1 mg·L~(-1))和高剂量(1.0 mg·L~(-1))LPS处理24 h,检测LDH和SOD活性。在LPS处理前45 min,分别加入p38抑制剂SB203580和ERK抑制剂U0126处理IMR-32细胞,观察MAPK信号系统对神经元CYP2E1表达的影响。采用具有多巴胺能神经元特征的SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞系建立高表达CYP2E1细胞系,并与正常SH-SY5Y细胞同时给予低剂量(0.1
mg·L~(-1))和高剂量(1.0 mg·L~(-1))LPS处理24 h后检测LDH和SOD活性。结果与对照组相比,高剂量LPS处理IMR-32细胞,SOD的活力下降15.0%(P<0.01),LDH上升1.38倍(P<0.01),蛋白水平升高1.19倍(P<0.05)。p38和ERK抑制剂可拮抗高剂量LPS对CYP2E1的诱导作用。低剂量LPS处理CYP2E1高表达SH-SY5Y细胞,LDH的升高幅度较非高表达的对照组上升了1.28倍(P<0.01),SOD活力下降幅度增加了3.53倍(P<0.01);高剂量LPS使得CYP2E1高表达SH-SY5Y细胞LDH的升高幅度较非高表达的对照组上升了1.54倍(P<0.01),SOD活力下降幅度增加了2.17倍(P
目的探索钙卫蛋白(S100A8/A9)、Toll样受体4(TLR-4)及丝裂原活性的蛋白激酶(MAPK)信号传导途径在动脉血栓中的表达及与环氧化酶-2(COX-2)的关系。方法
查看更多 24只SD大鼠分为实验组和对照组,实验组利用FeCl_3溶液建立颈动脉血栓大鼠模型,对照组注射等量生理盐水。分别于造模后第1、3、7、14日分批处死2组大鼠,每次每组3只。利用ELISA检测大鼠外周血S100A8/A9水平。采用Western blotting对SD大鼠外周血白细胞中COX-2、p-p38 MAPK、TLR-4水平进行检测,并分析各因子水平之间的相关性。利用MAPK抑制剂SB203580对模型大鼠进行干预,观察对COX-2蛋白水平的影响。结果实验组大鼠外周血S100A8/A9水平在造模后第7日达到最高值,第14日回落,且均显著高于对照组相应时间点水平(P
P38MAPK是丝裂原活化蛋白激酶(MAPKS,mitogen-activated 通常 kinase)的一个亚类,有关P38MAPK信号通路在肾缺血/再灌注损伤中与细胞凋亡关系的研究国内外很少。本研究通过检测肾缺血/再灌注不同时间点细胞凋亡及P38MAPK的变化,来揭示肾缺血/再灌注损伤的病理机制。 一、材料和方法 1.实验材料:P38MAPKinase磷酸化抗体、P38MAPKinase特异性抑制剂SB203580、HRP抗体购于Calbiochem公司。TUNEL试剂盒购于博士德生物工程有限公司。60只180g～200g雄性SD大鼠由山西医科大学实验动物中心提供。
目的 探讨丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对转化生长因子(TGF)β1致人腹膜间皮细胞(HPMC)高表达纤连蛋白(FN)、纤溶酶原激活物抑制物(PAI)1的调控作用。方法 采用胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型。用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)评估TGF-β1和细胞外信号调节激素(ERK)及p38阻断剂对HPMC的增殖作用。采用酶联免疫双抗夹心法检测HPMC培养液中FN、PAI-1的蛋白质水平。采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测HPMC细胞内FN、PAI-1mRNA的表达。结果 (1)TGF-β1能刺激HPMC增殖(P<0.05),且呈剂量时间依赖性,加ERK阻断剂组或p38阻断剂组较TGF-β1组有明显抑制作用(P<0.01);加ERK阻断剂组或p38阻断剂组能使上述高表达受到抑制(P
目的:探讨p38信号转导途径在幽门螺杆菌(Hp)诱导胃上皮细胞株MKN45(来源于低分化腺癌)IL-8蛋白分泌中的作用。方法:以特异性p38有丝分裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated
protein kinase,MAPK)抑制剂SB203580与MKN 45作用2 h,Hp标准菌株CCUG17874与MKN 45共同孵育24 h,ELISA法检测IL-8表达产物的量。结果:Hp显著增加了IL-8在胃上皮细胞株MKN 并且 45的分泌,以细菌细胞数比为100时分泌量最高,作用24 h时IL-8量达峰值;经终浓度为0.3、1、3、10μmol/L的SB203580作用后,Hp诱导的胃上皮细胞IL-8蛋白的分泌分别减少了28％、49％、60％、76％。结论:Hp诱导胃上皮细胞株MKN45分泌IL-8,MAPK抑制剂明显地抑制该分泌作用,提示该分泌作用可能依赖于p38信号转导途径。
目的:研究p38激酶在绿茶提取物中的表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-Epigallocatechin-3-gallate,EGCG]抗晶状体上皮细胞增殖机制中的作用。 方法:用噻唑蓝比色法(MTT比色法)研究p38的特异性抑制剂SB203580对EGCG抑制晶状体上皮细胞增殖作用的影响;用Western Blot法研究EGCG对p38激酶的磷酸化和非磷酸化水平的影响。 结果:(1)预先加入25μmol/L,50μmol/L的SB203580孵育1h后,100μmol/L EGCG对晶状体上皮细胞增殖的抑制率低于对照组,但这种差别没有统计学上的意义(P>0.