4.采用EGFP融合表达的方法,构建基于昆虫表达载体p IB/V5-His的重组表达质粒p IB-Bm Vps4-egfp、p IB-egfp-Bm Vta1,转染家蚕Bm N细胞,用荧光显微镜观察发现这2个重组蛋白均主要定位于细胞质中。5.应用荧光定量PCR、RT-PCR及Western blot分析Bm Vps4和Bm Vta1AZD8055化学结构在家蚕不同发育阶段及不同组织器官中的基因转录和蛋白表达水平的变化。二者的基因在家蚕整个生活周期中均有转录,且在胚胎发育和变态发育期达到最高水平;Bm Vps4在受精卵中转录水平最高,是其在1龄幼虫中表达量的4倍;Bm Vta1在蚕蛾中转录水平最高,是其在1龄幼虫时的2倍。这两种蛋白在家蚕生长发育过程中都有表LBH589分子量达,特别在家蚕变态发育和胚胎发育阶段有明显的上调。因此,这两个基因及其编码蛋白可能在家蚕发育中发挥重要作用。另一方面,这两个基因具有一定的组织器官表达特异性,在马氏管、卵巢、精巢、神经节、头、脂肪体、中肠、丝腺、血淋巴中均有基因的转录,但在头和血淋巴中基因转录水平达到最高。虽然Western blot结果进Talazoparib细胞系一步证实了这两个蛋白在多种组织器官中的广泛存在,但是二者都在卵巢和精巢中表达量高,在头部中表达量却很少,在血淋巴中也没有检测到蛋白表达的信号,对这个现象我们正在优化实验条件进行进一步的研究中。6.采用RNAi技术探究Bm Vps4在家蚕变态发育阶段的作用。将人工合成的si RNA片段注射进入家蚕5龄第5天幼虫体内,能够明显降低Bm Vps4的m RNA水平,并显著的迟滞了变态发育的进程。