结论:APE1蛋白的表达在乳腺癌组织及癌旁组织中存在明显差异,且在不同ER、HER-2状态,不同分子表型患者中也存在差异。APE1阴性表达者总生存时间长,APE1表达状态为乳腺癌患者的独立预后因素。APE1在乳腺癌细胞中的表达水平明显高于正常乳腺细胞,且与三阴表型密切相关。表明APE1是一种癌基因,检测APE1的表达水平对乳腺癌,特别是三阴乳腺癌的预后判断有一定的指导意义。 第二部分PAR无P-1抑制剂Olaparib对乳腺癌细胞增殖凋亡的影响 目的:奥拉帕尼处理后检测其对各乳腺癌细胞株增殖及凋亡的影响。 方法:设置不同的浓度梯度及时间,奥拉帕尼分别处理正常乳腺细胞(MCF-10A)及乳腺癌细胞株(MDA-MB-231、MCF-7、SK-BR-3、ZR-75-30、T47D),利用MTT及流式细胞技术检测药物对各细胞株的抑制增殖及凋亡作用。 结果:奥selleck合成拉帕尼对不同类型乳腺细胞株的IC50值的范围为11.206~32.164μM,对正常乳腺细胞的IC50值大于100μM。在浓度为50μM,处理48h时,流式细胞技术检测各细胞株的凋亡率为13.4%~95.74%。 结论:奥拉帕尼对不同类型乳腺癌细胞株的敏感性有所差异,对Her-2过表达型及三阴型较为敏感。第三部分奥拉帕尼对MDA-MB-231中APE1表达的影响及为什么RNAi 技术敲低APE1方法的建立 目的:通过免疫蛋白印迹法检测经奥拉帕尼处理后MDA-MB-231细胞中APE1的表达水平;RNAi技术敲低MDA-MB-231细胞中APE1表达。 方法:根据第二部分实验中所得的IC50值及最佳作用时间,利用免疫蛋白印迹法检测奥拉帕尼对MDA-MB-231细胞中APE1蛋白表达水平的影响;利用MLP-shRNA-APE1质粒载体转染MDA-MB-231细胞,荧光显微镜观察绿色荧光,免疫蛋白印迹法检测敲低效率。