37±0.06 vs 0.23±0.03,迁移能力102.0±22.5 vs 21.5±6.2,粘附能力95.7±21.0 vs 32.2±8.3)达最大增加效应。 结论:SDF-1a可增加EPCs数量并增强EPCs功能,且SDF-1a对EPCs的影响呈一定的量效关系。 第二部分基质细胞衍生因子-1a影响内皮祖细胞机制的探讨之一——抑制内皮祖细胞凋亡 目的:研究SDF-1a对去血清诱导EPCs凋亡的影响及其信号转导途径。 点击此处 方法:采用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板,培养4d后,收集贴壁细胞,多波长激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-Ⅰ和DiI-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs,流式细胞仪检测其表面标志进一步鉴定EPCs。免疫磁珠筛选CD34~+细胞。RT-PCR检测SDF-1a受体CXCR4 mRNA的表达;流式细胞仪测定CXCR4表达率。培养7d后的EPCs进行去血清培养48h以诱导EPCs凋亡,加入不同浓度SDF-1a(1ngl/mL,10ngl/mL,50ngl/mL和100ngl/mL)干预,或先予以P13K、MAPKs、eNOS抑制剂预处理1h,然后再用100ngl/mL
SDF-1a干预。FITC-Annexin V/PI流式细胞仪检测EPCs凋亡。Caspase-3 Colorimetric Assay Kit检测caspase-3活性。Western blot检测EPCs Akt Ser~(473)、ERK1/2、JNK、p~(38)MAPK、eNOS Ser~(1177)磷酸化水平及caspase-3蛋白水平。采用MTT比色法观察EPCs的增殖能力。 结果:培养7天后的EPCs的SDF-1a受体CXCR4 mRNA及蛋白表达水平明显高于新分离的CD34~+细胞;SDF-1a能够显著抑制去血清培养诱导的EPCs凋亡,并且此抑制作用随SDF-1a浓度的增加而增加。SDF-1a同样可以抑制caspase-3的活性及其蛋白表达。CXCR4受体阻断剂(AMD3100),PI3K抑制剂(Wortmannin和LY294002)能近乎完全的抵消SDF-1a抑制EPCs凋亡的作用;eNOS抑制剂(LNAME)可以部分抵消SDF-1a抑制EPCs凋亡的作用;而MAPKs抑制剂(PD98059、SB203580及SP600125)则对SDF-1a抑制EPCs凋亡的作用没有明显影响。Western Selleck BI-6727 blot检测显示SDF-1a可以促进EPCs
Akt、eNOS、ERK1/2、JNK、P~(38)MAPK的磷酸化。此外,SDF-1a干预后伴随EPCs增殖能力的增加。 结论:SDF-1a可以抑制去血清诱导的EPCs凋亡;PI3K/Akt/eNOS而非MAPKs信号途径参与SDF-1a抑制EPCs凋亡的调控。
更多 第三部分基质细胞衍生因子-1α影响内皮祖细胞机制的探讨之二——抑制内皮祖细胞衰老 目的:研究SDF-1a对EPCs衰老的影响。 方法:采用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板,培养4d后,收集贴壁细胞。多波长激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-Ⅰ和DiI-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs,流式细胞仪检测其表面标志进一步鉴定EPCs。RT-PCR检测CXCR4及hTERT mRNA水平。采用SA-β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测衰老细胞。端粒重复序列扩增法(telomeric repeatamplification protocol,TRAP)-ELISA定量检测端粒酶活性,TRAP—聚丙烯酞胺凝胶电泳(PAGE)—银染法定性检测端粒酶活性。MTT和集落生成能力测定实验检测EPCs的增殖能力和集落形成能力。Western blot检测EPCs Akt Ser~(473)磷酸化水平。 结果:SDF-1a能减少SA-β-半乳糖苷酶阳性细胞数量,SA-β-半乳糖苷酶阳性细胞数量随着SDF-1a浓度的增加而减少。SDF-1a可以促进EPCs hTERT mRNA的表达。SDF-1a增加EPCs端粒酶活性。CXCR4受体阻断剂(AMD3100),PI3K抑制剂(LY294002)可以抑制SDF-1a对EPCs hTERT mRNA表达及端粒酶活性的促进作用。Western blot检测发现SDF-1a可以促进Akt磷酸化。此外,SDF-1a干预后可增加EPCs的增殖及集落形成能力。 结论:SDF-1a延缓EPCs衰老,伴随EPCs增殖及集落形成能力的增加;SDF-1a延缓EPCs衰老可能跟EPCs端粒酶活性增加及hTERT mRNA的表达上调有关;PI3K/Akt信号转导途径可能参与SDF-1a延缓EPCs衰老的调控。
本研究系统地从普洱茶分离出多个组分,利用多种抗氧化实验模型,分别研究各组分的抗氧化能力;根据抗氧化实验结果,找出了抗氧化能力强的普洱茶特异多酚类物质,与儿茶素类物质没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)进行对照比较,研究它们对3T3-L1前脂肪细胞和成熟脂肪细胞的生理功能的作用,从而探讨出普洱茶直接作用于脂肪细胞的减肥途径。 1.