建立小鼠细粒棘球蚴感染模型，实验组用原头蚴感染BALB/c小鼠，对照组小鼠腹腔注射同体积的PBS；分别于第1、3、5、7、9、12天处死后，用流式细胞仪检测脾细胞中T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+T细胞比值及CD4+CD25+T细胞的含量及NK细胞的活性受体NKG2D的表达；qRT-PCR法检测Foxp3mRNA和TGF-β1mRNA的相对表达量；Yac-1作为靶细胞与小鼠脾细胞共培养，用LDH法检测小鼠NK细胞对Yac-1的裂解率，观察脾细胞的杀伤活性。 2.建立小鼠细粒棘球蚴感染模型，并用抑制剂特异性阻断TGF-β1受体，于第9天处死后用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+T细胞比值及CD4+CD25+T细胞的含量及NK细胞的活性受体NKG2D的表达；用LDH法检测脾细胞的杀伤活性；Western
Bolting检测细粒棘球蚴对TGF-β/Smad的信号通路的影响。 结果 1.在细粒棘球蚴感染早期，CD4+CD25+Foxp3+T比值增高：与对照组相比小鼠CD4+/CD8+T细胞比值逐渐下降；随着感染时间的延长，CD4+CD25+T细胞数量呈逐渐增高；Foxp3在基因水平上的表达呈增高的趋势；与对照组相比，除感染后第1天无统计学差异外，其他的均有统计学差异（P<0.05），并随着感染时间的延长而增高；qRT-PCR法检测到TGF-β1在mRNA水平的表达量也高于对照组（P<0.05）；随着时间的延长NK细胞的活性受体NKG2D的表达量呈下降的趋势，与对照组比较，感染后1、3、9、12天NKG2D的表达量都有统计学意义（P<0.05）。随着时间的延长NK细胞数量呈下降的趋势，与感染前比较，感染后第1、3、9、12天NK数量差异都有统计学意义（P
随着机体的老化,心脏也同时发生和老化相关的病理变化,进而引起相关疾病的发生。目前,和老化相关的机制学说有数十种,而其中,以晚期糖基化终产物(AGEs)为基础的糖基化学说,备受关注。在心脏老化的过程中,心肌成纤维细胞和心肌细胞也逐渐老化,同时心肌胶原含量逐渐增加,在心肌间质及血管周围异常聚积,发生心肌纤维化。心肌纤维化不仅是冠心病、高血压和心力衰竭等疾病心室重构发生、发展的重要机制之一,更是心肌老化的重要特征。心肌的纤维化可引起心肌结构紊乱,心肌顺应性降低,僵硬度增加,并促使心律失常,顽固性心衰的发病率升高。因此,目前对心肌纤维化,尤其是AGEs诱导的老化过程中心肌纤维化相关机制的研究,显得格外重要。
4-mu小白鼠 他汀类药物是临床上应用广泛的降脂药,具有强大的抗炎作用,已经有研究证实,他汀对心衰患者可能有益。匹伐他汀是新一代他汀类药物,是第一个全合成的HMG-CoA还原酶抑制剂,它对AGEs诱导的心肌纤维化的研究,目前还没有文献报道,其可能的作用机制,也还没有明确。 本研究以培养的新生SD大鼠心肌成纤维细胞(CFs)为研究对象,采用Western Blot和β-半乳糖苷酶染色等实验方法,观察了AGEs诱导的心肌成纤维细胞老化和纤维化的可能分子机制；同时观察HMG-CoA还原酶抑制剂匹伐他汀(Pit)对AGEs诱导的心肌成纤维细胞纤维化的影响及其潜在机制。为阐明心肌纤维化的发生机制,防治心肌纤维化提供实验依据。实验内容包括以下两个部分： 第一部分晚期糖基化终产物对心肌成纤维细胞老化及纤维化的影响 目的：探讨晚期糖基化终产物(AGEs)诱导心肌成纤维细胞老化及纤维化的相关机制。 方法：用AGEs(200μg/ml)及抗-RAGE抗体(2μg/ml)、TGF-β/smad通路抑制剂(SB431542,10μM)干预乳鼠心肌成纤维细胞72h。观察老化相关指标β-半乳糖苷酶的活性及p16的表达；Western 有 blot检测TGF-β, p-smad2/3, MMP-2的水平。 结果： 1.AGEs干预72小时后,AGEs组细胞老化指标p-半乳糖苷酶的活性及p16的表达水平较对照组明显升高(p
目的：观察槲皮素在环孢素（CsA）诱导肾小管上皮细胞转分化（EMT）中的作用，探讨槲皮素对肾小管EMT相关TGF-β1/Smads信号分子蛋白的影响。
方法：1.将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞株（NRK-52E）分为正常对照组及不同药物（CsA、TGF-β1阻断剂、槲皮素）处理组，CCK8检测法观察细胞的增殖抑制情况。2.将NRK-52E细胞培养分为6组：正常对照组（A组，含胎牛血清的培养液）、环孢素处理组(B组，加入含CsA培养液)、槲皮素对照组（C组，加入含槲皮素培养液）、阻断剂组（D组，培养液中先加入TGF-β1阻断剂，24h后再加入CsA）、槲皮素干预1组（E组，培养液先加入CsA，24h后再加入槲皮素）、槲皮素干预2组（F组，培养液先加入含CsA，24h后再加入TGF-β1阻断剂和槲皮素），各组细胞培养24h后，采用RT-PCR法、免疫组化法或Western-blot法检测各组细胞成纤维特异蛋白（FSP-1）、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β1、Smad2和Smad7mRNA和蛋白表达。 结果：1．CsA处理细胞后其活力明显降低，不同浓度的阻断剂或槲皮素后处理24h后其细胞存活率均增高（P0.05）；B、E、F组mRNA和蛋白表达均出现不同程度上调（P＜0.05），其中B组上调尤明显；D组mRNA和蛋白表达明显低于B、E、F组，但高于A、C组（P＜0.05）；F组mRNA及蛋白表达高于E组（P＜0.05）。 因为 3．α-SMA:免疫着染显示主要表达于胞浆；C组mRNA和蛋白表达与A组无统计学差异（P>0.05）；B、E、F组mRNA和蛋白表达均出现不同程度上调（P＜0.05），其中B组显著上调；D组mRNA和蛋白表达明显低于B、E、F组，但高于A、C组（P＜0.05）；F组mRNA与E组无统计学差异（P>0.05），但蛋白表达高于E组（P＜0.05）。 4．TGF-β1：免疫着染显示主要表达于胞浆；C组mRNA和蛋白表达与A组无统计学差异（P>0.05）；B、E、F组mRNA和蛋白表达均不同程度上调（P＜0.05），其中B组上调尤明显；D组mRNA与蛋白表达均明显低于B、E、F组（P＜0.05），与C组无明显差异（P>0.05）；F组mRNA高于E组（P＜0.05），但蛋白表达无统计学意义（P>0.05）。 5．Smad2：免疫着染显示主要表达于胞浆；C组mRNA和蛋白表达与A组无统计学差异；B、E、F三组mRNA和蛋白水平均有不同程度表达上调（P0.05）；F组mRNA表达高于E组（P＜0.05），蛋白表达无统计学意义（P>0.05）。 6．Smad7：免疫着染显示主要表达于胞浆；C组mRNA和蛋白表达与A组无统计学差异（P>0.05）；B、D组mRNA和蛋白水平均有不同程度表达下调（P<0.05），其中B组下调尤显著；D组mRNA和蛋白水平较A、C组表达下调（P<0.