05)。 3．AS、AS+F_2对血清中LDH、CK活性的影响 与Control组比，I／R组血清中LDH、CK的活性明显提高(P＜0.05)。与I／R组比，AS组、AS+F_2组心肌酶的释放明显降低(P＜0.05)。与AS组比，AS+F_2组心肌酶的释放明显降低。 4．AS、AS+F_2对血流动力学的影响 缺血期，各组HR、SP、DP、LVSP、±dp／dtmax均降低，与I／R组比，AS组及AS+F_2组有统计学意义(P＜0.05)，AS+F_2组与AS组比无统计学意义(P＞0.05)：再灌注时，与I／R组比，AS组和AS+F_2组有统计学意义(P＜0.05)，AS+F_2组与AS组比，有统计学意义(P＜0.05)。 寻找更多 5．VER、EGTA、H7、BIM对缺氧复氧心肌细胞Egr-1表达的影响 5．1．VER、EGTA、H7、BIM对培养心肌细胞Egr-1 mRNA表达水平的影响：RT-PCR结果显示：与Control组相比，H／R组及DMSO组心肌细胞Egr-1mRNA的表达水平明显增高；与H／R组比，VER组、EGTA组、H7组、BIM组Egr-1 mRNA的表达明显下调，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 5．2．VER、EGTA、H7、BIM对培养心肌细胞Egr-1蛋白表达水平的影响：Western
blot结果显示：与Control组相比，H／R组及DMSO组心肌细胞Egr-1mRNA的表达水平明显增高；与H／R组比，VER组、EGTA组、H7组、BIM组Egr-1蛋白的表达明显下调，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 结论 1)F_2能通过抑制Egr-1的过量表达起到抗心肌缺血再灌注的作用：F_2除通过抑制Egr-1起到抗心肌缺血再灌注损伤外还有其它机制参与。 2)Ca~(2+)／PKC信号通路参与了心肌细胞缺氧复氧中Egr-1的高表达。
目的p53是迄今为止发现的突变率最高、涉及范围最广的抑癌基因之一,在肝细胞癌(以下简称肝癌)的动物模型中也发现,细胞癌变的早期即伴有p53功能缺失或突变。二乙基亚硝胺(DEN)是一种强致癌剂,特别是对于肝脏,有很高的致癌率,并且其诱导的动物肝癌模型与人类肝癌的产生过程很相似,因此常被用作肝癌动物模型的诱癌剂。本实验即研究p53功能缺失对DEN诱导肝细胞恶变过程的影响,从而进一步明确p53功能缺失和细胞恶变之间的关系,探讨肝癌发生的机制。方法由于转录因子AP-1与肝癌的发生有较密切的关系,我们以AP-1作为观察指标。实验中首先利用p53特异的抑制剂pifithrin-α和小RNA干扰技术抑制其功能,随后再观察DEN对正常肝细胞AP-1转录活性的影响,并且与不抑制p53功能的对照组做比较,从而探讨p53在DEN诱导的肝细胞癌变激发阶段的作用;因为AP-1的活化和MAPK信号转导通路有密切的关系,随后的实验中我们利用MAPK信号转导通路的抑制剂和Western
blot技术来判断究竟是哪些信号转导通路参与了p53功能缺失时DEN诱导的L02细胞AP-1的活化。结果实验发现p53功能缺失可以显著提高二乙基亚硝胺诱导的AP-1的转录活性,并且表现出剂量和时间的双重依赖性;而二乙基亚硝胺对正常肝细胞AP-1的转录活性无明显作用,却可以显著上调正常肝细胞p53的活性;使用各种抑制剂的实验组发现JNKs的抑制剂SP600125可以显著的抑制二乙基亚硝胺诱导的p53功能缺失细胞的AP-1的活化,并且其抑制作用和用量呈相关,而ERKs和p38的抑制剂却无明显作用;Western 更多 blot亦从蛋白水平证实二乙基亚硝胺诱导p53功能缺失细胞的AP-1的活化是通过JNKs信号转导通路,而与ERKs和p38无明显相关。结论一、p53功能缺失可以显著促进二乙基亚硝胺诱导的肝细胞L02的AP-1转录活性的上调;二、p53可能是正常肝细胞的重要抗肿瘤机制;三、信号转导分子JNKs参与了p53功能缺失时二乙基亚硝胺诱导的肝细胞L02的AP-1转录活性的上调,而与ERKs和p38无明显关系。
皮肤是人体最大的器官,被认为是一个具有独特免疫功能并与整个免疫系统密切相关的组织器官。本课题考察了rHu
可能 IFN-α2b经皮给药后干预皮肤、皮下肌肉、血液中细胞因子表达的特征,并对表皮LC缺乏和RA皮肤反应模型的建立和检测进行了研究和探讨。通过皮肤给药建立表皮LC缺乏模型和RA皮肤反应模型,并采用两种染色法验证。对正常BALB/c小鼠、两种皮肤免疫水平改变模型经皮给药和体外给药rHu IFN-α2b 24h,通过Real-Time PCR和ELISA法测定血液中、皮肤中和皮下肌肉层中IFN-α、IL-18、IFN-γ、IL-10、IL-12的蛋白质和mRNA的表达变化情况。对角质形成细胞PAM212细胞系和成纤维细胞L-929细胞系进行直接rHu IFN-α给药和采用CP、RA预处理3h后再给药,以分析细胞中IFN-α、IL-18、IFN-γ、IL-10、IL-12的蛋白质和mRNA的表达变化情况。结果显示干预细胞给药和在体、离体经皮给药能引起细胞和组织细胞因子表达出现显著调整,确定机体在经皮给药时存在皮肤免疫屏障,且皮肤免疫屏障对外源性抗原具有免疫监视和防御作用。
目的建立UVA诱导的HaCaT细胞凋亡模型，从活性氧(ROS)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路和半胱天冬酶-3(caspase-3)的角度，研究扇贝多肽(Polypeptide from Chlamys farreri，PCF)抑制UVA引起的HaCaT细胞凋亡的分子机制。方法采用正交实验设计，以流式细胞仪PI染色法测定细胞凋亡率，确立UVA诱导的HaCaT细胞凋亡模型。实验设计分为6组：对照组、UVA模型组、UVA+5.68 mmol·L~(-1)维生素C阳性对照组、UVA+5.69 mmol·L~(-1) PCF组、UVA+2.84mmol·L~(-1)PCF组、UVA+1.42 mmol·L~(-1)PCF组。以2，7-二氯氢化荧光素二酯(DCFH-DA)为荧光探针，检测PCF对UVA照射后细胞内ROS生成的影响；琼脂糖凝胶电泳分析PCF、p38MAPK抑制剂(SB203580)及caspase-3特异性抑制剂(Ac-DEVD-CHO)对细胞凋亡的影响；Hochest 33258荧光染色观察H_2O_2引起的细胞凋亡形态学改变及PCF对凋亡的影响：蛋白质印迹法检测p38MAPK、磷酸化p38MAPK及c-fos蛋白表达；Real-Time PCR检测c-fos mRNA表达；流式细胞术检测caspase-3的活性。结果正交实验结果表明，8J·cm~(-2) UVA照射HaCaT细胞后18 h为最佳凋亡模型；1.42～5.69 mmol·L~(-1)剂量范围内的PCF可明显抑制UVA引起的HaCaT细胞凋亡及细胞内活性氧的产生(P＜0.05)；PCF对H_2O_2引起的核固缩等细胞凋亡形态学改变有显著抑制作用；预先加入SB203580和Ac-DEVD-CHO可明显抑制UVA诱导的HaCaT细胞DNA Ladder的形成；1.42～5.