方法1.动物实验部分(1)实验分组将8月龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组正常饮食+假手术组(AL+Sham);正常饮食+心肌缺血/再灌注组(AL+I/R);热量限制+假手术组(CR+Sham);热量限制+心肌缺血/再灌注组(CR+I/R);各组n=10。正常饮食组小鼠每日自由摄食,热量限制方法是开始给予正常食量的90%,之后每也许两周递减10%,共持续8周。心肌缺血/再灌注手术采用结扎冠脉左前降支的方法,缺血30min,再灌注24h;(2)热量限制期间监测小鼠体重变化,8周后采集终末体重值;(3)Even’s blue与TTC染色检测MI/R后心肌梗死面积;(4)HE染色确定心肌组织的病理损伤情况;(5)免疫组化法检测心肌组织中CD还有45的表达;(6)LDH、CK-MB、SOD及MDA含量测定反映心肌损伤情况;(7)Western blot法检测心肌组织中细胞焦亡相关蛋白NLRP3、GSDMD、ASC、caspase-1与TLR4的表达;(8)ELISA法检测IL-1β、IL-18含量。2.细胞实验部分(1)实验分组将H9c2心肌细胞分Nepicastat分子量为以下5组对照组(Control);热量限制组(CR);低氧/复氧组(H/R);热量限制+低氧/复氧组(CR+H/R);TLR4抑制剂TAK-242+低氧/复氧组(TAK-242+H/R);(2)采用CCK-8法确定细胞存活率;(3)RT-PCR和Western blot法检测TLR4、NLRP3、GSDMD、ASC、caspase-1的表达;(4)免疫荧光法检测NLRP3、ASC的表达。