p.)和21α-MMD(5mg/kg和20mg/kg,i.p.)均可降低LPS诱导的小鼠血浆NO的生成。结果提示4-methoxyhonokiol和21α-MMD均具有体内抗炎活性。 点击此处 体内NO和PGE_2的产生有赖于细胞诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxidesynthase,iNOS)及环氧化酶(cyclooxygenase,COX)-2的表达或酶活性,过量NO和PGE_2的产生与慢性炎症和癌症过程密切相关,因此,通过抑制iNOS和COX-2的表达或活性,有效控制活化的巨噬细胞产生过多的NO和PGE_2可降低炎症疾病和癌症的发生。在LPS诱导的小鼠RAW 264.7巨噬细胞体外炎症模型中,1～30μM的4-methoxyhonokiol和21α-MMD均能浓度依赖性地降低LPS诱导的NO和前列腺素E_2(prostaglandin E2,PGE_2)的生成,同时对iNOS、COX-2蛋白和mRNA的表达均有抑制作用。此结果证明,4-methoxyhonokiol和21α-MMD对LPS所诱导的NO和PGE_2生成的抑制作用是通过下调iNOS和COX-2蛋白质和mRNA的表达而实现的,并且此调节作用发生于基因转录水平。iNOS与COX-2皆受NF-κB的调控,为了阐明此抑制作用的分子机制,我们利用碱性磷酸酶报告基因测定法和免疫印迹法分别检测了4-methoxyhonokiol、21α-MMD和21β-MMD对LPS诱导的NF-κB转录活性以及IκB-α的磷酸化和降解的影响,结果显示,三个化合物均能显著抑制LPS诱导的NF-κB转录活性,并且此作用是通过抑制IκB-α的磷酸化和降解而实现的。

AUY922 丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPKs)的磷酸化在巨噬细胞产生NO和促炎细胞因子的过程中起着关键的作用。因此,为了进一步探讨参与4-methoxyhonokiol、21α-MMD和21β-MMD抑制NO产生的作用通路,我们检测了这些化合物对LPS诱导的MAPKs磷酸化的影响。结果显示,4-methoxyhonokiol、21α-MMD和21β-MMD皆对LPS诱导的c-Jun氨基末端激酶(c-Jun

N-terminal kinase,JNK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)的磷酸化有不同程度的抑制作用,但对细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases 1/2,ERK1/2)却没有影响。这些结果提示,除了对NF-κB转录活性的抑制外,抑制JNK和p38 MAPK的磷酸化可能是4-methoxyhonokiol、21α-MMD和21β-MMD下调iNOS的表达从而抑制NO产生的另外一个作用机制。 综上所述,本文首次证明了厚朴提取化合物4-methoxyhonokiol和枳实提取化合物21α-MMD均具有体内外抗炎活性,提示4-methoxyhonokiol和21(α,β)-methylmelianodiol分别是厚朴和枳实中的重要抗炎成分。该研究为厚朴和枳实作为抗炎中药的运用提供了重要的药理学基础。
土槿皮乙酸(PAB)是从松科植物金钱松的根皮中分离的二萜酸,具有抗肿瘤、抗生育等作用。本文对土槿皮乙酸体外抗肿瘤活性进行了较为系统的研究,主要阐述了土槿皮乙酸在两种肿瘤细胞:人乳腺癌MCF-7细胞和鼠成纤维肉瘤L929细胞中抑制细胞生长的机制。

在人乳腺癌MCF-7细胞中,土槿皮乙酸诱导凋亡,自噬,衰老及M期周期阻滞。土槿皮乙酸在36和48h的IC_(50)分别是3.4和1.35μM。4μM土槿皮乙酸处理36h,MCF-7细胞DNA出现片段化,凋亡小体增加。其凋亡通路主要是土槿皮乙酸激活蛋白酪氨酸激酶(PTKs),PTKs激活JNK并抑制ERK的活化,进而诱导MCF-7细胞凋亡。但MCF-7细胞的凋亡与Fas死亡受体途径无关。在土槿皮乙酸诱导凋亡的过程中,有一部分细胞因为自噬而逃逸凋亡机制,最终成为衰老的细胞。这部分细胞在4μM土槿皮乙酸作用36h时,MDC染色阳性,Beclin 为什么 1表达上调,LC3Ⅰ转变为LC3Ⅱ(自噬)。而在4μM土槿皮乙酸处理3d,去药培养5d的时候存活细胞变大变扁平,SA-β-galactosidase染色为蓝色(衰老)。在研究细胞周期阻滞的过程中,4μM土槿皮乙酸在36h时显著上调细胞核内的cyclinB1和cdc2而诱导M期细胞周期阻滞。同时土槿皮乙酸上调p21和p53的表达,说明p21和p53有可能参与M期周期阻滞和凋亡。而M期周期阻滞有可能与自噬,凋亡和衰老相关。 在鼠成纤维肉瘤L929细胞中,土槿皮乙酸不诱导凋亡,但诱导自噬,衰老和M期周期阻滞。80μM土槿皮乙酸在36h的抑制率是65.37±4.