进一步验证靶基因2.1双荧光素酶报告基因分析结果显示,48h后Wt TRAF2 3’-UTR+miRNA-502实验组荧光素酶的表达水平下调明显(P<0.05),其它三组无明显变化趋势(P>0.05),此结果以显示野生型TRAF2在miRNA-502作用下出现了显著的变化,而突变型TRAF2未出现变化。2.2 miRNA-502 mimic组中TRAF2的m RNA及蛋白水平的表达较对照组均明显selleck激酶抑制剂降低(P<0.05)。3.TRAF2与NF-κB(p-p65)在NP细胞凋亡中的相关性1)体外培养人椎间盘NP细胞株,通过转染TRAF2 si RNA,将实验组分为两组,control组、si RNA组。通过q RT-PCR结果比较了两组的TRAF2的m RNA水平的表达。结果显示si RNA组m RNA水平较对照组明显降低(P<0.05)。此实验说明si RNA具有明哪里显抑制TRAF2表达的作用。2)体外培养人椎间盘NP细胞株,在TNF-α诱导细胞凋亡的作用下,通过转染si RNA,将实验分为三组control组、TNF-α组、TNF-α+si RNA组,ELISA法检测NF-κB活性。结果显示TNF-α组NF-κB活性较对照组升高,而TNF-α+si RNA组NF-κB活性增加程度更为明显(P<0.05)。结论1.TNF-α不仅可促无进髓核细胞凋亡,还可一定程度上激活NF-κB,而抑制NF-κB(BAY 11-7082)又可增加TNF-α诱导的凋亡。2.NF-κB的激活可在TNF-α诱导细胞凋亡中发挥负向调节作用。3.TRAF2是miRNAs-502在NP细胞凋亡中的靶基因,miRNAs-502对TRAF2存在靶向抑制作用,TRAF2对NF-κB的活性表达有抑制作用。4.miRNA-502通过其靶基因TRAF2激活/抑制NF-κB,从而于TNF-α诱导的细胞凋亡中起保护作用。