3%和35.8%下降到对照组水平。此外,PD98059同时抑制了Bortezomib引起的JNK p46的活化,但SP600125对MEK活性无影响。当给与p38特异性抑制剂SB203580时,Bortezomib诱导的CD14和CD11B的表达率为42.6%和56.0%,提示了p38可能对Bortezomib诱导的AML细胞的分化起到负调控作用。以上结果证明了MEK/ERK-JNK通路参与介导Bortezomib诱导的AML细胞分化。 Quisinostat分子重量 Western blotting检测结果表明,Bortezomib诱导AML细胞分化过程中转录因子STAT1的蛋白水平与活性形式pSTAT1

Tyr 701均呈时间依赖性上调。Realtime PCR检测结果表明STAT1 mRNA的表达也呈时间依赖性增加。给与CHX抑制STAT1 mRNA的表达,Bortezomib作用后,STAT1蛋白水平仍有所上调,提示Bortezomib同时抑制了STAT1蛋白的降解。此外我们也观察到STAT1下游基因C/EBPα蛋白的上调。慢病毒介导的shRNA-STAT1显著下调了HL60细胞中的STAT1蛋白水平,Bortezomib作用于shRNA空载转染的HL60细胞72小时后,CD14和CD11B的表达率分别为20.4%和39.6%,而在shRNA-STAT1转染的细胞中,Bortezomib诱导的CD14和CD11b仅为10.1%和19.6%。给与PD98059或SP600125抑制Bortezomib引起的HL60细胞分化的同时,观察到STAT1水平上调被抑制,活性水平被抑制,C/EBPa表达也受到抑制。上述结果表明Bortezomib激活的MEK/ERK-JNK通路可能通过进一步激活分化相关转录因子STAT1诱导AML细胞的分化。 DAPT 3) Bortezomib诱导的AML细胞分化与凋亡为RARα非依赖的过程。 Western blotting结果显示,Bortezomib作用于HL60后,维甲酸受体RARa蛋白水平增加,但通过双荧光素酶检测系统检测结果显示,RARa转录活性无显著变化。同时流式细胞术检测结果表明Bortezomib能诱导RARa突变的HL60R细胞分化抗原CD11b的表达及凋亡的发生。以上结果提示Bortezomib诱导AML细胞的分化与凋亡是RARα非依赖的过程。

4) Bortezomib诱导AML细胞分化的同时,伴随着AML细胞的凋亡,并初步探讨Bortezomib引起的AML细胞分化与凋亡之间的关系。 Annexin V/PI双染流式细胞术检测结果显示,5 Selleck ISRIB nM Bortezomib在诱导白血病细胞分化的同时,伴随了时间依赖性的细胞凋亡。但由MEK/ERK-JNK通路的抑制引起的Bortezomib细胞分化的抑制过程中,Bortezomib引起的细胞凋亡率无显著性变化。由此推测,Bortezomib诱导的AML细胞的分化与凋亡可能是两个相对独立的过程。 第二部分：Bortezomib通过抑制ATRA引起的RARa蛋白的降解,协同ATRA诱导AML细胞粒性分化。

1) Bortezomib协同ATRA诱导AML细胞粒性分化。 MTT检测法显示Bortezomib与ATRA联合作用能协同抑制HL60与NB4细胞的增殖。通过台盼蓝拒染法与血细胞计数板法,计数并绘制Bortezomib与ATRA联合作用后的细胞的增殖曲线和存活率曲线。结果显示Bortezomib(在HL60细胞上选用浓度2.5 nM,在NB4细胞上选用浓度2.5、5 nM)单药作用不影响细胞的存活率和细胞增殖能力,但能显著增强ATRA引起的细胞增殖抑制作用,而这种作用并不是通过诱导细胞死亡实现的。我们从形态学、生化指标及分子标志三方面指标证实了Bortezomib能促进ATRA诱导的HL60、NB4细胞的分化,具体表现为与ATRA单用组相比,药物联用组引起的核分叶比例显著增加,NBT还原能力显著增强,分化抗原CDllb表达量显著增加。 在人原代白血病细胞上,ATRA与Bortezomib也具有协同作用。在M3-AML型、AML/ALL混合型、AML-resistance型三个原代病人骨髓中分离得到原代白血病。通过细胞计数或CCK8检测,结果显示两药联合作用后细胞存活率显著低于单用组。在M3-AML型原代病人样本上,Bortezomib增强了ATRA引起的细胞NBT还原能力。 2) Bortezomib联合ATRA通过诱导HL60细胞分化,抑制裸小鼠HL60移植瘤的生长。 裸小鼠HL60人白血病细胞移植瘤实验结果显示,ATRA (5 mg/kg)组及Bortezomib (0.1 mg/kg)组均表现出一定的抗肿瘤作用,其T/C%值分别为58.0%和62.0%,抑瘤率分别为40.0%和20.0%,联合作用组T/C%值和抑瘤率分别为45%和58.9%,说明Bortezomib与ATRA在体内也有较好抗肿瘤协同作用。通过分离得到瘤组织单细胞悬液,通过流式细胞术检测,显示联用组瘤组织中分化抗原CD11b的表达率为53.1%,显著高于ATRA单用组(40.4%)和Bortezomib单用组(38.

非竞争性（变构型）p38抑制剂BIRB796对芥子气损伤的保护作用强于竞争性p38抑制剂SB203580，这可能与BIRB796同时抑制SM诱导的p38和JNK磷酸化，而SB203580抑制p38激酶同时代偿性地引起JNK激酶磷酸化程度升高有关； 3.首次发现程序性坏死抑制剂可保护芥子气诱导的表皮细胞死亡，提示这一坏死机制参与了芥子气诱导的细胞死亡； 4.基于抗炎药物的药物组合方案中，奥伐尼与PARP抑制剂MUS003合用对芥子气染毒小鼠皮肤损伤保护作用优于单用方案，可作为备选药物组合方案进行下一步研究。综上，本研究通过对基于炎症反应不同环节的多种类别的抗炎药物进行了抗芥子气损伤的药效评价，明确了各类药物对芥子气损伤的保护作用及其特点，并提出了基于抗炎药物的抗芥子气损伤组合用药方案，为基于炎性反应的抗芥子气新药研究提供了重要的理论依据和实验基础。
目的：哮喘在中医学领域内定义为喘、哮证[1]。哮喘的发病机制是复杂的。中医学普遍认为肺、脾、肾三脏功能失调和诱发哮喘病发密切相关，三脏共同调节体内水液代谢的正常运行，当三者功能失调时，聚湿成痰，停滞于肺，是诱发哮喘的潜在根源[2]。现代病理学研究认为，各种炎性细胞（如嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、巨噬细胞、淋巴细胞等）及炎性介质的共同参预产生了慢性过敏反应致使哮喘的发生。本课题拟通过建立哮喘发作期小鼠动物模型，探讨蝎黄解痉治哮颗粒调节哮喘气道炎症及气道纤维化方面的作用机理，为哮喘气道重塑的发生机制提供新的思路，也为寻找防治哮喘新药开发提供有效的理论依据。

Afatinib体内 方法：将24只6-8周龄雄性小鼠随机分为4组：正常对照组、哮喘模型组、蝎黄解痉治哮颗粒小剂量组、蝎黄解痉治哮颗粒大剂量组。排除正常对照组，即将哮喘模型组、蝎黄解痉治哮颗粒小剂量组及蝎黄解痉治哮颗粒大剂量组中每只小鼠腹腔注入溶于PBS的10μgOVA和氢氧化铝混合液0.5ml处于致敏状态，并于第21天开始每天同一时间连续3天对小鼠进行激发试验，即行雾化吸入，每次30分钟制备小鼠哮喘气道炎症模型。各组小鼠均分别定时定量给予相应实验药品。记录各组小鼠BALF中的炎症细胞总数、分类及计数；肺泡灌洗液中的炎症细胞变化；肺组织病理学变化；气道上皮细胞变化；小鼠肺泡灌洗液中炎症细胞因子IL-4、IL-5、IFN-γ含量改变；肺组织磷酸化p38MAPK蛋白的表达情况。分析并对比在治疗前和治疗后各项观察结果是否有检测意义。

没有 结果：蝎黄解痉治哮颗粒能够有效的减少哮喘气道炎症细胞及炎症因子的产生；使炎症因子IFN-γ的含量升高，IL-4、IL-5的含量下降；改善气道上皮细胞，抑制炎症的产生；阻碍肺组织磷酸化p38MAPK蛋白的表达，阻挡细胞核内信号的传送。通过实验结果证实蝎黄解痉治哮颗粒可以修复受损的肺组织、减少气道炎症反应、气道纤维化及气道重塑，有效降低哮喘的复发率。 结论：蝎黄解痉治哮颗粒具有抑制哮喘小鼠磷酸化p38MAPK蛋白表达和调节Th1/Th2平衡的作用。
[目的] 近年来,国内外对中药柴胡及其主要有效成分所引起的肝损伤报道日益增多。其导致肝脏毒性的机制尚不明确,为此,本课题以中药柴胡中主要活性成分柴胡皂苷D为代表,利用分子生物学技术探究其致肝细胞线粒体损伤作为中药诱发肝毒性的分子机理,可以为防治中药肝毒性提供潜在的干预分子靶点,具有理论与现实意义。 [研究方法] 本课题采用L02肝细胞系进行体外实验研究,以及小鼠灌胃SSD,应用MTS、HE染色、TUNEL染色、LDH检测、Hoechst染色、流式细胞技术、免疫荧光、Western blotting、干扰RNA等实验技术进行检测。观察：1)SSD小鼠灌胃后诱导肝损伤的作用。2)SSD体外作用L02细胞后对对细胞线粒体的损伤作用以及凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax、caspase-3/c-caspase-3、caspase-8/c-caspase-8、c-caspase-9等的表达变化情况。3)SSD对PDGF-βR/p38MAPK信号通路的影响,以及SSD在阻断PDGF-βR/p38信号通路后与下游凋亡通路之间的关系。4)SSD对fas介导的外源性凋亡信号通路的影响。

[结果] 实验证明SSD灌胃300mg/kg剂量能在小鼠体内诱发明显的肝脏损伤,促进肝细胞凋亡,同时SSD在体外能造成L02细胞线粒体的损伤,抑制细胞Bcl-2的表达,而促进Bax和Caspase3/8/9的活化,Cytochrome C释放增加,且呈剂量依赖性关系。进一步研究证明SSD通过抑制PDGF-βR/p38MAPK信号通路诱导细胞凋亡过程。除此之外SSD明显影响细胞上fas和bid的表达,使fas表达增高而bid表达降低,表明SSD同样激活fas外源性凋亡通路,并促使其将凋亡信号传递至线粒体。 [结论] 或者 SSD通过抑制肝细胞中的PDGF-βR/p38MAPK信号通路,造成线粒体损伤诱发下游凋亡通路的激活,进而诱导L02的凋亡产生；同时SSD能激活细胞膜上的fas受体,使caspase-8激活,切割bid为tBid,并将凋亡信号传递至线粒体,进一步产生促进细胞凋亡的作用。这些可能就是柴胡及SSD在临床使用中产生肝毒性的主要机制。
摘要：在本研究中,我们采用聚合酶链式反应-测序技术(PCR-SBT)对104名无血缘关系的北方内蒙古地区汉族健康个体MHC I类链相关基因A (MHC class I chain-related gene A, MICA)的3’非翻译区(3′-untranslated region,3′UTR)和5’启动子区(5′promoter region)的DNA多态性和单倍型多样性进行了分析。 在MICA3′UTR,该人群共检测出9个单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphism, SNP)位点,其位点间呈现出非常强的连锁不平衡；多态性位点组合为7种等位基因,频率范围为0.0048-0.6971,其中以UTR1最为常见(0.6971),其次为UTR2(0.2356)；UTR等位基因与MICA基因编码区(2-5外显子)共组成21种扩展单倍型；系统进化树分析显示MICA基因包括2个基本谱系,UTRl、UTR2分别与其中的一个谱系连锁,其中,UTR2与MICA*002:01、*007:01、*017、*045、*059连锁；UTR2与6种microRNA包括hsa-miR-636、 hsa-miR-520f、hsa-miR-4496、hsa-miR-873、hsa-miR-105、hsa-miR-183在种子序列区域存在错配。MICA基因3′UTR Ewens-watterson纯合度检验符合中性选择。 在MICA5’启动子区,共检测到12个变异位点,包括11个单核苷酸多态性位点(SNP)和1个缺失/插入(insertion/deletion, Indel)多态性位点,各变异位点间呈现非常强的连锁不平衡。同时在此区域共发现12种MICA5’启动子等位基因,其中promoter-7最为常见(频率为0.

HPLC能量代谢检测：实验分组同上。检测了可能和细胞迁移相关的能量代谢的变化。 4. Western Blotting检测COX-10：实验分组同上。结果反映能量代谢中氧化磷酸化功能酶的含量变化。 结果: 1.在本实验室建立了CEES体外染毒模型，发现0.5mM CEES是最佳染毒剂量。该剂量下染毒HaCaT可以观察到细胞粘附、迁移和侵袭能力均降低。部分功能和结构蛋白如K5、iNOS、MMP-1、Fra-1降低显著，Integrin β1略有增加。 2.0.5mM CEES染毒可以显著降低HaCaT细胞K5（基底细胞marker）。但形态学和K10的WB结果表明，并未有明显的细胞分化迹象。

3.建立了稳定的stem-loop Q-PCR法检测成熟miRNANA，比较了U6和5S两个内参的稳定性（后者更佳），以此法检测了miR-34a在CEES染毒HaCaT细胞内随时间后剂量变化后的表达，发现miR-34a在0.2,0.5mM CEES染毒后12h-24h表达增加，至24h增加3倍左右，该调控是通过该细胞的突变p53来实现的。 4.建立了高转染效率的miRNA转染方法。miR-34a沉默可以增加细胞迁移和粘附能力。同样，miR-34a沉默使0.5mM CEES染毒细胞迁移增加，该迁移能力的变化可以被p38和ERK1/2信号通路抑制剂所降低。miR-34a沉默并未使0.5mM CEES染毒细胞粘附增加。 5. miR-34a沉默引起0.5mM CEES染毒后一些迁移相关靶蛋白及信号通路激酶磷酸化增加，如c-myc、c-Met、ARHGAP1、HDAC6，以及p38和ERK1/2的磷酸化。迁移相关的信号蛋白iNOS增加依赖于ERK1/2通路激活。Fra-1作为已报道的miR-34a靶蛋白未见增加。 6. miR-34a沉默并未显著改变0.5mM CEES染毒细胞MMP-1, Integrin β1，Ca2+含量和能量代谢水平。 7. miR-34a沉默显著增加染毒前/后迁miR-34a沉默引起0.5mM 购买Lenvatinib CEES染毒细胞的ERK1/2信号通路激活，经过ERK1/2抑制剂处理后，细胞出现明显的分化状态。伴随着胞内Ca2+浓度和Integrin β1的明显增加。 结论及展望： miR-34a沉默可以显著增加迁移，并可以部分逆转CEES染毒引起的细胞迁移降低。miR-34a沉默后引起染毒细胞迁移增强的作用机制可能是：⑴p-p38和p-ERK1/2信号通路的激活；⑵c-Met蛋白表达增强，促使该通路的激活；⑶miR-34a靶蛋白ARHGAP1增加，可能引起下游迁移相关蛋白Rho GTPase增加；⑷HDAC6蛋白增加可能使骨架蛋白和组蛋白去乙酰化。 ZD6474核磁共振 本课题还有其它方面有待深入：⑴未在动物上开展在体验证实验；⑵使用的是p53突变型细胞株HaCaT，在研究毒性和DNA修复机制方面可能不够全面；⑶miR-34a靶蛋白改变后的功能没有进行干预研究，其作用是根据已有文献推测的。
目的：

调查心尖球形综合征(Left ventricular apical ballooning syndrome, ABS)研究文献,分析当前该主题的研究热点。探究感染因素与心尖球形综合征发病的相关性。 方法： 我们对国内外各大数据库包括中国生物医学文献服务系统(CBM)、Pubmed,荷兰医学文摘进行了文献检索,挑选有关感染与心尖球形综合征之间关系的文献,收取每篇文献中的相关数据包括患者年龄,性别,感染类型,感染诊断及临床转归。 结果： 一共找到27篇文献包含心尖球形综合征28例患者(1例为国内报道病例),平均年龄61.6±13.2,女性患者为20例,所有感染以细菌感染为主,有24例,其中有细菌生长的14个病例中,革兰氏阳性菌8例,革兰氏阴性6例,所有病例的临床治疗效果均较好。 AP24534 结论： 目前心尖球形综合征尚未有公认的诊疗标准,亦缺少具体评价不同治疗的研究,临床上对于该疾病的诊断和治疗,大部分依靠于临床医师自身经验,进行诊断及根据患者特点进行个体化治疗。
目的：本研究通过观察p38MAPK干扰载体沉默大肠癌细胞株SW480细胞中p38MAPK表达情况及胃泌素影响大肠癌细胞株SW480增殖的关系，初步探讨胃泌素是否通过影响细胞p38MAPK的表达来促进大肠癌细胞的增殖。旨在进一步明确胃泌素调控大肠癌发生发展的分子机制，为部分激素依赖性大肠肿瘤的个体化治疗提供理论依据。

方法：应用RTQ-PCR检测大肠癌细胞株SW480中胃泌素受体（CCKBR）的表达情况，通过MTT法观察不同浓度五肽胃泌素对细胞生长的影响情况，由此确定五肽胃泌素作用于大肠癌细胞株SW480浓度范围，实验共分四组：A组：为空白对照组，加入无血清培养基RPMI-1640。B组：为阴性干扰组，无关阴性对照序列-shRNA转染细胞，4-6小时后换1%胎牛血清培养基RPMI-1640，再培养24h。C组：为胃泌素组，加入含胃泌素（25.00mg/L）培养基RPMI-1640。D组：为转染shRNA质粒干扰+胃泌素组，4-6小时后换含胃泌素（25.00mg/L）培养基RPMI-1640，再培养24h。由上海吉凯基因构建p38MAPK-shRNA,转染后观察转染效率，当转染效率达到30%或以上。接着使用流式细胞仪各组细胞增殖；再用Westernblot法检测各组细胞中P38蛋白的表达水平。 结果： SW480细胞中存在CCKBR mRNA表达。胃泌素在6.25~200.00mg/L范围内能抑制大肠癌SW480细胞的凋亡，且当浓度达25.00mg/L时为最佳浓度（P<0.05）。转染24小时后，观察荧光表达的细胞得出转染效率，当质粒与脂质体的质量比为1:2时转染效率为40%-50%之间。质粒干扰+胃泌素组(D组)细胞增殖指数为(26.47±1.24)%，显著高于空白对照组（A组）的(24.34±0.67)%和阴性干扰组(B组)的(24.18±1.43)%（P<0.05），胃泌素组(C组)细胞增殖指数为（26.39±1.15）%，显著高于空白对照组(A组)和阴性干扰组(B组)（P0.05），空白对照组(A组)和阴性干扰组(B组)比较也无明显差异。利用Western-blot检测四组p38蛋白表达水平存在差异（P<0.01）。在胃泌素组(C组)和质粒干扰+胃泌素组(D组)中表达水平低于空白对照组(A组)（P<0.01），也低于阴性干扰组(B组)（P0.05），胃泌素组(C组)和质粒干扰+胃泌素组(D组)之间的蛋白差异无统计学意义（P>0.05）。 结论：胃泌素能够促进体外大肠癌SW480细胞增殖，同时p38蛋白的表达明显降低，而通过质粒干扰p38蛋白的表达后，大肠细胞SW480的增殖明显增强。进一步论证了胃泌素通过p38信号通路实现对大肠癌细胞SW480的生长调控。
目的针对二苯乙烯苷口服溶液存放过程中普遍存在的出现混浊沉淀等现象,对二苯乙烯苷口服液的稳定性进行了研究。 方法用高效液相色谱法(HPLC),考察不同配比的辅料如抗氧剂、螯合剂和增溶剂等对二苯乙烯苷口服液中二苯乙烯苷含量的影响。 结果 1.