2±48.9、936.6±93.7、727.0±75.9、747.3±63.1、957.3±55.3,心肌细胞凋亡率(%)分别为25.5±3.2、71.8±5.5、42.8±6.1、54.1±4.1、82.8±9.7,与H/R组比较,HPC组、TGF-β1-Pre组的LDH活性、心肌细胞凋亡率显著降低(P<0.05),HIF-1α蛋白表达水平升高(P0.05)。结论:不论在常氧条件还是在缺氧环境下,TGF-β1均可以增加HIF-1α的蛋白表达水平,并且在缺氧复氧诱导所致的心肌细胞损伤中发挥抗凋亡作用,这种作用与调控HIF-1α的蛋白水平有关。
直接重编程是指将一种终末分化的细胞直接转变成另一种终末分化的细胞,这一技术的产生为细胞移植在临床中的应用提供了新的细胞来源。在成神经细胞分化的研究中主要依靠病毒载体,而病毒载体本身具有潜在的安全隐患,使该技术的应用受到限制,纳米粒具有安全、高效等优点,已经受到越来越多的关注。本文重点围绕神经细胞的直接重编程展开研究,通过制备乙二胺修饰的阳离子化紫菜多糖,并将其作为基因载体携神经相关转录因子,将小鼠成纤维细胞直接重编程为神经细胞,主要分为四个部分:第一章综述本章对基因治疗中载体的发展进行了简要综述,比较了不同载体的优缺点,对各载体的应用作了简单介绍;并对可用于治疗神经系统疾病的细胞来源,不同来源细胞的优缺点以及细胞来源途径的发展趋势及面临的问题进行了简要叙述,为本学位论文设计思想的提出及后续实验工作的开展奠定基础。第二章阳离子化紫菜多糖的制备及表征本项目研究以紫菜多糖为对象,采用高碘酸钾氧化法对紫菜多糖进行氧化,再利用乙二胺及精胺两种阳离子化试剂分别对氧化后的紫菜多糖进行阳离子化,得到乙二胺阳离子化紫菜多糖(Ed-PYP)和精胺阳离子化紫菜多糖(Sm-PYP),采用傅里叶变换红外光谱分析仪对两种阳离子化的多糖进行结构检测,采用Zeta电位粒径仪对其进行表征,为进一步研究阳离子化紫菜多糖在基因载体中的应用打下基础。第三章乙二胺阳离子化的紫菜多糖作为基因载体的初步探究以阳离子化多糖为载体,成纤维细胞为种子细胞,通过琼脂糖凝胶电泳对Ed-PYP/pDNA复合物表征,采用MTT实验对其进行毒性检测,实验结果初步表明其具有载基因能力。通过绿色荧光蛋白(EGFP)及ELISA分别从可视化角度及蛋白水平来评价Ed-PYP/pDNA复合物的体外转染效率,结果表明在Ed-PYP/pDNA质量比为40:1,其体外转染效率为最佳且优于PEI及Lip2000。通过质粒DNA的荧光标记物YOYO-1以及多种特异性抑制剂考察Ed-PYP/pDNA纳米粒(40:1)的穿膜机制及胞内转运机理。结果表明,Ed-PYP/pDNA复合物是通过网格蛋白以及小窝蛋白介导的內吞途径进入胞内,而其在胞内的转运过程是由内涵体-溶酶体系统、细胞骨架结构、中间纤维结构以及动力蛋白多系统参与的。第四章成纤维诱导分化为神经的研究根据前文研究结果,将Ed-PYP与神经相关转录因子的复合物按最佳比例(40:1)混合制成纳米粒(Ed-PYP/pABF、Ed-PYP/pABT)用于转染成纤维细胞,拟对其进行成神经诱导分化,经琼脂糖凝胶电泳、TEM、Zeta电位粒径仪等手段对其进行表征,结果与预实验吻合。通过细胞形态观察及ELISA检测表明诱导第14天时效果最佳。通过免疫荧光以及蛋白免疫印迹进一步鉴定诱导后的成纤维细胞,结果表明,阳离子化紫菜多糖携神经相关转录基因可将成纤维细胞直接重编程为神经细胞。本研究为细胞移植治疗神经系统相关疾病提供了丰富的细胞来源。
Sall4(Spalt-like

AZD6244核磁共振 selleck激酶抑制剂 transcription factor 4)是一种C2H2型锌指蛋白转录因子,其对干细胞系的建立和多能性维持有重要作用。Sall4可以在组织中广泛表达,它有多个可变剪切体,在人和小鼠上有SALL4A和SALL4B两个剪切体(Ma

et al.,2006;Rao et al.,2010),SALL4B与SALL4A相比缺失了第二外显子的大部分区域,其功能对多能性的维持起着非常重要的作用。Otx2(Orthodenticle BYL719临床试验 homeobox 2)属于Otx转录因子超家族成员(Finkelstein et al.,1990;Simeone et al.,1992;Simeone et al.,1993),该家族成员在感光细胞和延髓脑区的早期发育中起到了重要作用(Matsui et al.,1989;Gronwald et al.,1988)。有文献报道,Otx2蛋白参与调控小鼠初始态多能干细胞与激发态多能干细胞之间的转变过程,该调控对平衡小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)的自我更新和多向分化潜能起着至关重要的作用(Dario et al.,2012)。我们的研究旨在克隆猪SALL4基因的两种剪切体SALL4A和SALL4B,研究SALL4不同剪切体对OTX2基因的调控关系。本研究证明了猪SALL4不同剪切体的存在,还证明了SALL4对OTX2基因的直接调控的关系,丰富了猪多能干细胞调控网络信息,为研究猪干细胞多能性和重编程调控机制奠定基础。本研究主要获得的结果如下:1.