单克隆抗体及国内常用的兔抗人C-met多克隆抗体在检测结直肠癌蜡块组织中C-met表达水平的差别。方法收集筛选78例不同临床分期及病理分级结直肠癌组织和6例结直肠腺瘤组织及详细临床及病理资料建立病例数据库。采用免疫组织化学染色方法检测结直肠癌组织中C-met表达水平,分析C-met的表达与结直肠癌临床病理特征的关系。进一步采用荧光免疫组化方法比较分析两种抗体的检测效能。结果(1)78例结直肠癌组织中C-met细胞浆染色结果：强阳性46例,弱阳性22例,阳性表达率分别为59%,28.2%；阴性10例(12.

32倍和64.93倍,且相互呈交叉耐药状态。与亲代细胞相比,两株耐药细胞处于G1期和G2期的细胞增加、处于S期的细胞减少,随撤药时间的延长,细胞的增殖速度加快。两株耐药株的MDR1基因表达水平增高,分别为亲代细胞的4.05倍和5.96倍,P-gp表达为阳性。与MCF-7细胞株相比,MDA-MB-231细胞株ER、PR、HER2表达阴性,是典型的三阴性乳腺癌细胞株。结论成功建立MDA-MB-231/Doc和MDA-MB-231/Epi的耐药细胞株,其生长及耐药性稳定。
曲妥珠单抗(trastuzumab;商品名为Herceptin,赫赛汀)是靶向人表皮生长因子受体2(human

Smad抑制剂 epidermal growth factor receptor 2,HER2)的人源化单克隆抗体,与化疗药物联用可显著提高患者的无进展生存期。然而,曲妥珠单抗的原发性和获得性耐药严重制约了其临床疗效及应用。PI3K/AKT/m TOR信号通路的异常活化、HER家族成员间的相互作用、药物压力下代偿性生存信号的激活、肿瘤干细胞表型形成等均可能成为曲妥珠单抗耐药的重要机制。随着曲妥珠单抗耐药机制研究的不断深入,克服耐药的治疗手段也越来越丰富。有研究表明,曲妥珠单抗与其他靶向HER2胞外域的单克隆抗体或靶向其他HER家族成员的抗体类药物联用可增强曲妥珠单抗的疗效。应用PI3K/AKT/m TOR信号通路的小分子抑制剂或耐药相关促生存信号通路的特异性抑制剂可有效逆转耐药发生,延长患者的疾病无进展生存期。深入研究曲妥珠单抗耐药的机制,不断探索逆转耐药的治疗策略,可为乳腺癌个性化治疗方案的建立提供依据。本文将对曲妥珠单抗耐药机制及克服耐药的研究进展做一介绍。
PI3k/Akt/m 因为 TOR信号通路在细胞生长、增殖和生理条件下生存起着核心作用。该信号通路被认为是一个有效的靶向治疗癌症的创新性治疗策略,其异常激活已被证实与急性T淋巴细胞性白血病(T-ALL)相关。尽管多药联合和大剂量化疗等治疗手段不断改进及各类造血干细胞移植的应用和推广,对耐药或复发T-ALL患者治疗效果仍然较差,该病的总体疗效和预后远不如常见的B细胞系淋巴细胞白血病。因此,迫切需要寻找更有效和更少细胞毒性的抗白血病靶向药物,本文就PI3k/Akt/m

TOR信号通路与T-ALL关系的最新研究进展作一综述,以期为T-ALL发病的确切分子机制及治疗提供线索。
靶向药物治疗提升了HER2阳性乳腺癌患者的生存率,基于HER2等分子标记的预后预测及药物响应评估技术成为推动HER2阳性肿瘤精准医学持续发展的因素之一。本文梳理了HER2分子标记与预后预测、药物开发、药物响应评估、联合用药方案研究的国内外专利技术进展,以期为促进我国HER2阳性肿瘤个体化靶向治疗的发展提供参考。
目的:联合用药是近年来肿瘤化疗领域的热点之一,也是克服肿瘤耐药的有效方法之一。GDC-0941是新型的PI3K抑制剂,ABT-737为抗凋亡的Bcl-2家族蛋白Bcl-2,Bcl-xl和Bcl-w的抑制剂,两者均是具有良好临床应用前景的抗肿瘤药物。本实验主要研究GDC-0941与iABT-737联合治疗乳腺癌的体内外协同作用,并探讨两者合用的机制。方法:(1)采用MTT噻唑蓝比色法,测定化合物体外细胞毒作用,并采用软件Calcusyn,对GDC-0941和ABT-737
Phosphatidylinositol 3 kinase(PI3K) and mTOR are key components of the PI3K-Akt-mTOR

signaling cascade,one of the most frequently unregulated pathways in tumor biology.PI3Ks are lipid kinases,which can be divided into three classes:ClassⅠ,ⅡandⅢ2-Aryl-4-morpholinothieno[3,2-d]pyrimidines(e.g.GDC-0…
磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 时间 3-kinase,PI3K)是细胞内重要的信号转导分子,在细胞存活、增殖和分化过程中起重要调节作用。PI3K和其下游分子Akt所组成的信号通路可以激活下游信号分子,PI3K-AKT通路与乳腺癌、胃癌、结直肠癌、卵巢癌、前列腺癌等的发生发展密切相关。因此,近年来,PI3K、在抗肿瘤药物领域已是一个非常活跃的靶标。本文将对PI3K通路及其抑制剂在抗肿瘤方面的研究进展作一综述。
Summary Regular use of aspirin after diagnosis was associated with longer survival among patients with mutated-PIK3CA colorectal cancer,but not among patients with PIK3CA wild-type cancer.In this study,we showed that combination treatment with clinically achievable concentrations of aspirin and A…

1μmol/L、0.5μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L,作用时间分别为:24h、48h、72h;康莱特注射液组设置浓度分别为:5μl/ml、10μl/ml、20μl/ml、40μl/ml、80μl/ml、100μl/ml、160μl/ml,作用时间分别为:24h、48h、72h;应用四甲基偶氮唑蓝(tetrzolium-based colorimetric assay,MTT)法分别测定吉非替尼组和康莱特注射液组的不同浓度、不同作用时间的抑制率绘制生长曲线,并分别计算吉非替尼组30%抑制率所对应浓度(IC30)与康莱特注射液组50%抑制率所对应浓度(IC50)。2确定联合用药组浓度及作用时间:根据MTT结果,吉非替尼组IC30=25μl/ml,康莱特注射液组IC50=40μl/ml,故联合用药组吉非替尼取25μl/ml,康莱特注射液取40μl/ml,作用时间为48小时,应用MTT法检测定各时间联合用药组的抑制率。3取对数生长期细胞,按上述分组进行处理。药物作用48h后提取总RNA,检测总RNA的量、纯度及浓度,通过逆转录-聚合酶链反应(reverse

没有 transcription PCR,RT-PCR)半定量检测各组细胞内Akt基因和MAPK1(ERK2)基因的m RNA的表达水平。4选取对数生长期细胞置入六孔板培养,分组处理同上。药物作用48h后提取总蛋白,检测总蛋白浓度,蛋白质印迹(Western-blot)法检测各组p-Akt与p-ERK蛋白表达情况。5运用IBM SPSS 查找更多 Statistics 22.0.0.0统计软件对数据进行处理。结果:1 MTT结果显示:1.1与对照组相比,随着康莱特注射液组浓度增加及作用时间的延长,对人肺腺癌NCI-H1975细胞的抑制率逐渐升高,其抑制作用有剂量及时间依赖效应;吉非替尼单药24h组随药物浓度的升高,在0.1-5μmol/l范围内未见其对人肺腺癌NCI-H1975细胞有明显抑制情况,在10-50μmol/l范围内出现对人肺腺癌NCI-H1975细胞生长轻度抑制,在吉非替尼单药48h、72h组对人肺腺癌NCI-H1975细胞的抑制率逐渐升高,呈时间、剂量依赖关系。1.2联合用药组:吉非替尼联合康莱特注射液培养48h后,两药联合作用抑制率高于各单药组,有统计学意义(P<0.05)。结论:1康莱特注射液和吉非替尼单独应用对人肺腺癌NCI-H1975细胞生长均有抑制作用,而两药联合抑制作用增强,具有协同增效作用。2康莱特注射液和吉非替尼单独应用均能下调Akt和MAPK1(ERK2)基因以及p-Akt和p-ERK蛋白表达水平,而两药联合对Akt和MAPK1(ERK2)基因以及p-Akt和p-ERK蛋白表达水平下调作用更显著。3康莱特注射液具有一定逆转人肺腺癌NCI-H1975细胞耐吉非替尼的作用,可能与下调耐药细胞内Akt和MAPK1(ERK2)基因以及p-Akt和p-ERK蛋白表达水平相关。
癌症是一种DNA损伤修复反应(DDR)失能的疾病。随着人们对肿瘤中的重要细胞信号通路越来越多地了解,靶向治疗成为了目前癌症治疗的一种有效手段。使用药物作用于更多特殊、失调和突变的信号通路来抑制致癌激酶的方法是癌症治疗的一个较好的选择。因此,致癌激酶的抑制剂研发对癌症治疗具有十分重要的实际意义。计算机辅助药物分子设计能够合理地增大新药发现和确定新药靶点的可能性,并且能够有效减少成本,推动抗癌药物研发的进程。在本论文的第一章中,我们强调了肿瘤的引发与增生是与控制细胞周期,DNA修复和细胞凋亡的机制紊乱等因素直接相关的,并对致癌激酶的分类和结构又进行了重点分析。而且,我们也对具有抗癌作用的激酶抑制剂的类别和现状进行了系统的综合分析。此外,我们还简短地介绍了药物发现的一般流程,突出了计算机辅助分子设计方法的重要性。Chkl,作为一种传递DNA损坏信号的丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶,由于参与癌症引发和扩散,成为了抗癌药物作用的重要靶点。而到目前为止Chk1的一种新型抑制剂三唑酮类化合物活性变化的结构依据仍不明确。在论文的第二章中,我们采用综合性计算研究方法(分子对接、MD模拟、结合自由能计算)探索了影响活性的关键结构因素。为了确定影响三唑酮化合物抑制剂活性的结构特点,我们选用另一种已投入临床使用的Chkl抑制剂MK-8776作为参照进行了模拟研究。从分子水平上对三唑酮抑制剂进行比较分析,从而揭示了重要的结构和能量性质。所研究的抑制剂总体上都与Chk1的残基Leu14,

ZD6474研究购买 Val22, Ala35, Glu84, Tyr85,Cys86和Leu136构成的活性口袋结合。而且,在三唑酮抑制剂分子中引入疏水基团有利于与Chk1结合,残基Leu136在Chk1-MK-8776中对总体结合自由能的贡献与其在Chkl-三唑酮复合体系中的贡献存在较大差别恰好证实了这一点。R1位上的极性氢原子与残基Cys86形成的氢键可以使抑制剂处于一种有利于与Chkl结合的位置。但是,向R2位引入亲水基团将容易减小结合作用力。这项研究工作所获得的信息将有利于指导更加有效的靶向Chkl新型抑制剂的设计。黄酮,属于黄酮类化合物的一种,由于其潜在的医学用途吸引了人们的广泛关注。最近研究发现,一系列的黄酮化合物能够有效抑制CK2,并且副作用较小。但是,到目前为止,CK2与黄酮化合物之间的准确结合模式以及影响生物活性的结构依据还不十分清楚。在论文的第三章,我们采用计算研究方法从分子水平上详细解释了CK2与黄酮化合物的相互作用机制。首先我们从四种不同的对接方式的对接结果中获得相对可靠的起始复合物结构。接着采用MD模拟和结合自由能计算与分解进一步研究,我们发现预测的结合自由能与pIC50具有较好的相关性(R=0.

近年来有越来越多的研究证明某些蛋白激酶及其抑制剂与AP有着明确的相关性,本文归纳和总结了AP相关蛋白激酶及其抑制剂,并对其中几个重要的蛋白激酶进行了深入阐述,以期为AP治疗方法的研究提供有益的启示.
急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction,AMI)所引起的再灌注损伤(Reperfusion

Injury,RI)严重危害人类的健康,是目前临床治疗中急待解决的重要问题。近年来,很多学者致力于其相关的亚细胞结构及分子信号通路等机制研究,包括内质网[1],RISK通路[2-5],GSK-3β[6]及线粒体[7,8]等,这些成果为临床治疗提供了可靠的理论依据。
哺乳动物中枢神经系统(CNS)损伤后不能再生,目前认为主要原因包括胶质瘢痕的机械阻碍作用、促神经生长因子的缺乏及中枢神经系统中抑制因子的存在;而抑制因子的存在被认为是最重要的原因。其中,勿动蛋白(Nogo)作为抑制中枢神经系统再生的最重要的物质,越来越受人们的重视。近年越来越多研究表明Nogo不仅抑制损伤后CNS的再生,在正常生理情况下也起着重要的作用,Nogo对轴索生长的抑制及正常生理过程的作用涉及多种信号分子及信号通路,理解Nogo通过不同的信号转导途径引起的不同生物学效应对于早日攻破中枢神经系统再生这个难题有至关重要的作用,因此,该文就近年来对Nogo及其受体NgR的下游信号通路的研究进展予以综述。
目的探讨肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A(MafA)磷酸化在胰岛素基因表达中的作用。方法在不同浓度的葡萄糖或糖原合成酶激酶3(GSK3)抑制剂中培养Ins-1细胞24h后,分别采用Western

Temozolomide购买 blotting和RT-PCR法检测MafA蛋白和胰岛素基因的表达。结果高糖组完全磷酸化的MafA和insulin PD0325901化学结构 2mRNA表达均降低(P<0.05)。GSK3抑制剂组完全磷酸化的MafA降低(P
目的观察氯化锂预先给药对老龄大鼠术后认知功能的影响,探讨其可能的作用机制。方法雄性SD大鼠36只,18月龄,随机分为三组,其中C组和S组腹腔注射生理盐水,L组给予氯化锂2mmol/kg;每天1次,连续5d。S组和L组行肝脏缺血-再灌注手术。术后第3~6天行Morris水迷宫实验,记录逃逸潜伏期和游泳距离。测定大鼠海马组织中糖原合成激酶3β(GSK-3β)、低密度脂蛋白受体6(LRP6)、β-连环素(β-catenin)及其相应磷酸化蛋白的表达水平。结果与C组比较,S组第4~6天和L组第3,4天逃逸潜伏期和游泳距离明显延长(P<0.05);S组p-GSK-3β、p-LRP6蛋白表达明显降低(P<0.05),p-β-catenin蛋白表达明显增加(P<0.05);而L组p-GSK-3β、p-LRP6蛋白表达明显增加(P<0.05),p-β-catenin蛋白表达明显降低(P<0.05)。与S组比较,L组第3~6天逃逸潜伏期和游泳距离明显缩短(P<0.05),而p-GSK-3β、p-LRP6蛋白表达明显增加(P<0.05),p-β-catenin蛋白表达明显降低(P
糖原合成酶激酶-3β(GKS-3β)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,参与生物体内多种细胞功能活动的调节。近年研究发现,GSK-3β是心肌缺血再灌注过程中心肌细胞受损并最终走向死亡的交汇点,其磷酸化是心肌保护性信号通路汇集的关键。本文就GSK-3β在心肌缺血再灌注损伤中的作用及相关机制做一综述。
镉是一种分布广泛的重金属污染物,随着工业废弃物的排放通过水、植物、食物等途径进入食物链,从而在人体内蓄积,成为一种具有潜在毒性的有毒物质。镉对生物体的多个系统和器官均有毒害作用,其中有近50%的镉蓄积在肾脏,尤其是肾近曲小管,从而导致肾脏损伤,引发慢性肾脏疾病。本文对镉致肾脏毒性的机制如活性氧堆积、线粒体及内质网应激、钙紊乱、细胞凋亡等进行了总结,并简要的概述了其肾毒性的防治办法。
目的:探讨锂剂对神经干细胞(neural

selleck化学 stem cells,NSCs)分化的调控作用及机制,为优化NSCs移植治疗SCI疗效提供理论基础。方法:以Fischer 344新生大鼠侧脑室下区培养的NSCs为细胞模型,首先采用Cyquant DNA定量法测定对照组及0.5、1、3、5mM锂剂处理组在分化条件下的生长曲线;同时结合星形胶质细胞(AST)标记物GFAP及S100β,行神经元标记物Tuj1细胞免疫化学染色,应用Western Blotting蛋白定量法检测不同浓度锂剂对NSCs分化终产物中神经元及AST总量的影响,同时采用TUNEL凋亡检测法寻找锂剂的非毒性浓度区间,以排除混杂因素。最后通过与其下游经典作用通路GSK3β抑制剂SB216763对NSCs增殖、分化、凋亡的作用比较,探究锂剂的可能作用机制。结果:TUNEL凋亡检测显示体外锂剂的非毒性浓度区间为(0~3mM);在此范围内,1mM锂剂处理组中Tuj+细胞总数较对照组提高约1.47±0.06倍(P<0.05),SB216763处理组Tuj+细胞总数提高约2.25±0.07倍(P<0.05);3mM锂剂处理组中GFAP+细胞总数为对照组的0.55±0.02倍(P0.

37±0.06 vs 0.23±0.03,迁移能力102.0±22.5 vs 21.5±6.2,粘附能力95.7±21.0 vs 32.2±8.3)达最大增加效应。 结论:SDF-1a可增加EPCs数量并增强EPCs功能,且SDF-1a对EPCs的影响呈一定的量效关系。 第二部分基质细胞衍生因子-1a影响内皮祖细胞机制的探讨之一——抑制内皮祖细胞凋亡 目的:研究SDF-1a对去血清诱导EPCs凋亡的影响及其信号转导途径。 点击此处 方法:采用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板,培养4d后,收集贴壁细胞,多波长激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-Ⅰ和DiI-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs,流式细胞仪检测其表面标志进一步鉴定EPCs。免疫磁珠筛选CD34~+细胞。RT-PCR检测SDF-1a受体CXCR4 mRNA的表达;流式细胞仪测定CXCR4表达率。培养7d后的EPCs进行去血清培养48h以诱导EPCs凋亡,加入不同浓度SDF-1a(1ngl/mL,10ngl/mL,50ngl/mL和100ngl/mL)干预,或先予以P13K、MAPKs、eNOS抑制剂预处理1h,然后再用100ngl/mL

SDF-1a干预。FITC-Annexin V/PI流式细胞仪检测EPCs凋亡。Caspase-3 Colorimetric Assay Kit检测caspase-3活性。Western blot检测EPCs Akt Ser~(473)、ERK1/2、JNK、p~(38)MAPK、eNOS Ser~(1177)磷酸化水平及caspase-3蛋白水平。采用MTT比色法观察EPCs的增殖能力。 结果:培养7天后的EPCs的SDF-1a受体CXCR4 mRNA及蛋白表达水平明显高于新分离的CD34~+细胞;SDF-1a能够显著抑制去血清培养诱导的EPCs凋亡,并且此抑制作用随SDF-1a浓度的增加而增加。SDF-1a同样可以抑制caspase-3的活性及其蛋白表达。CXCR4受体阻断剂(AMD3100),PI3K抑制剂(Wortmannin和LY294002)能近乎完全的抵消SDF-1a抑制EPCs凋亡的作用;eNOS抑制剂(LNAME)可以部分抵消SDF-1a抑制EPCs凋亡的作用;而MAPKs抑制剂(PD98059、SB203580及SP600125)则对SDF-1a抑制EPCs凋亡的作用没有明显影响。Western Selleck BI-6727 blot检测显示SDF-1a可以促进EPCs

Akt、eNOS、ERK1/2、JNK、P~(38)MAPK的磷酸化。此外,SDF-1a干预后伴随EPCs增殖能力的增加。 结论:SDF-1a可以抑制去血清诱导的EPCs凋亡;PI3K/Akt/eNOS而非MAPKs信号途径参与SDF-1a抑制EPCs凋亡的调控。

更多 第三部分基质细胞衍生因子-1α影响内皮祖细胞机制的探讨之二——抑制内皮祖细胞衰老 目的:研究SDF-1a对EPCs衰老的影响。 方法:采用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板,培养4d后,收集贴壁细胞。多波长激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-Ⅰ和DiI-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs,流式细胞仪检测其表面标志进一步鉴定EPCs。RT-PCR检测CXCR4及hTERT mRNA水平。采用SA-β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测衰老细胞。端粒重复序列扩增法(telomeric repeatamplification protocol,TRAP)-ELISA定量检测端粒酶活性,TRAP—聚丙烯酞胺凝胶电泳(PAGE)—银染法定性检测端粒酶活性。MTT和集落生成能力测定实验检测EPCs的增殖能力和集落形成能力。Western blot检测EPCs Akt Ser~(473)磷酸化水平。 结果:SDF-1a能减少SA-β-半乳糖苷酶阳性细胞数量,SA-β-半乳糖苷酶阳性细胞数量随着SDF-1a浓度的增加而减少。SDF-1a可以促进EPCs hTERT mRNA的表达。SDF-1a增加EPCs端粒酶活性。CXCR4受体阻断剂(AMD3100),PI3K抑制剂(LY294002)可以抑制SDF-1a对EPCs hTERT mRNA表达及端粒酶活性的促进作用。Western blot检测发现SDF-1a可以促进Akt磷酸化。此外,SDF-1a干预后可增加EPCs的增殖及集落形成能力。 结论:SDF-1a延缓EPCs衰老,伴随EPCs增殖及集落形成能力的增加;SDF-1a延缓EPCs衰老可能跟EPCs端粒酶活性增加及hTERT mRNA的表达上调有关;PI3K/Akt信号转导途径可能参与SDF-1a延缓EPCs衰老的调控。
本研究系统地从普洱茶分离出多个组分,利用多种抗氧化实验模型,分别研究各组分的抗氧化能力;根据抗氧化实验结果,找出了抗氧化能力强的普洱茶特异多酚类物质,与儿茶素类物质没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)进行对照比较,研究它们对3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞的生理功能的作用,从而探讨出普洱茶直接作用于脂肪细胞的减肥途径。 1.

1 mg·L~(-1))和高剂量(1.0 mg·L~(-1))LPS处理24 h,检测LDH和SOD活性。在LPS处理前45 min,分别加入p38抑制剂SB203580和ERK抑制剂U0126处理IMR-32细胞,观察MAPK信号系统对神经元CYP2E1表达的影响。采用具有多巴胺能神经元特征的SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞系建立高表达CYP2E1细胞系,并与正常SH-SY5Y细胞同时给予低剂量(0.1

mg·L~(-1))和高剂量(1.0 mg·L~(-1))LPS处理24 h后检测LDH和SOD活性。结果与对照组相比,高剂量LPS处理IMR-32细胞,SOD的活力下降15.0%(P<0.01),LDH上升1.38倍(P<0.01),蛋白水平升高1.19倍(P<0.05)。p38和ERK抑制剂可拮抗高剂量LPS对CYP2E1的诱导作用。低剂量LPS处理CYP2E1高表达SH-SY5Y细胞,LDH的升高幅度较非高表达的对照组上升了1.28倍(P<0.01),SOD活力下降幅度增加了3.53倍(P<0.01);高剂量LPS使得CYP2E1高表达SH-SY5Y细胞LDH的升高幅度较非高表达的对照组上升了1.54倍(P<0.01),SOD活力下降幅度增加了2.17倍(P
目的探索钙卫蛋白(S100A8/A9)、Toll样受体4(TLR-4)及丝裂原活性的蛋白激酶(MAPK)信号传导途径在动脉血栓中的表达及与环氧化酶-2(COX-2)的关系。方法

查看更多 24只SD大鼠分为实验组和对照组,实验组利用FeCl_3溶液建立颈动脉血栓大鼠模型,对照组注射等量生理盐水。分别于造模后第1、3、7、14日分批处死2组大鼠,每次每组3只。利用ELISA检测大鼠外周血S100A8/A9水平。采用Western blotting对SD大鼠外周血白细胞中COX-2、p-p38 MAPK、TLR-4水平进行检测,并分析各因子水平之间的相关性。利用MAPK抑制剂SB203580对模型大鼠进行干预,观察对COX-2蛋白水平的影响。结果实验组大鼠外周血S100A8/A9水平在造模后第7日达到最高值,第14日回落,且均显著高于对照组相应时间点水平(P
P38MAPK是丝裂原活化蛋白激酶(MAPKS,mitogen-activated 通常 kinase)的一个亚类,有关P38MAPK信号通路在肾缺血/再灌注损伤中与细胞凋亡关系的研究国内外很少。本研究通过检测肾缺血/再灌注不同时间点细胞凋亡及P38MAPK的变化,来揭示肾缺血/再灌注损伤的病理机制。 一、材料和方法 1.实验材料:P38MAPKinase磷酸化抗体、P38MAPKinase特异性抑制剂SB203580、HRP抗体购于Calbiochem公司。TUNEL试剂盒购于博士德生物工程有限公司。60只180g～200g雄性SD大鼠由山西医科大学实验动物中心提供。
目的 探讨丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对转化生长因子(TGF)β1致人腹膜间皮细胞(HPMC)高表达纤连蛋白(FN)、纤溶酶原激活物抑制物(PAI)1的调控作用。方法 采用胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型。用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)评估TGF-β1和细胞外信号调节激素(ERK)及p38阻断剂对HPMC的增殖作用。采用酶联免疫双抗夹心法检测HPMC培养液中FN、PAI-1的蛋白质水平。采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测HPMC细胞内FN、PAI-1mRNA的表达。结果 (1)TGF-β1能刺激HPMC增殖(P<0.05),且呈剂量时间依赖性,加ERK阻断剂组或p38阻断剂组较TGF-β1组有明显抑制作用(P<0.01);加ERK阻断剂组或p38阻断剂组能使上述高表达受到抑制(P
目的:探讨p38信号转导途径在幽门螺杆菌(Hp)诱导胃上皮细胞株MKN45(来源于低分化腺癌)IL-8蛋白分泌中的作用。方法:以特异性p38有丝分裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated

protein kinase,MAPK)抑制剂SB203580与MKN 45作用2 h,Hp标准菌株CCUG17874与MKN 45共同孵育24 h,ELISA法检测IL-8表达产物的量。结果:Hp显著增加了IL-8在胃上皮细胞株MKN 并且 45的分泌,以细菌细胞数比为100时分泌量最高,作用24 h时IL-8量达峰值;经终浓度为0.3、1、3、10μmol/L的SB203580作用后,Hp诱导的胃上皮细胞IL-8蛋白的分泌分别减少了28％、49％、60％、76％。结论:Hp诱导胃上皮细胞株MKN45分泌IL-8,MAPK抑制剂明显地抑制该分泌作用,提示该分泌作用可能依赖于p38信号转导途径。
目的:研究p38激酶在绿茶提取物中的表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-Epigallocatechin-3-gallate,EGCG]抗晶状体上皮细胞增殖机制中的作用。 方法:用噻唑蓝比色法(MTT比色法)研究p38的特异性抑制剂SB203580对EGCG抑制晶状体上皮细胞增殖作用的影响;用Western Blot法研究EGCG对p38激酶的磷酸化和非磷酸化水平的影响。 结果:(1)预先加入25μmol/L,50μmol/L的SB203580孵育1h后,100μmol/L EGCG对晶状体上皮细胞增殖的抑制率低于对照组,但这种差别没有统计学上的意义(P>0.

05)；而第三周LIF组与假手术组比较及与PD组比较差异具有显著统计学意义(P0.05)。 2免疫荧光方法清楚显示：除正常对照组外,其余第3周三组小鼠脑组织内均出现免疫荧光阳性的内源性神经干细胞激活表达,均主要分布在核团周围。 3半定量RT-PCR方法显示：正常组、假手术组、LIF组、PD组实验后第1周及第2周GP130mRNA相对表达量差异无统计学意义(P>0.05);而第三周LIF组与假手术组比较及与PD组比较差异具有显著统计学意义(P<0.05)。与正常对照组比较差异也有统计学意义(P
髓样分化因子88(Myeloid Differentiation Factor88, MyD88)的经典作用是通过与TLR/IL-1R的TIR结构域相结合,引起NF-κB和丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen activated protein kinases, MAPKs)的活化,导致炎症因子的释放。近年的研究发现,MyD88在一些实质瘤的肿瘤细胞中表达增加,可能通过促炎症反应作用和非炎症作用促进肿瘤的进展。在本课题中,我们检测了MyD88在肝癌组织中的表达水平,分析了MyD88表达水平在肿瘤病人预后判断中的价值,利用体外实验和动物体内实验探讨了MyD88在肝癌细胞增殖和转移中的作用及其作用机制。

selleck化学药品 通过对110例肝癌标本的癌组织和临近的癌旁组织免疫组织化学染色发现,MyD88在肝癌中的表达量增加：通过分析MyD88和临床指标之间的关系,证实MyD88的表达量和肝癌病人的临床病理分期、复发呈正相关；通过分析MyD88和肝癌病人预后之间的关系,证实MyD88表达量高的病人,预后比较差,统计学分析证实MyD88是一个独立的影响病人预后的因素。 为了研究MyD88对肝癌细胞增殖的影响,我们进行了平板克隆和裸鼠体内成瘤实验,实验证实MyD88可以促进细胞克隆数目的增加和裸鼠移植瘤的生长。为了研究MyD88对肝癌细胞凋亡的影响,我们进行了流式细胞术和TUNEL凋亡检测实验,流式检测证实MyD88可以抑制肝癌细胞的凋亡,这一实验结果在裸鼠移植瘤和肝癌标本中得到了进一步的验证。转移是恶性肿瘤的一种重要的生物学特征,也是肿瘤病人死亡的重要原因。为了研究MyD88对肝癌细胞转移的影响,我们进行了细胞迁移、侵袭实验和裸鼠体内成瘤实验,细胞迁移和侵袭实验证实MyD88可以增加肝癌细胞的迁移和侵袭能力,裸鼠体内成瘤实验证实MyD88可以促进裸鼠肺部转移灶的形成。综上所述,MyD88可以通过影响肝癌细胞的增殖、凋亡和转移水平来促进肝癌的进展。 为了研究MyD88在肝癌生长和转移中发挥作用的机制,我们进行了Real-time PCR、ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay)、NF-κB荧光素酶活性分析、凝胶电泳迁徙率改变实验(EMSA)和Western Blotting实验,证实了MyD88除了可以通过依赖TLR/IL-1R信号通路调节肿瘤进展相关基因的表达和NF-κB的活性,也可以通过不依赖TLR/IL-1R信号通路调节肿瘤进展相关基因的表达和NF-κB的活性。为了研究MyD88不依赖TLR/IL-1R调节NF-κB活性的机制,我们进行了NF-κB荧光素酶活性分析实验,并给予了LY294002(PI3K/Akt抑制剂)、U0126(Erk1/2抑制剂)或者SB203580(p38抑制剂),实验表明MyD88可以通过PI3K/AKT和p38/ERK调节NF-κB的活性。同时,Western

Blotting实验证实MyD88可以通过不依赖TLR/IL-1R通路调节AKT和p38/ERK的活性。 总之,通过临床标本的分析,我们首次阐明了MyD88在肝癌中的高表达及其与病人预后不良之间的关系。通过体内外实验，我们阐明了MyD88可以通过影响肝癌细胞的增殖、凋亡和转移水平来促进肝癌的进展。通过对机制的探讨,我们阐明了MyD88可以不通过TLR/IL-1R信号通路调节NF-κB的活性以及肿瘤转移和发展相关基因的表达。我们的研究结果可望为肝癌病人预后判断以及肝癌的生物治疗提供了新靶点。
组织或器官纤维化是许多疾病致残、致死的主要原因,严重威胁着人们的健康与生命。目前针对纤维化病变的治疗手段极为有限,处于研究中的抗纤维化化合物很多,但进入临床的十分稀少。作用于多(?)点的吡非尼酮(PFD)的上市标志着抗纤维化药物的研究取得了很大挂展。因此,作用于多靶点纤维化药物的研究成为抗纤维化药物研究的重要发展方向。

因为 MAPK抑制剂 吡非尼酮作用于纤维化过程不同环节中的多个靶点,是目前唯一以纤维化适应症上市的药物,课题组前期筛选到了吡非尼酮的ne-better药氟非尼酮(AKF-PD),已经完成临床前研究。由于强的首过作用,它们的作用强度均不够理想。鉴于该类化合物具有很好的临床应用前景,以此为基础的进一步研究具有重要意义。 本课题在前期研究的基础上,以保持吡非尼酮多靶点作用特点,(?)进代谢快的缺点为目标,设计了一系列新结构的化合物,以其获得(?)学和药动学方面性质优良的先导化合物,为开发新型抗纤维化药物提供候选化合物。并通过部分化合物的药效学研究,探讨高活性、多靶点作用的化合物结构特征,为抗纤维化药物的设计提供有价值的信息,为了解纤维化疾病的病理机制进行有益探索。 本课题以吡非尼酮为先导化合物,设计合成了苯基吡啶酮类化合(?)和苄基吡啶酮两个系列共52个吡啶酮类化合物。完成了目标化合物的结构确证,采用MTT法检测了目标化合物对NIH3T3细胞增殖的抑制活性。结果表明：设计的化合物活性均高于阳性对照药物氟非尼酮,选取4个化合物进行了大鼠体内活性测试和动物急性毒性实验,其中化合物3r与2j显示了很好的成药性 本课题初步归纳了设计合成的两系列吡啶酮类化合物抗纤维化活性的构效关系。结果表明：吡啶酮5-三氟甲基取代后活性明显升高；-苄基取代活性优于1-苯基取代；1位苯基取代基通过氨烷基链连接杂环后活性显著上升；苄基系列中杂环与苯环以氨丙基链连接为好,(?)位取代活性较高；而苯基系列苯环与杂环以氨乙基链连接为佳。在苯环上为非杂环取代的化合物中,侧链长短与活性关系不明显。 本课题在前期工作的基础上系统地合成了两个系列的吡啶酮类化合物,评价了目标化合物的抗纤维化活性,得到了2个成药性较好的化合物；本课题首次研究了吡啶酮类似物的抗纤维化活性构效关系,为进一步研究具有更高抗纤维化活性的新型多靶点化合物提供了重要信息和打下一了坚实基础。
目的：通过建立闭合性脑损伤动物模型,研究脑损伤后白细胞介素1β、丝裂原活化蛋白激酶p38及血管细胞间粘附分子-1在脑组织中的不同时相表达的特点及法医学意义。方法：将75只清洁级SD大鼠随机分成正常对照组、手术对照组及损伤后0.

001);PP2A激动剂组不仅单轴突长度明显长于对照组(P<0.001),而且统计学结果显示30%神经元出现了多轴突(P<0.001),同时单轴突神经元减少(P0.05)或极性缺失;D-erythro-Sphingosine处理组神经元没有出现明显的多轴突形成(P>0.05),单轴突长度变化无统计学意义。然后将神经元培养24 h后共转染RFP(or GFP)/pcDNA4.0、RFP(or selleck抑制剂 GFP)/PP2A wild type(wt)和RFP(or GFP)/PP2Adn培养48 h,固定做免疫荧光可见转染pcDNA4.0对照组神经元极性已经建立,大多数神经元有一个轴突和多个树突;PP2Awt组单轴突延长(P<0.01)同时多轴突增多(P<0.001);PP2Adn组多出现短小的突起(P
再灌注是目前急性心肌梗死最有效的治疗措施,但再灌注治疗同时带来再灌注损伤,可加速心肌细胞凋亡及坏死,引起的心肌梗死范围扩大,心律失常,心功能迅速恶化。如果能减少再灌注损伤,则可以改善急性心肌梗死患者的预后。2003年Vinten-Johans实验室[1]提出了后适应概念,即再灌注后立刻给予一次或多次短暂重复心肌缺血与再灌注,能提高心肌对之前发生的较长时间缺血的耐受性,减轻再灌注损伤保护心肌。

糖尿病是冠心病主要危险因素,急性心肌梗死糖尿病人群的死亡率也高于非糖尿病人群。因此研究糖尿病状态下心肌缺血后适应则有更大的意义。但遗憾的是目前关于糖尿病预适应的保护作用机制尚不清晰,而关于糖尿病后适应的心肌保护作用国内尚无报道。 本实验以高脂饮食和STZ诱导建立2型糖尿病大鼠模型,与正常大鼠对照,通过Langendorff离体心脏缺血再灌注模型,研究后适应对于正常大鼠以及2型糖尿病模型的心肌保护作用。研究结果表明后适应对于正常大鼠离体心脏有明显的心肌保护作用并证明PI3K-AKT信号通道在后适应的心肌保护作用机制中起主导作用。相反后适应对于2型糖尿病大鼠离体心脏无心肌保护作用且证明后适应糖尿病心肌保护作用减弱的原因与AKT激活磷酸化不足有关。
目的:在观察人多囊肾组织中β-catenin的分布及其表达差异的基础上;探讨新型PPARγ激动剂DH9对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞(WT9-12)的增殖抑制作用;并比较罗格列酮研究其对细胞中β-catenin表达和激活的影响,以阐明其作用机制。方法:采用免疫组化比较ADPKD病人及ADPKD动物模型PKDV/V小鼠肾组织与相应正常肾组织中的β-catenin的分布和表达的差异,并予不同浓度的DH9及罗格列酮干预WT9-12细胞24、48、72、96小时后,用MTT法测定其细胞增殖抑制率。运用Western

blotting技术分析经DH9单干预或分别与GSK3β抑制剂SB216763、蛋白酶体抑制剂MG132以及PPAR-γ抑制剂GW9662共干预WT9-12细胞后,细胞内β-catenin、磷酸化β-catenin、GSK3β、磷酸化GSK3β、cyclinA、P21 CIP/WAF1、Bax、Bcl-2等蛋白表达的改变,同时以RT-PCR技术分析DH9对WT9-12细胞β-catenin Onalespib制造商 mRNA表达的影响。依赖流式细胞术和Annexin V + PI双染色流式细胞术分别观察其对细胞周期和细胞凋亡率的影响。结果:正常肾组织小管上皮细胞β-catenin的分布主要在胞膜处,胞核及胞浆少见;肾囊肿衬里上皮细胞中β-catenin失去正常主要分布在胞膜处的特征,代之以胞浆和核内表达明显增多,表明存在核转位增强。DH9抑制WT9-12细胞增殖作用明显优于罗格列酮(P0.05)。DH9对WT9-12细胞中β-catenin mRNA水平无明显影响,但可下调WT9-12细胞中β-catenin蛋白表达水平,且在加入MG132及SB216763共干预后可逆转DH9对WT9-12中β-catenin的下调作用。DH9可增加P21

CIP/WAF1的蛋白合成,减少cyclin A蛋白的合成,使细胞阻滞在S期。DH9作用72小时后Bcl-2/ Bax的比值较对照组显著下降(P
目的:在离体大鼠心脏缺血-再灌注损伤模型上,研究不同浓度的利多卡因对七氟醚后处理心肌保护作用的影响。 方法:应用Langendorff灌注系统,建立离体大鼠全心心肌缺血40min再灌注60min损伤模型,测定心室力学指标和复灌各时点冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)含量。实验结束测定心肌梗死面积。将48个心脏随机分为6组(n=8):缺血(ISCH)组,七氟醚后处理(SPC)组,七氟醚后处理+浓度分别为2、10和20μg/ml的利多卡因处理(SPC+Lid-2,SPC+Lid-10和SPC+Lid-20)组,以及10μg/ml利多卡因处理(Lid-10)组。 结果:与ISCH组相比,七氟醚后处理使心肌梗死面积从47.3±5.6%减少到18.6±3.1%(p＜0.05),降低了复灌期流出液中LDH的含量,明显改善心室力学指标,增加了冠脉流量。20μg/ml的利多卡因取消了七氟醚后处理的心肌保护作用。 购买GDC-0449 结论:超治疗剂量的利多卡因可以阻断七氟醚后处理的心肌保护。
目的:肝脏的缺血再灌注常见于诸多临床事件中,如肝切除术、肝移植术等。本文应用GSK-3的抑制剂氯化锂来保护肝脏在缺血再灌注时肝细胞的凋亡,并探索其中机制。 方法:应用体外缺复氧模型模拟肝脏缺血再灌注的环境。将小鼠正常肝细胞AML-12细胞分为正常氧含量组、缺复氧组、及不同浓度的氯化锂预处理2小时后缺复氧组后造8小时缺复氧模型,用MTT法检测细胞活性,Annexin V法检测细胞的凋亡;DCFDA探针检测细胞内的活性氧的变化;JC-1探针检测线粒体膜电位的变化;Western blot检测细胞中GSK-3、JNK的磷酸化程度、线粒体内外的细胞色素C含量变化和活化后的caspase-3的含量变化。 结果:与缺单纯复氧组比较,用10mM氯化锂预处理组能够明显减少由缺复氧导致的AML-12细胞的凋亡(P
目的 探讨线粒体ATP敏感钾通道(mitoKATP)和线粒体膜电位(Δψm)在支气管哮喘气道平滑肌细胞中对PKCα信号转导途径和细胞增殖的影响。 方法 以SD大鼠为实验动物,随机将36只雄性大鼠平均分为正常组和哮喘组,以腹腔注射和雾化吸入卵白蛋白法制备大鼠哮喘模型。取大鼠气道平滑肌细胞,分为六组进行干预:A.正常对照组;B.正常+diazoxide(mitoKATP特异性开放剂)组;C.