APN/CD13抑制剂抗HCC侵袭及新血管生成研究 目的：探讨APN/CD13抑制剂24F对HCC细胞侵袭和新血管生成的抑制作用 方法：选用人HCC细胞HuH-7和人脐静脉血管内皮细胞HUVEC,二者均表达APN/CD13。以L-亮氨酸对硝基苯胺为底物测定24F对APN/CD13酶活性的抑制作用。MTT法测定24F对HuH-7细胞增殖的抑制作用。Transwell细胞侵袭实验测定24F对HuH-7细胞侵袭和游走运动能力的抑制作用。微管形成实验测定24F对HUVEC细胞在Matrigel表面形成微管样结构的抑制作用。

selleck产品 结果：化合物24F对APN/CD13酶活性的半数抑制浓度为1.88mM。24F在0-200μg/mL浓度范围内对HuH-7细胞的增殖具有轻微地抑制作用,未观察到该化合物对HuH-7有明显的细胞毒效应。体外细胞侵袭实验结果表明,24F能够减少穿过Matrigel的HuH-7细胞数目,显示其对肿瘤细胞侵袭和游走运动能力的抑制作用。24F能够在体外抑制血管内皮细胞HUVEC形成微管样结构,提示24F具有潜在的抑制肿瘤新血管生成的能力。 结论：APN/CD13抑制剂24F对HCC细胞侵袭和游走运动能力具有抑制作用,对血管内皮细胞HUVEC微管形成具有抑制作用,提示APN/CD13抑制剂在抗HCC侵袭转移及新血管生成方面具有潜在的应用价值。 第二节.APN/CD13抑制剂抗卵巢癌增殖及新血管生成研究 目的：探讨APN/CD13抑制剂LYP对卵巢癌生长增殖及新血管生成的抑制作用。 方法：体外实验选用人卵巢癌细胞株ES-2和SKOV-3以及人脐静脉血管内皮细胞HUVEC。三种细胞均表达APN/CD13,表达水平由高到低依次为ES2、

SKOV-3和HUVEC。MTT实验测定LYP对细胞增殖的抑制作用。台盼蓝实验检测LYP的细胞毒效应。以L-亮氨酸对硝基苯胺为底物测定LYP对APN/CD13酶活性的抑制作用。流式细胞术和Western blot实验分别测定LYP对细胞APN/CD13表达水平的影响。划痕实验和Transwell侵袭实验观察LYP对HUVEC细胞侵袭和游走运动能力的抑制作用。微管形成实验测定LYP对HUVEC细胞在Matrigel表面形成微管结构的抑制作用。裸鼠接种ES-2细胞后尾静脉给予LYP治疗两周,观察药物对ES-2肿瘤生长的抑制作用和裸鼠对给药方案的耐受性。CD34免疫组化实验测定LYP对ES-2肿瘤组织平均血管密度和平均血管直径的影响。Western blot实验测定LYP对肿瘤组织内APN/CD13、VEGF、bFGF和TGFa表达水平的影响。 结果：MTT实验结果表明LYP能够有效的抑制ES-2细胞的增殖。LYP对ES-2细胞APN/CD13酶的活性具有显著的抑制作用。相同浓度下,LYP对APN/CD13酶活性的抑制作用大于乌苯美司。相对于ES-2细胞,LYP对SKOV-3细胞增殖的抑制作用较弱,提示LYP对ES-2细胞增殖的抑制作用可能与抑制APN/CD13有关。流式细胞术实验和Western blot实验表明LYP能够降低体外培养ES-2细胞APN/CD13的表达水平。裸鼠接种ES-2细胞后尾静脉给予LYP,连续治疗两周,ES-2肿瘤的生长受到显著的抑制作用。Western blot实验结果显示LYP能够降低肿瘤组织APN/CD13的含量。与阳性对照药乌苯美司相比,LYP对ES-2肿瘤生长的抑制作用较强。裸鼠对给药方案的耐受性良好,给药组裸鼠的体重与阴性对照组比较没有显著性差异。 为进一步研究LYP抑制体内ES-2肿瘤生长作用背后的机制,我们检测了LYP在抑制新血管生成方面的药理活性。MTT实验和台盼蓝实验结果显示在5-80μM浓度范围内,LYP对HUVEC细胞没有明显的细胞毒效应。在该浓度范围内LYP对HUVEC细胞APN/CD13酶的活性有一定的抑制作用。Transwell侵袭实验和划痕实验结果显示LYP能够明显抑制HUVEC细胞的侵袭和游走运动能力。微管形成实验表明LYP对HUVEC细胞在Matrigel表面形成微管样结构具有抑制作用。LYP对新血管生成的抑制作用在体内实验中得到了验证。对ES-2肿瘤组织进行CD34免疫染色,结果发现LYP给药组肿瘤平均血管密度和平均血管直径均小于阴性对照组。在相同给药剂量下,LYP抑制新血管生成的作用大于阳性对照药乌苯美司。LYP的抗微血管生成作用可能与其抑制与血管生成有关的分子的表达有关。Western

还有 blot实验结果显示,LYP给药组肿瘤组织内VEGF、bFGF和TGF-a的水平显著低于阴性对照组。 结论：LYP在体外和体内对卵巢癌细胞生长增殖具有较强的抑制作用,该作用可能与其降低细胞APN/CD13表达水平和抑制新血管生成有关。
目的：检测表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)、分化型胚胎软骨表达基因1(differentiated embryo-chondrocyte expressed gene1,DEC1)、分化型胚胎软骨表达基因2(differentiated 而且 embryo-chondrocyte expressed gene2, DEC2)、低氧诱导因子1a(Hypoxia-inducible factorla,HIF1a)、信号转导及转录激活因子3(signal transducer and activator of transcripton3, STAT3)及血管内皮生长因子(vascular endothelia growth factor,VEGF)信号传导分子在癌和癌旁组织的表达,探讨信号分子各自表达和不同表达模式与临床特征的关系及不同信号传导分子之间的关联。 材料与方法：选取了75例肺腺癌病人,标本收集时未进行任何治疗。病人年龄37-84岁,中位年龄为61岁；男性41例,女性34例；肿瘤直径≤3cm20例,>3cm55例；无淋巴结转移35例,有淋巴结转移的40例；有远处转移的5例,无远处转移的70例；高分化4例,中分化33例,低分化38例；TNMl期9例,TNM2期46例,TNM3-4期20例。采用免疫组织化学技术进行EGFR、DEC1、DEC2、HIF1α、STAT3及VEGF蛋白表达的检测,不同分子表达的阳性判定采用相应的评分标准；应用SPSS11.