方法 qRT-PCR检测正常乳腺细胞HBL-100和4种乳腺癌细胞(SK-BR-3、BT-549、MCF-7和MDA-MB-231

方法 qRT-PCR检测正常乳腺细胞HBL-100和4种乳腺癌细胞(SK-BR-3、BT-549、MCF-7和MDA-MB-231)中RMRP和miR-613的表达水平。以MCF-7细胞为研究对象,分别构建沉默RMRP或过表达miR-613的乳腺癌细胞株,qRT-PCR检测RMRP和miR-613的表达水平,PI3K inhibitor Library �ٴ�����MTT法检测细胞存活,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测增殖相关蛋白(Cyclin D1)和凋亡相关蛋白(Cyt-c、Bax和Bcl-2)的表达水平。双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR验证RMRP和miR-613的靶向调控关系。结果与HBL-100细胞相比,4种5-Fluoracil NMR乳腺癌细胞RMRP的表达显著上调,miR-613的表达显著下调。稳定沉默RMRP或过表达miR-613的细胞株构建成功。沉默RMRP或过表达miR-613均可显著抑制CyclinD1和Bcl-2蛋白的表达,促进Cyt-c和Bax蛋白的表达,抑制MCF-7细胞增殖,促进细胞凋亡。miRUlixertinib体外-613是RMRP的靶基因,RMRP可负性调控miR-613的表达。抑制miR-613可逆转沉默RMRP对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。结论沉默RMRP通过上调miR-613表达激活线粒体凋亡途径进而促进乳腺癌细胞凋亡,抑制细胞增殖。
痰的形成,是食管癌产生的主要病因。食管癌气滞血瘀热结等病机均由痰所起。五脏皆可生痰,但食管癌的论治中以脾脏最为关键。

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