T细胞耗竭,是抗肿瘤效应减弱的重要机制之一。目的本研究着眼于肿瘤免疫抑制环境中CD8~+T细胞耗竭,深入探讨肝癌中T细胞耗竭特点,为进一步机制研究及寻找潜在的肝癌特异性T细胞耗竭决定基因,开发肝癌临床干预新治疗方法提供支持。方法收集HCC患者(慢性HBV感染)新鲜肿瘤组织与癌旁组织,制备成单个细胞悬液。收集HCC患者及正常人外周血。利用Percoll梯度离心法PI3K/Akt/mTOR抑制剂,分离获得肿瘤浸润性淋巴细胞(Tumor infiltrating Lymphcyte,TIL)及外周血单个核细胞(Peripheral Blood Mononuclear cyte,PBMC)。流式细胞术,检测CD8~+T细胞的增殖能力(Ki67)、凋亡水平(A-caspase-3)、产生效应细胞因子的能力(IFN-γ,TNF-α,点击此处IL-2),以及抑制性受体(免疫检查点分子PD1,TIM3,CTLA4,LAG3)的表达水平。根据细胞表面PD1、TIM3的表达,流式分选非耗竭与耗竭的肝癌浸润性CD8~+T细胞,转录组测序,分析测序结果,获得CD8~+T细胞耗竭相关基因。生物信息学分析肝癌浸润性CD8~+T细胞耗竭的特点。获取GEO数据库中,HBV相关HCC浸润性CBMS-345541分子量D8~+T细胞的单细胞测序结果,分析慢性HBV感染非肝癌组织浸润CD8~+T细胞与慢性HBV感染肝癌组织浸润CD8~+T细胞耗竭的异同。结果慢性HBV感染肝癌患者新鲜肿瘤组织与癌旁组织浸润的CD8~+T细胞处于功能耗竭状态,抑制性分子表达升高(PD1、TIM3、CTLA4、LAG3),细胞增殖能力减弱(Ki67),凋亡水平升高(A-caspase-3),分泌效应细胞因子的(IFN-γ、TNF-α、IL-2)能力减弱。