结果与结论
目的使用CRISPR/Cas9技术构建血管内皮生长因子b(Vascular endothelial growth factor b,Vegfb)敲除斑马鱼模型。方法设计CRISPR/Cas9位点,体外转录单链向导RNA(single guide RNA,sghttps://www.selleck.cn/products/gdc-0032.html RNA)和Cas9 RNA,通过斑马鱼受精卵显微注射,评价sg RNA效率。对子代斑马鱼进行基因测序并筛选,最后获得基因敲除的纯合子斑马鱼Vegf-b-/-。结果针对1个基因位点设计并构建了2个sg RNA,选择效率最高的sg RNA1进行斑马鱼受CB-839价格精卵显微注射,获得嵌合体F0代胚胎,筛选出稳定遗传的founder。并进一步通过三代筛选鉴定获得可稳定遗传的Vegf-b敲除的斑马鱼系,通过荧光显微镜观察发现其血管发育和心脏形态异常。结论通过CRISPR/Cas9技术,可以稳定可靠的构建Vegf-b或者基因敲除斑马鱼,并证明Vegf-b影响斑马鱼体节间血管的发育和心脏功能,为后续Vegf-b功能研究奠定了重要的基础。
中心血管通路装置是治疗临床重症、肿瘤、长期需要进行静脉输液患者的重要工具。选择适当的穿刺部位和血管,确保正确的导管头端位置,对维护其长期通畅率,降低感染、血栓形成、导管异位等并发症的发生率至关重要。