探讨炎症抑制胰岛素信号传导而导致MS心肌重构的机制。 5.探讨黄连解毒汤对MS大鼠心肌重构干预作用的可能机制,为临床干预MS导致的心肌重构提供新的治疗靶点。 方法 雄性Wistar大鼠45只,随机分为两组:正常对照组(NC组,n=10),模型组(n=35)。NC组给予标准大鼠饲料及普通饮水喂养,模型组给予高糖、高脂及高盐饲料及20%高蔗糖水喂养(HF饮食)。HF饮食喂养16周后,将成模的21只大鼠随机分为代谢综合征组(MS组,n=10)及黄连解毒汤组(HLJDT组,n=11)。此后12周,MS组继续给予HF饮食同时每天以生理盐水2ml灌胃;HLJDT组继续给予HF饮食同时每天以黄连解毒汤1.04g/100g灌胃;NC组继续给予标准大鼠饲料及普通饮水喂养同时每天以生理盐水2ml灌胃。
实验过程中,进行以下检测:(1)整个实验过程中,每2周称量体重及测尾动脉血压1次;(2)分别于造模前、HF饮食喂养16周、实验末抽取静脉血测定空腹血糖、空腹胰岛素、血脂(甘油三酯,胆固醇,高、低密度脂蛋白),并计算胰岛素抵抗指数(IRI);(3)实验末抽取静脉血测定血清IL-6及TNF-α水平;(4)分别于实验开始前、HF饮食喂养16周、实验末进行超声心动图检查。 实验结束时处死动物,留取心脏标本,进行下列检测:(1)心肌组织超微结构和病理学检查;(2)应用Masson染色进行心肌组织间质胶原定量;(3)TUNEL法检测心肌细胞凋亡;(4)免疫组织化学检测MCP-1、ICAM.1及NF-κB P65、P50;(5)实时定量RT-PCR法检测CollagenⅠ/Ⅲ、TGF-p、ICAM-1、IL-6、TNF-α、IKKβ及NF-κB等mRNA的表达;(6)Western Blot法检测Ivd3、NF-κB、JNK、IRS-1及Akt等蛋白表达。 结果 1.大鼠代谢指标比较 实验开始时NC组与模型组两组大鼠代谢指标比较:体重(BW)、尾动脉收缩压(SBP)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(IRI)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)等指标均无统计学差异(P＞0.05)。 BAY 73-4506 Doxorubicin 花费 HF饮食喂养16周后NC组与模型组两组大鼠代谢指标比较:与NC组比较,模型组大鼠BW、SBP、TC、FINS、FBG及IRI升高(P＜0.01),HDL-C降低(P＜0.01)。 药物干预12周后NC、MS及HLJDT三组大鼠代谢指标比较:与NC组比较,MS组大鼠BW、SBP、TC、FINS、FBG及IRI进一步升高(P＜0.01);与MS组比较,HLJDT组大鼠BW、SBP、FINS、FBG及IRI降低(P＜0.01～0.05),HDL-C有所升高(P＜0.05)。 2.血清ELISA检测 药物干预12周后三组大鼠血清IL-6及TNF-α水平比较:与NC组比较,MS组大鼠IL-6及TNF-α表达升高(P＜0.01);与MS组比较,HLJDT组大鼠IL-6及TNF-α表达降低(P＜0.01)。
3.超声心动图检测 常规超声心动图指标情况:实验开始时NC组与模型组两组大鼠左室舒张、收缩末期内径(LVEDd、LVEDs)、舒张末期室间隔厚度(IVS)及左室后壁厚度(LVPW)、相对室壁厚度(RWT)、左室相对质量(LVRW)、左室短轴缩短率(FS)、舒张早期与舒张晚期峰值速度比值(E/A)及E峰减速时间(DT)均无差异(P＞0.05)。HF饮食喂养16周后,与NC组比较,模型组IVS、LVPW、RWT及LVRW明显增加(P＜0.01),E/A比值明显减小(P＜0.01),DT时间延长但差异无统计学意义(P＞0.05)。药物干预12周后,与NC组比较,MS组IVS、LVPW、RWT及LVRW均明显增加(P＜0.01),E/A比值明显减小(P＜0.01),DT延长(P＜0.05);与MS组比较,HLJDT组IVS、LVPW、RWT及LVRW均明显减小(P＜0.01),E/A比值明显升高(P＜0.05),DT有所缩短但无显著性差异(P＞0.05)。 ABT263 IBS指标情况:实验开始时两组大鼠IVS、LVPW的心肌校正IBS(IBS%)及背向散射积分周期变化幅度(CVIB)均无差异。HF饮食喂养16周后,与NC组比较,模型组IVS、LVPW的IBS%明显升高(P＜0.01),CVIB明显降低(P＜0.01)。药物干预12周后,与NC组比较,Ms组IVS、LVPW的IBS%明显升高(P＜0.01),CVIB明显降低(P＜0.01);与MS组比较,HLJDT组IVS、LVPW的IBS%明显降低(P＜0.05),CVIB明显升高(P＜0.05)。
4.透射电镜检测 NC组左室心肌组织细胞排列整齐,心肌细胞质膜连续、完整;粗细肌丝排列整齐,肌小节及明暗各带清晰可见;线粒体丰富、大小均一、圆形或椭圆形;核膜光滑完整,异染色质成簇状聚集在核周部;闰盘清晰、连续,结构完整;细胞间质可见成纤维细胞和少量胶原纤维;微血管管腔大小正常,内皮细胞结构正常。MS组左室心肌组织细胞部分肌节宽窄不一,有的肌节Z带、I带特征性结构变浅或消失,肌丝排列紊乱,质膜模糊、断裂;一些心肌细胞肌原纤维呈灶性溶解,有残存的膜结构和散乱的线粒体;线粒体明显增多,呈堆积状,肿胀、可见指纹状线粒体;核形状极不规则,多见深的切迹,常染色质呈团块状聚集;闰盘扭曲模糊断裂;微血管管腔狭窄,内皮细胞肿胀明显,呈柱状向管腔突起。HLJDT组左室心肌组织总体较MS组明显好转,细胞排列较整齐;肌原纤维断裂、溶解现象好转,可见T管系统略有扩张;线粒体大小较一致,排列较规整,未见指纹状线粒体;核形状较MS组规则,闰盘基本连续,间质内胶原堆积明显好转,微血管腔内皮细胞肿胀好转。 5.组织病理检测 HE染色显示,NC组心肌细胞排列整齐,细胞核大小均一,胞浆染色均匀;MS组心肌细胞排列紊乱,细胞核大小不甚规则,可见肌纤维断裂、排列紊乱;HLJDT组较MS组明显好转,心肌细胞排列较规整,肌纤维断裂少见,细胞核较规则。 6.Masson染色胶原含量检测 Masson染色显示胶原纤维呈蓝绿色,心肌纤维呈红色或黄色。NC组胶原组织分布均匀,排列整齐;MS组心肌间质胶原纤维明显增多,围绕心肌细胞的胶原纤维断裂、排列紊乱;HLJDT组较MS组心肌间质胶原纤维明显减少,相邻细胞的胶原纤维排列整齐。 定量分析显示:与NC组比较,MS组左室心肌组织胶原含量明显升高(P＜0.01);与MS组比较,HLJDT组左室心肌组织胶原含量明显降低(P＜0.05)。 7.TUNEL检测 TUNEL染色阳性细胞为细胞核呈棕褐色或棕黄色颗粒。NC组大鼠心肌细胞中可见极少量TUNEL染色阳性细胞。定量分析显示:与NC组比较,MS组大鼠心肌细胞中TUNEL染色阳性细胞明显增多(P＜0.01):与MS组比较,HLJDT组染色阳性细胞明显减少(P＜0.01)。 8.