71g/(kg.d)(相当于临床用量的30倍),SMCL组灌胃给予舒脉胶囊342mg/(kg.d)(相当于临床用量的6倍),SMCH/LY组灌胃给予舒脉胶囊1.71g/(kg.d)(相当于临床用量的30倍),腹腔注射给予PI3K抑制剂LY294002(0.3mg/kg,溶解于双蒸水中,每3天给药一次),bFGF组给予贝复剂(bFGF),于开胸结扎冠脉后立即在结扎处周围予bFGF心肌注射1次(125IU),术后始皮下注射肝素1250U/kg,每日1次,连续5天。MIR组和Sham组分别灌胃给予等量蒸馏水。灌胃给药大鼠,均为每日1次,连续给药2周和4周。末次给药后禁食24 h,不禁水。10%水合氯醛,300mg/kg,腹腔注射麻醉后进行后续实验。
2.研究内容 (1)心功能检测;(2)Western blot检测缺血心肌VEGF、PDGF-BB、PI3K、p-Akt蛋白表达;(3)实时定量RT-PCR(Real-time Quantitative RT-PCR)检测缺血心肌VEGF、PDGF-BB mRNA表达;(4)检测缺血心肌微血管密度(小静脉:vWF免疫组化染色法,小动脉:αSMA免疫荧光染色法);(5)Masson染色检测缺血心肌胶原含量的变化。 结果 1.心功能检测 治疗第2周后,SMCH、SMCL、bFGF组的左室射血分数(LVEF)较MIR组显著增高(P＜0.05);SMCH与SMCL、bFGF组比较差异无显著性意义(P＞0.05)。SMCH、SMCL、bFGF组左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)较MIR组显著降低(P＜0.05)。应用SMCH+LY294002(SMCH/LY)较MIR组LVEF、LVESD、LVEDD无显著性差别(P＞0.05)。进一步组间两两比较发现,应用大剂量舒脉胶囊组(SMCH)明显高于SMCH/LY组(P＜0.05)以及Sham组(P＜0.05)、MIR组(P＜0.05)。SMCH组较bFGF组或应用小剂量舒脉胶囊组(SMCL)LVEF、LVESD、LVEDD无显著性差异(P＞0.05)。 不 治疗第4周后,SMCH、SMCL、bFGF组的LVEF较MIR组显著增高(P＜0.05);LVESD、LVEDD较MIR组显著降低(P＜0.05)。但应用SMCH+LY(LY294002)较MIR组LVESD、LVEDD无显著性差异(P＞0.05);但LVEF较MIR组升高。进一步两两比较分析,SMCH组与bFGF组差别无统计学意义,SMCH治疗组较SMCL或SMCH/LY的LVEF、LVEDD显著增高(P＜0.05)。SMCH组较SMCL组LVESD无显著性差别(P＞0.05)。
2.Western blot检测分析 治疗第2周后,SMCH、SMCL、bFGF组VEGF、PDGF-BB、PI3K、p-Akt蛋白表达较MIR组显著升高(P＜0.05)。SMCH/LY组VEGF、PDGF-BB、PI3K、p-Akt蛋白表达与MIR组差异无显著性意义(P＞0.05)。进一步组间两两比较分析表明,SMCH组与bFGF组或SMCL组之间差别无统计学意义(P＞0.05)。SMCH组较SMCH/LY组VEGF、PDGF-BB、PI3K、p-Akt蛋白表达明显增高。治疗第4周后,SMCH组、SMCL组、bFGF组VEGF、PDGF-BB、PI3K、p-Akt蛋白表达较MIR组显著升高(P＜0.005)。SMCH/LY组VEGF、PDGF-BB、PI3K、p-Akt蛋白表达与MIR组差异无显著性意义(P＞0.05)。进一步组间两两比较分析表明,SMCH组较bFGF组或SMCL组或SMCH/LY组VEGF、PDGF-BB、PI3K、p-Akt蛋白增高。与治疗2周后比较,SMCH组、SMCL组、bFGF组治疗4周后VEGF、PDGF-BB、PI3K、p-Akt蛋白表达降低。 可能 3.实时定量RT-PCR(Real-time Quantitative RT-PCR)检测 治疗第2周后,SMCH组、SMCL组、bFGF组VEGF、PDGF-BB mRNA表达较MIR组显著升高(P＜0.05)。SMCH/LY组VEGF、PDGF-BB DNA Methyltransferase 抑制剂 mRNA表达与MIR组差异无显著性意义(P＞0.05)。进一步组间两两比较分析表明,SMCH组与bFGF组或SMCL组之间差别无统计学意义(P＞0.05)。SMCH组较SMCH/LY组VEGF、PDGF-BBmRNA明显增高(P＜0.05)。治疗第4周后,SMCH组、SMCL组、bFGF组VEGF、PDGF-BB
mRNA表达较MIR组显著升高(P＜0.05)。SMCH/LY组VEGF、PDGF-BBmRNA表达与MIR组差异无显著性意义(P＞0.05)。进一步组间两两比较分析表明,SMCH组较SMCL组或SMCH/LY组VEGF、PDGF-BB mRNA增高。与治疗2周后比较,SMCH组、SMCL组、bFGF组治疗4周后VEGF、PDGF-BB mRNA表达降低。 4.缺血心肌微血管密度(小静脉、小动脉)的测定 治疗2周后,SMCH组、SMCL组、bFGF组的毛细血管密度均较MIR组明显增高。SMCH/LY组毛细血管密度与MIR组差异无显著性意义(P＞0.05)。进一步组间两两比较分析表明,SMCH组与bFGF组之间差别无统计学意义。SMCH组(36.93±5.49)较SMCH/LY组毛细血管密度明显增高。SMCH组、SMCL组、bFGF组的小动脉密度均较MIR组(17.76±5.19)明显增高。SMCH/LY组小动脉密度与MIR组差异无显著性意义。组间两两比较分析表明,SMCH组的小动脉密度显著高于SMCL(P＜0.05)或SMCH/LY(P＜0.05)组以及Sham组(9.44±2.68)(P＜0.05)。SMCH组与bFGF组之间差别无统计学意义(P＞0.05)。 治疗4周后,SMCH组、SMCL组、bFGF组的毛细血管密度均较MIR组明显增高(P＜0.05)。SMCH/LY组毛细血管密度与MIR组差异无显著性意义。进一步组间两两比较分析表明,SMCH组毛细血管密度较SMCH/LY组、SMCL组、bFGF组明显增高(P＜0.05)。SMCH组、SMCL组、bFGF组的小动脉密度均较MIR组明显增高(P＜0.05)。组间两两比较分析表明,SMCH组的小动脉密度显著高于SMCL(P＜0.05)或SMCH/LY(P＜0.05)组以及Sham组(P＜0.05)。PI3K抑制剂LY294002显著抑制了舒脉胶囊所致的毛细血管和微动脉的新生,说明PI3K信号通路介导舒脉胶囊促血管新生。 5.