4±0.35vs.1.3±0.19,P>0.05),但均低于ApoE-/-小鼠(10.34±1.62,P
目的探讨单纯疱疹病毒HSV-Ⅰ型载体介导白细胞介素1受体拮抗蛋白(IL-1Ra)对兔膝骨关节炎的局部治疗作用及机制。 方法48只新西兰大白兔随机分为手术造模组(n=24只)和假手术造模组(n=24只)采用改良Hulth法建立兔膝关节炎模型。构建单纯疱疹病毒Ⅰ型载体介导IL-1Ra表达的重组质粒(pHSV-IL-1Ra-LacZ)注射到实验兔模型关节腔,pHSV-LacZ空白载体设为对照。注射治疗后第1、4、8周和第12周,抽取关节腔滑膜液,采用双抗体夹心ELISA法分析IL-1Ra、IL-1的表达。第12周后取实验兔膝关节股骨内侧髁软骨和滑膜囊常规石蜡切片,HE染色和甲苯胺蓝染色检查病理改变,并进行大体标本评分和Mankin’s关节软骨病理组织学评分,评估pHSV-IL-1Ra-LacZ基因治疗兔膝关节炎的效果。体外原代培养关节软骨细胞,pHSV-IL-1Ra-LacZ转染细胞,流式细胞仪检测IL-1Ra过表达对关节软骨细胞的凋亡状态。不同浓度的细胞因子TNF-α(Ong/mL、5ng/mL、10ng/mL、15ng/mL、25ng/mL)刺激IL-1Ra过表达的关节软骨细胞,采用实时荧光定量PCR和Westernblot方法检测TNF-α刺激IL-1Ra过表达恢复的作用机制。分别用对应的信号通路特异性抑制剂阻断P38、ERK、JNK和P13K信号通路(U0126,SB203580,SP600125,LY294002),然后用荧光定量PCR和Western

点击此处 Blot检测相关炎症因子的表达变化水平。 结果手术成功造模后,手术造模组注射pHSV-IL-1Ra-LacZ后能明显持续抑制IL-1表达水平,且对膝关节软骨炎进展显著性抑制,大体评分结果显示,手术造模pHSV-IL-1Ra-LacZ治疗组较pHSV-LacZ治疗组差异存在显著性(2.21±1.05vs3.95±0.32,P<0.05),软骨组织评分结果显示pHSV-IL-1Ra-LacZ基因治疗组与对照组组兔滑膜相比(2.08±0.87vs3.89±0.12,P<0.05)。但对滑膜炎无明显治疗作用。体外原代培养兔膝关节炎模型关节软骨细胞,利用基因重组技术获得IL-1Ra过表达的细胞模型。在转染pHSV-IL-1Ra-LacZ后,我们采用流式细胞仪检测发现IL-1Ra过表达促进关节软骨细胞的凋亡,较pHSV-LacZ存在显著性差异(7.45±2.32vs2.76±0.87,P
目的和背景：目前，对于神经胶质瘤尤其是高度恶性的胶质母细胞瘤尚无较好的治疗方法。恶性脑胶质瘤化疗作为手术、放疗的补充近几年有所发展，然而，血脑屏障等脑组织结构的特殊性使之可选择的化疗药物较少，而且胶质瘤本身存在多重耐药，多方面的因素使得胶质瘤的化疗疗效低，对人类健康造成严重威胁，十分有必要探讨胶质瘤新的化疗药物及方案。环氧化物水解酶（solubleepoxide

hydrolase, sEH）抑制剂通过抑制sEH活性稳定体内环氧二十碳三烯酸（epoxyeicosatrienoic acids, EETs）的含量，具有抗炎症、治疗高血压的作用。有研究表明，sEH抑制剂具有潜在的抑制肿瘤生长作用。本研究采用一种性能更优的新型sEH抑制剂t-AUCB，以胶质瘤母细胞瘤细胞系U251和U87作为研究对象，探讨t-AUCB对高度恶性胶质瘤细胞的生物学作用，探索sEH抑制剂可能存在的抗胶质瘤作用。 方法和材料：(1) sEH抑制剂t-AUCB由美国加利福尼亚大学Davis分校的BruceD. Hammock教授惠赠，U251及U87细胞系由南京医科大学微生物与免疫学系姚堃教授惠赠。(2)利用sEH活性检测试剂盒，以Epoxy Fluor7作为sEH的底物，通过检测产物6-methoxy-2-naphthaldehyde的荧光度值来反应U251及U87细胞内sEH活性，并用同样方法检测t-AUCB对两种细胞内sEH活性的抑制作用。(3)用CCK-8法检测药物处理对细胞增殖的影响，并利用流式细胞仪检测药物处理对U251、U87细胞周期的影响以及对细胞凋亡的诱导情况。(4)

此网站 RT-PCR法检测相关基因mRNA的表达情况，Western blot法检测相关蛋白的表达水平以及相关蛋白的磷酸化水平。(5)利用SPSS13.0软件分析数据，数据用均值±标准差来表示。P
目的：响尾蛇毒素（crotoxin，简称CrTX）是南美响尾蛇Crotalus GSI-IX溶解度 durissusterrificus毒液的主要毒素，包括一个弱毒性的碱性成分PLA2（CB）和一个无酶活性无毒性的酸性成分（crotapotin，CA），它是一个异二聚体的β-神经毒素。CrTX经典的生物活性包括神经毒性、肌肉毒性、肾毒性和心脏毒性等，近年大量研究说明它还具有免疫调节、抗炎、抗微生物、镇痛和抗肿瘤等多种作用。多篇文献报道CrTX体内外都具有抗肿瘤活性，但是其分子机制尚未完全阐明。本文以SK-MES-1肺癌细胞为模型，从体外细胞和分子水平研究了CrTX的抗肿瘤作用及其机制。 方法：首先采用MTT法检测CrTX对SK-MES-1肺癌细胞的细胞毒作用，并采用平板克隆法检测CrTX对SK-MES-1细胞克隆形成能力的影响；采用流式细胞术检测CrTX对细胞周期的影响，Western blot检测PCNA蛋白水平的变化；采用Hoechst33258染色从细胞核形态观察细胞凋亡、Annexin V-FITC/PI双染定量凋亡率，并用Western blot检测Caspase-3蛋白的活性；采用Western blot检测自噬相关蛋白LC3、p62和Beclin1的变化；Western blot检测CrTX给药后P-p38和p38蛋白水平的变化，引入p38MAPK特异性阻断剂SB203580（简称SB），用MTT法检测阻断p38MAPK通路对细胞生存率的影响；采用SB阻断p38MAPK通路，观察对CrTX诱导的细胞周期阻滞、凋亡以及自噬的影响。 结果：CrTX显著抑制SK-MES-1肺癌细胞的生长，并呈现浓度和时间依赖性效应，72h的IC50为25.13μg/ml；CrTX处理细胞48h，能明显抑制SK-MES-1肺癌细胞的集落形成能力（p
目的：研究mGlu受体在阿尔茨海默病早期病理机制中的作用，并探讨Aβ介导的突触可塑性调制中的神经元内Caspase、p38MAPK、TACE、mTOR等信号通路的作用，为发现新型的药物靶点、治疗阿尔茨海默病提供理论和实验依据。 方法：所有实验均在横切脑片的海马齿状回或CA1区进行。用3周龄wistar雄性大鼠快速断头后制成350微米脑片，并置于含有95%氧气饱和的人工脑脊液的孵育槽内，室温下孵育一小时，然后将脑片转移到记录槽中，在海马齿状回或CA1区，使用标准电生理技术记录场兴奋性突触后电位和LTD。记录的fEPSP峰值用pClamp软件分析，用基础水平的相对百分数形式表示LTD的幅度。LTD值以均数±标准误(means±S.E.M.