禽流感病毒H5N1的NA接种小鼠引起小鼠肺脏Th17细胞数量增加。 通过对5周龄的小鼠鼻腔接种H5N1的神经氨酸酶,取小鼠肺脏组织的T细胞进行流式细胞术检测Th17和Treg细胞分化。结果发现,经过H5N1的神经氨酸酶感染后的小鼠肺脏Th17的细胞比例显著上升,并且呈现剂量依赖性。
2.禽流感病毒的NA能诱导小鼠骨髓来源的树突状细胞成熟 通过小鼠BMDC的体外培养,用脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS),H1N1的NA,H5N1的NA,H9N2的NA及热灭活的H5N1的NA以及卵清蛋白(OVA)分别在BMDC培养的不同时间段对树突状细胞进行刺激,然后通过流式细胞术检测树突状表面的MHC-11分子以及共刺激分子CD40, CD80, CD83和CD86。结果发现,禽流感病毒的NA均能促进树突状细胞的成熟,并且在一定范围内存在剂量依赖性,并推测是NA的酶活性促进了树突状细胞的成熟。 3.禽流感病毒H5N1的NA能诱导Th17及其它CD4+T细胞分化 通过小鼠BMDC和小鼠脾脏CD4+T细胞体外共培养,用H5N1的NA以及其他的样品对共培养的细胞进行刺激,并利用ELISA,荧光定量PCR以及流式细胞术对各个样品进行检测。结果发现,H5N1的NA能通过BMDC在第五天和第九天诱导小鼠Th17及其它CD4+T细胞分化。通过实验结果推测,早期由IL-21和TGF-β,随后由IL-6和TGF-β主导CD4+T细胞的Thl7分化。在此过程中,H5N1的NA能诱导相应各类炎症因子的释放,如TGF-β1、IL-6、IL-21、IL-23、IL-1β、IL-17A、IL-10等。
转化生长因子-β GSK2118436化学结构 (transforming growth factor-p, TGF-p)信号通路在细胞生长、增殖、分化、凋亡以及胚胎的发育中都具有极其重要的作用,TGF-β信号通路能否得到正常调节与人类多种疾病的发生密切相关。Smad家族蛋白是TGF-β信号通路中的关键信号转导蛋白,它们主要包括受体调节型Smad (receptor regulated Smad, R-Smad),通用转导型Smad (common mediator Smad, Co-Smad, Smad4)以及抑制型的Smad (inhibitory Smad, I-Smad)。 Smad4在整个TGF-p信号通路中起着核心的作用,它在受到TGF-β刺激后,能够与R-Smads相结合,从细胞质转移到细胞核,在核内Smad4能够与不同的转录调节因子结合调控下游基因的表达,从而调控TGF-p信号所介导的各种生理效应。 BRD7(bromodomain containing7)最早是从鼻咽癌细胞与正常细胞的基因差异表达筛选中得到的。BRD7是染色体重组复合物SWI/SNF的一员,能够通过Bromo结构域与组蛋白结合进而影响染色体重组。已有研究表明,BRD7能够参与WNT、ras/MEK/ERK以及Rb/E2F信号通路的转导,但是BRD7在TGF-β信号通路中的研究目前还没有报道。
哪里 本研究通过酵母双杂交实验发现了BRD7与TGF-β信号通路关键因子Smad4具有相互作用,之后我们分别在体内和体外证实了BRD7与Smad4的确存在相互作用,并且找到了其相互作用的区域。随后,我们通过荧光素酶报告基因实验证明了BRD7是TGF-p信号通路的促进因子。同时,通过对TGF-p信号通路诱导的下游基因表达的检测验证了这一促进效应。BRD7调节TGF-p信号通路的转导主要通过两方面。一方面,BRD7能够通过Bromo结构域结合乙酰化的H3K9从而促进Smad4结合DNA,另一方面,BRD7与p300的相互作用能够促进Smad4的转录活性。最后,我们在细胞水平上证实了BRD7能够影响TGF-β信号通路调控的细胞增殖、细胞周期及上皮细胞向间充质细胞的转变(epithelial-mesenchymal
transition, EMT)现象等功能。 综合我们的研究表明,BRD7蛋白能够通过对TGF-β信号通路关键因子Smad4的调节参与TGF-β信号通路的转导,并且能够影响TGF-β在细胞水平上对多种细胞行为的调节。此研究为进一步理解TGF-p信号通路的调节机制以及进一步理解BRD7在癌症发生中的功能和机制提供理论依据的基础。
转化生长因子-β (Transforming Growth Factor-β或者TGF-β)作为一种重要的细胞因子在细胞的生长、增殖、分化中发挥着非常重要的调控作用。因此,TGF-β信号通路的调控异常与人类多种疾病密切相关如癌症等。在TGF-β信号传递过程中Smads蛋白发挥了重要的作用。Smads家族蛋白根据其结构和功能可以分为三大类,分别是受体激活的R-Smads(如Smad2/3),通用转导的Co-Smad,以及抑制型的I-Smads,在经典的TGF-β信号通路中,配体与细胞表面的受体结合,从而引起R-Smads的磷酸化。磷酸化的R-Smads与Co-Smad结合形成三聚体进入细胞核,结合到特定的DNA序列从而调控下游基因的表达。 或者 在TGF-β信号通路中,转录水平的研究已经比较清楚,但是转录后水平的调控机制还不是非常清晰。基因在转录后,需要经过剪接加工成为成熟的mRNA,最后翻译成为蛋白质。经典的转录后剪接加工调控主要是通过RNA结合蛋白识别mRNA上的增强或抑制单元来实现的。在TGF-β信号通路中,RNA结合蛋白如何参与其转录后调控的机制还不清晰。本研究拟以构建RNA结合蛋白文库为载体,结合细胞水平和分子水平的实验,研究RNA结合蛋白在TGF-β信号通路中的调控作用。 根据RNA结合蛋白数据库中的信息,在人类细胞中有235个蛋白含有一个或多个RNA结合单元(RNA Recognition Motif或者RRM)。对照cDNA文库(Human ORFeome5.