方法取对数生长期Hep-2细胞,接种至6孔板,待细胞融合达80%～90%时进行分组,实验共分为A20siRNA组、NC siRNA组、对照组,A20 siRNA组、NC siRNA组应用Lipofectamine RNAi MAX转染试剂分别转染A20siRNA、NC siRNA,转染操作严格按照试剂盒说明书操作,对照组不做任何处理。转染后48 h,采TPCA1用qRT-PCR法和Western blotting法分别检测A20 mRNA、蛋白,CCK8实验、平板克隆实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell小室测定细胞侵袭能力。结果与NC siRNA组及对照组比较,A20 siRNA组A20 mRNA、蛋白表达降低,24、48、72 h的OD值降低,细胞G0/Ro 61-8048核磁G1期比例升高,细胞S期、G2/M期比例降低,穿膜细胞数降低(P均<0. 05)。结论沉默A20基因能够抑制Hep-2细胞增殖和侵袭,缩短细胞周期。
MircroRNA (miRNA)是一段长度约为22个nt的小型非编码RNA,广泛存在于真核生物中,具有调节基因表达的作用。对miRNA的鉴定、功能分析和调控机理研究和已成为当今生物领域的热点。miR-302/367cluster属于胚胎干细胞特异性细胞周期调控miRNAs家族成员(embryonic stem cell-specific cell cycle-regulating family of microRNAs,ESCC miRNAs),通常由5个成员miR-302a、miR-302b、miR-302c、miR-302d及miR-367组成,大多分布在脊椎动物中。