05)；与IR组比较，Tan ⅡA高、低剂量治疗组磷酸化p38MAPK和MMP-9表达均降低，且高Tan ⅡA组明显低于低Tan ⅡA组（均P＜0.05）；⑵与Sham组相比，IR组凋亡细胞明显增加，病理形态学改变明显；与IR组比较，Tan Ⅱ A高、低剂量治疗组凋亡细胞均减少，病理学改变减轻，且高Tan Ⅱ A组凋亡细胞明显低于低Tan ⅡA组（均P＜0.05）。⑶与Sham组比较，IR组脑组织EB含量明显升高；与IR组比较，Tan Ⅱ A高、低剂量治疗组脑组织EB含量明显降低（P＜0.05），且高TanⅡ A组明显低于低Tan ⅡA组（均P＜0.05）。结论Tan ⅡA减少脑缺血再灌注后细胞凋亡，抑制MMP-9表达，降低血脑屏障通透性，可能与抑制p38MAPK信号通路有关。
口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma, OSCC)是头颈部最常见的恶性肿瘤(Head and neck squamous
cell carcinomas, HNSCC)之一,占口腔恶性肿瘤的90%以上。近来流行病学资料表明其发病率逐渐升高,并趋于年轻化。目前对早期OSCC患者的治疗方法多采用以手术为主,放化疗为辅的综合序列治疗,而晚期患者则以放化疗为主。化疗仍是OSCC重要的治疗手段之一。而当前化疗效果不佳的主要原因之一是长期使用化疗药物后肿瘤细胞对化疗药物的敏感性下降,使肿瘤细胞出现多药耐药(Multidrug 更多 resistance, MDR)现象。近年来在耐药机制的研究中,P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)介导的化疗药物外排增强是当前的研究热点之一 P-gp由MDRl基因编码,属ATP结合盒转运蛋白超家族(ATP-binding Cassette superfamily,
ABC)成员,是一种位于细胞膜上的渗透性磷酸糖蛋白,也是第一个被发现的、迄今为止最具有ABC家族特点的药物外排蛋白。P-gp在ATP作用下能逆向地将细胞内的抗癌药物转运到细胞外,从而降低细胞内的药物浓度,借此限制其细胞作用位点的药物的细胞毒性。其作用底物广泛,包括蒽环类药物、多肽类抗生素、生物碱及某些染料等。P-gp分布广泛,在肿瘤细胞中首次被发现,后来研究证实正常组织细胞包括肝肾脏、肠道系统、胰腺、肾上腺、血脑屏障和血睾屏障的毛细血管内皮、脉络丛、胎盘滋养层等均有表达。研究认为P-gp参与外源性及内源性物质的吸收及排泄。P-gp的功能包括：(1)限制药物的肠吸收：(2)一旦药物处于系统循环中,P-gp抑制药物致敏的通路,使组织细胞对药物不敏感；(3)促进药物清除及代谢。生理情况下,P-gp是在体内发挥保护作用,例如维持血脑屏障,将内皮细胞中的外源性物质转运到毛细血管腔内从而保护脑组织；肾脏中P-gp对药物排泄发挥重要作用；胃肠道中P-gp能减少外源性毒素的吸收。病理情况下,P-gp在组织中过表达,从而诱导MDR。当肿瘤细胞与化疗药物接触后,药物将与P-gp结合,P-gp借ATP水解的能量将底物逆浓度梯度泵到细胞外,从而降低细胞内药物浓度,导致化疗药物的细胞毒性作用减弱甚至消失,细胞出现耐药现象。有关人恶性肿瘤的研究证实MDR和细胞膜上P-gp的水平密切相关。研究一致认为在不同MDR细胞株中,P-gp表达水平与药物耐受程度相关,而在药物敏感细胞中其水平很低。 有 环氧化酶(Cycloxygenase, COX)是催化花生四烯酸转化成前列腺素(Prosta-glandin, PG)的关键限速酶,有COX-1和COX-2两种亚型。COX-1在正常组织中表达,是一种负责各种生理功能的“管家酶”,维持自我平衡功能,如胃细胞保护、肾脏血管扩张和通过血小板生成促凝集前列腺素血栓素等。而COX-2除了在精囊、肾脏和大脑某些区域中表达外,正常组织中COX-2表达低或检测不到。COX-2由有丝分裂原、细胞因子、生长因子及致癌因子刺激产生,并参与肿瘤发展及发病机制如细胞凋亡、免疫监视、血管生成、侵犯与转移以及细胞分化。COX-2在肿瘤发生发展的作用机制大致为1、激活致癌物；2、诱导肿瘤细胞增殖；3、抑制肿瘤细胞凋亡；4、刺激新生血管生成；5、增强肿瘤细胞侵袭力及转移；6、促进肿瘤细胞逃避免疫监视等。研究发现COX-2的表达与总生存率以及预后参数如肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移情况和肿瘤分期密切相关。COX-2是口腔癌预防及治疗的潜在分子靶点。而近年来研究发现COX-2与P-gp表达之间存在显著相关性。一些研究表明COX-2表达升高可能刺激MDR1/P-gp表达。因此人们设想,肿瘤组织中COX-2可能调控P-gp表达,从而降低肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,介导多药耐药现象,COX-2抑制可能阻断P-gp表达,从而增强肿瘤细胞对抗癌药物的敏感性。 Selleck MDV3100 近年来研究表明选择性COX-2抑制剂能降低体内外多种肿瘤细胞形成、生长和转移。塞来昔布能通过抑制COX-2活性而抑制肿瘤细胞增殖,而近年来发现表明COX-2非依赖性途径可能在抗增殖中发挥作用,报道的机制包括抑制细胞周期进程、诱导凋亡及抑制血管生成。研究同样发现COX-2抑制剂能增强化疗药物的细胞毒性作用。多项研究证实COX-2抑制剂联合化疗药物可显著抑制体内外肿瘤细胞生长,并认为COX-2抑制剂可能通过抑制P-gp或MRP1表达及活性增强肿瘤细胞对化疗的敏感性。
本研究中,我们通过体外实验探讨COX-2抑制剂塞来昔布增强口腔癌耐长春新碱细胞株KB/VCR对长春新碱敏感性与下调节P-gp表达和调节周期相关蛋白Cyclin D1、p21WAF1/CIP1表达的相关性,在前期研究的基础上进一步探索口腔癌化疗耐药性的产生及COX-2抑制剂逆转多药耐药的分子机制。 第一章塞来昔布联合长春新碱对KB/VCR细胞活力及细胞周期分布的影响 目的：探讨塞来昔布及长春新碱对人口腔癌耐长春新碱细胞株KB/VCR增殖及周期分布的影响,以及塞来昔布能否增强长春新碱对KB/VCR细胞的生长抑制作用及改变KB/VCR细胞的周期分布。方法：常规培养KB/VCR细胞。取对数生长期细胞进行实验。实验分为4组：(1)塞来昔布组：塞来昔布浓度分别为10、20、40和80μM。(2)长春新碱组：长春新碱浓度分别为0.375、0.75、1.5和3.0μM。(3)联合用药组：预实验已证实当塞来昔布浓度
目的:探讨姜黄素对DSS诱导的小鼠急性期UC的肿瘤坏死因子（TNF）-α、髓过氧化物酶（MPO）影响及其对UC治疗作用，同时检测结肠黏膜磷酸化p38MAPK及p38MAPK mRNA的表达，探讨p38MAPK信号通路在溃疡性结肠炎疾病中的机制，以及姜黄素对小鼠UC模型中p38MAPK通路的影响。方法：将健康60只雌性BALB/c小鼠，鼠龄6-7wk，体重16-20g，按随机数字表分为6组：正常组（A组）、模型组（B组）、地塞米松干预组（C组：1.5mg/kg.d）、姜黄素低剂量干预组（D组:姜黄素15mg/kg.d）、姜黄素中剂量干预组（E组：姜黄素30mg/kg.d）、姜黄素高剂量干预组（F组：姜黄素60mg/kg.